一種川穹嗪的快速檢測方法

一種川穹嗪的快速檢測方法
【技術領域】
[0001] 本發明涉及一種基于快速熱解-氣相色譜-質譜聯用技術（PY-GC/MS法）快速檢 測川穹嗪含量的方法。
【背景技術】
[0002] 川穹為傘形科蒿木屬植物的根莖，被中醫稱為血中之氣藥，具有活血行氣、消散淤 血、祛風止痛之功效，其主要活性成分為川穹嗪，化學學名2, 3, 5, 6-四甲基吡嗪。已有的研 究證實，川穹嗪具有活血化瘀，抗血小板凝集，擴張小動脈，改善微循環，抗氧化，拮抗鈣離 子及抗纖維化等作用。川穹嗪作用機制比較復雜，目前在臨床上主要應用于治療和預防各 種血管性疾病，效果較好。
[0003] 最近的研究表明川穹嗪對神經系統有較好的保護作用，例如對中樞神經系統的物 理擠壓損傷，有可能是通過上調損傷區域腦組織的促進神經細胞修復的腦源性神經營養因 子（BDNF)、堿性成纖維生長因子（bFGF)基因表達等達到修復腦損傷；川穹嗪對周圍神經系 統也有較好的保護作用，其作用靶點有可能與背根神經節P2X3受體相關。此外，川穹嗪對 視網膜變性、癲癇、糖尿病引起的神經系統病變等其他神經褪行性疾病均有保護作用。川穹 嗪及其復方制劑非常有可能成為神經系統的保護藥物，因此，針對川穹嗪的快速、高效檢測 是非常必要的。
[0004] 現有對川穹嗪的檢測和分析主要采用高效液相的方法。受檢測設備的限制，往往 需要對樣品進行較為復雜的樣品前處理，包括：超聲、溶解和提取、調節PH值、過濾等步驟； 隨后根據川穹嗪標準品的保留時間和峰面積，定性和定量的判斷樣品中川穹嗪的含量。該 液相分析法的主要缺點是樣品處理過程復雜、總體分析時間長。
[0005] 快速熱解-氣相色譜/質譜聯用技術（PY-GC/MS)是一種高效的檢測易揮發性成 分的技術，近年來發展迅速。低溫下的熱解過程是一種非常有效的熱分離手段，通過控制 熱解的溫度和時間可以實現低沸點的復雜混合物的初步的氣-液或氣-固相分離；為氣相 色譜提供一種在線的和實時的樣品前處理和初步分離能力。分析檢測過程中的熱解時間、 溫度、升溫速率、載氣流速、分流比、離子化溫度等對分析結果的影響是很大的。因此，基于 PY-GC/MS技術的特點，目前亟需提出一種針對川穹嗪的快速、微量檢測方法。

【發明內容】

[0006] 本發明的目的在于提供一種川穹嗪的快速檢測方法，并基于此，初步判斷川穹質 量的高低。
[0007] 為達到上述目的，本發明采用了以下技術方案：
[0008] 1)準確稱取川穹或川穹制品0. 01~1.0 Omg得樣品，將樣品加入熱解杯中；
[0009] 2)采用快速熱解-氣相色譜-質譜聯用儀對加入熱解杯中的樣品進行測定；
[0010] 3)經過步驟2)后，根據測定的原始色譜數據及質譜數據，定性樣品中川穹嗪的色 譜峰，并獲得樣品中川穹嗪的相對含量。 toon] 所述樣品為塊狀或粉末狀固體。
[0012] 所述熱解的條件為：熱解溫度為150~400 °C，熱解時間為0. 1~2min。
[0013] 所述氣相色譜的工作條件為：載氣為流速0. 1~4. OmL/min的氦氣，分流比為0~ 500 :1，升溫程序為：初始溫度為40~60°C，并保持O~3min，然后以彡30°C /min升至 150°C，然后以彡10°C /min升至300°C，然后以彡30°C /min升至310°C。
[0014] 所述質譜的工作條件為：采用EI源、正離子檢測，電子能量為50~80eV，離子源 溫度為200~250°C，單四級桿溫度為130~200°C，掃描方式為全掃描方式，電子倍增器電 壓為1070~3120V，溶劑延遲為0· 1~lOmin。
[0015] 所述相對含量采用面積歸一化方法進行計算。
[0016] 所述川穹嗪的色譜峰的定性采用NIST08軟件自動匹配計算。
[0017] 本發明的有益效果體現在：
[0018] 1)總分析時間短，提高分析效率。現有方法是將川穹通過超聲萃取或溶劑萃取， 調節pH值、過濾處理后，利用高效液相色譜（HPLC)或高效液相色譜-質譜聯用（HPLC-MS) 技術，或薄層層析-光譜聯用技術（TLC-SP)等檢測其有效成分；該方法的一般分析時間為 4~8小時。本發明中通過熱解方法直接對川穹或川穹制品中的川穹嗪進行分析，大大節省 了分析時間，常規分析時間為〇. 5~1小時，提高了分析效率。
[0019] 2)所需樣品量少，靈敏度好。現有方法因需要先分離得到川穹嗪粗品溶液，因此需 要的樣品量較大，通常是幾克到幾十克不等；本發明方法的分析所用樣品量一般為〇. 01~ lmg，提高了分析靈敏度。
[0020] 3)本發明優化了熱解、色譜、質譜等檢測條件，可以快速定性所需的色譜峰，實現 了快速和準確檢測。
【具體實施方式】
[0021] 下面結合實施例對本發明作進一步說明。
[0022] 實施例
[0023] -種基于PY-GC/MS檢測川穹嗪的方法，以中藥材川穹為例，但本發明的保護范圍 不局限于該實驗，具體步驟如下：
[0024] 一、樣品準備
[0025] 將取得的川穹塊（陜西瑞康生物工程有限公司，西安）準確稱取 1.0 Omg (±0. 02mg)放入50 μ L的熱解小杯中；
[0026] 二、熱解：
[0027] 熱裂解爐采用 Frontiers 的 PY2020is ;
[0028] ①熱解溫度：320 °C ;
[0029] ②熱解時間：0· 2〇min。
[0030] 三、分離、檢測
[0031] 色譜：
[0032] 氣相色譜采用安捷倫7890A :
[0033] ①分析柱是DB-5MS彈性石英毛細管柱（30m*0. 25id*0. 25 μ m);
[0034] ②載氣：高純氦氣，流速為1.0 mL/min ;
[0035] ③進樣方式為分流進樣，分流比為100 :1 ;
[0036] ④進樣口溫度為280 °C，傳輸線溫度為290 °C ;
[0037] ⑤程序升溫：初始溫度為60°C，保持lmin，然后以30°C /min升至150°C，然后以 10°C /min 升至 300°C，然后以 30°C /min 升至 310°C。
[0038] 質譜（采用安捷倫5975C):
[0039] ① EI源，正離子檢測，電子能量為70eV ;
[0040] ②離子源溫度為230°C，單四級桿溫度為150°C ;
[0041] ③掃描方式為全掃描方式；
[0042] ④電子倍增器電壓為2082V，溶劑延遲為3min。
[0043] 四、數據分析及處理
[0044] 色譜圖的保留時間和積分面積由工作站自動完成，利用NIST08譜庫定性色譜峰。 各揮發性成分的相對含量通過面積歸一化法得到。
[0045] 本樣品川穹熱解組分中可辨認的峰為35個，成分及其保留時間列于表1。保留時 間及峰面積用安捷倫Chemstation計算，相對含量用面積歸一化的方法計算。
[0046] 表1.川穹中揮發性成分的組成和含量U1= 5. 889為川穹嗪）


[0050] 五、精密度、重現性及穩定性實驗
[0051] 1.精密度實驗：以取自同一川穹的樣品5份，按照上述方法連續進樣5次，對相對 峰面積大于0. 5%的35個色譜峰進行分析，其相對保留時間和相對峰面積的RSD (相對標準 偏差）分別在〇~〇. 88%和1~4%之間，說明本發明方法精密度良好。
[0052] 2.重現性實驗：取同一批次川穹的樣品5份，按照上述方法連續進樣5次。結果 35個色譜峰的相對保留時間和相對峰面積的RSD分別在0~2. 7%和0. 51~3. 6%之間， 說明本發明方法重現性良好。
[0053] 3.穩定性實驗：取制備好的樣品1份，分別在0、2、4、8、12、24h進樣測定，結果35 個色譜峰的相對保留時間和相對峰面積的RSD均小于2. 3%，說明本發明方法在24h內測定 是穩定的。
[0054] 從根本上說川穹中的主要活性成分是川穹嗪，其可作為川穹品質的主要判斷標準 之一。不同的川穹樣品因產地、季節、炮制方式的不同，其含水量、密度等都有細微的不同， 因此，需要的熱解、分離和分析條件均不相同，據此得出本發明中的條件范圍。
[0055] 本發明選擇PY-GC/MS技術對川穹嗪含量進行檢測，是針對實際生產、生活中川穹 因產地、季節、炮制等不同而品質不同的問題，提供一種川穹嗪的快速、微量的檢測方法，進 而初步判斷川穹的質量。本發明具有操作簡單，檢測限低，實驗重現性好，實驗數據直觀可 靠等特點，特別適用于微量樣品檢測（樣品量可低至10 μ g)，并可用于對不同樣品間的質 量差別進行定量的比較，應用性廣，為川穹的質量標準和現代化應用提供了一條可以參考 的思路和方法。
【主權項】
1. 一種川穹嗪的快速檢測方法，其特征在于：包括以下步驟： 1) 準確稱取川穹或川穹制品0.0 l~1.0 Omg得樣品，將樣品加入熱解杯中； 2) 采用快速熱解-氣相色譜-質譜聯用儀對加入熱解杯中的樣品進行測定； 3) 經過步驟2)后，根據測定的原始色譜數據及質譜數據，定性樣品中川穹嗪的色譜 峰，并獲得樣品中川穹嗪的相對含量。2. 根據權利要求1所述一種川穹嗪的快速檢測方法，其特征在于：所述樣品為塊狀或 粉末狀固體。3. 根據權利要求1所述一種川穹嗪的快速檢測方法，其特征在于：所述熱解的條件為： 熱解溫度為150~400°C，熱解時間為0. 1~2min。4. 根據權利要求1所述一種川穹嗪的快速檢測方法，其特征在于：所述氣相色譜的工 作條件為：載氣為流速〇. 1~4. OmL/min的氦氣，分流比為0~500 :1，升溫程序為：初始溫 度為40~60°C，并保持0~3min，然后以彡30°C /min升至150°C，然后以彡10°C /min升 至300°C，然后以彡30°C /min升至310°C。5. 根據權利要求1所述一種川穹嗪的快速檢測方法，其特征在于：所述質譜的工作條 件為：采用EI源、正離子檢測，電子能量為50~80eV，離子源溫度為200~250°C，單四級 桿溫度為130~200°C，掃描方式為全掃描方式，電子倍增器電壓為1070~3120V，溶劑延 遲為0? 1~lOmin。6. 根據權利要求1所述一種川穹嗪的快速檢測方法，其特征在于：所述相對含量采用 面積歸一化方法進行計算。7. 根據權利要求1所述一種川穹嗪的快速檢測方法，其特征在于：所述川穹嗪的色譜 峰的定性采用NIST08軟件自動匹配計算。
【專利摘要】本發明提供一種川穹嗪的快速檢測方法：1)樣品的準備；2)PY-GC/MS檢測；3)數據分析及定性和定量分析。本發明選擇PY-GC/MS技術對川穹中川穹嗪含量進行檢測，是針對實際生產、生活中川穹因產地、季節、炮制等不同而品質不同的問題，提供一種川穹中川穹嗪快速、微量的檢測方法，進而初步判斷川穹的質量，本發明具有操作簡單，檢測限低，實驗重現性好，實驗數據直觀可靠等特點，特別適用于微量樣品檢測，可用于對不同產地、品種、批次的川穹樣品間的質量差別進行初步的比較，應用性廣，為川穹的質量標準和現代化應用提供了一種初步的判讀依據。
【IPC分類】G01N30/88, G01N1/44
【公開號】CN105158396
【申請號】CN201510598956
【發明人】陳福欣, 龔頻, 周安寧, 侯彬彬
【申請人】西安科技大學
【公開日】2015年12月16日
【申請日】2015年9月18日