一種蛇床子素的快速檢測方法
【技術領域】
[0001] 本發明涉及一種基于快速熱解-氣相色譜-質譜聯用技術（PY-GC/MS法）快速檢 測蛇床子素含量的方法。
【背景技術】
[0002] 蛇床子是中國長期以來用于治療男性功能障礙的一種中藥，其提取物中主要有效 成分為蛇床子素。蛇床子素是一種天然香豆素類化合物，化學名稱為7-甲氧基-8-(3-甲 基-2- 丁烯基）香豆素，是已知的一種具有多種藥理學和生化活性的天然化合物，具有潛在 治療疾病的作用。天然蛇床子素主要存在于14種傘形科和17種蕓香科植物中，是一類分 布廣泛、藥理作用廣泛和使用廣泛的中藥活性成分。
[0003] 現代藥理學研究表明，除了傳統的應用領域外，蛇床子素還具有抗癌、抗氧化、抗 炎和免疫調節等活性。同時它還具有保護肝臟和保護神經的作用，也可抑制絕經后骨質疏 松癥，并改善脂質代謝。蛇床子素多種多樣的藥理學作用使其在新藥開發中，成為一類非常 有前景的天然先導化合物。此外，已有的含有蛇床子素的制劑應用廣泛，包括：婦炎平、復方 芙蓉泡騰栓、解毒止癢散貼臍、克癬寧洗劑、黃四子土參湯、四子填精膠囊等等。因此，針對 蛇床子素及其各種制劑開發一種高效、快速的分析方法是十分必要的。
[0004] 現有對蛇床子素的分析檢測主要采用高效液相的方法。受分析儀器的限制，往往 需要對樣品進行較為復雜的前處理，通過萃取等方法將蛇床子素從藥材或其復方制劑中分 離，隨后采用HPLC/UPLC/SFCLC等液相色譜方法分析。該分析方法的樣品處理過程復雜、總 體分析時間長。
[0005] 快速熱解-氣相色譜/質譜聯用技術（PY-GC/MS)是一種高效的檢測易揮發性成 分的技術，近年來發展迅速。低溫下的熱解過程是一種非常有效的熱分離手段，通過控制 熱解的溫度和時間可以實現低沸點的復雜混合物的初步的氣-液或氣-固相分離；為氣相 色譜提供一種在線的和實時的樣品前處理和初步分離能力。分析檢測過程中的熱解時間、 溫度、升溫速率、載氣流速、分流比、離子化溫度等對分析結果的影響是很大的。因此，基于 PY-GC/MS技術的特點，目前亟需提出一種針對蛇床子素的快速、微量檢測方法。
【發明內容】
[0006] 本發明的目的在于提供一種蛇床子素的快速檢測方法，并基于此，初步判斷蛇床 子等中藥材及其制劑質量的高低。
[0007] 為達到上述目的，本發明采用了以下技術方案：
[0008] 1)準確稱取蛇床子或其復方制劑0. 02~5. OOmg得樣品，將樣品加入熱解杯中；
[0009] 2)采用快速熱解-氣相色譜-質譜聯用儀對加入熱解杯中的樣品進行測定； [0010] 3)經過步驟2)后，根據測定的原始色譜數據及質譜數據，定性樣品中蛇床子素的 色譜峰，并獲得樣品中蛇床子素的相對含量。
[0011] 所述樣品為塊狀或粉末狀固體。
[0012] 所述熱解的條件為：熱解溫度為180~400°C，熱解時間為0. 1~2min。
[0013] 所述氣相色譜的工作條件為：載氣為流速0. 1~4. OmL/min的氦氣，分流比為0~ 500 :1，升溫程序為：初始溫度為40~70°C，并保持O~3min，然后以彡20°C /min升至 300。。。
[0014] 所述質譜的工作條件為：采用EI源、正離子檢測，電子能量為50~85eV，離子源 溫度為215~245°C，單四級桿溫度為145~185°C，掃描方式為全掃描方式，電子倍增器電 壓為1075~2980V，溶劑延遲為O~6min。
[0015] 所述相對含量采用面積歸一化方法進行計算。
[0016] 所述蛇床子素的色譜峰的定性采用NIST08軟件自動匹配計算。
[0017] 本發明的有益效果體現在：
[0018] 1)快速分離。現有方法是將蛇床子或其制劑通過萃取方法初步分離得到蛇床子素 溶液，過濾處理后，利用液相色譜分析，或薄層層析-光譜聯用技術（TLC-SP)等檢測其有效 成分；該方法的一般分析時間為4~24小時。本發明中通過熱分離方法直接對蛇床子或其 制劑的低沸點物質進行初步分離，隨后采用氣相色譜進一步分離蛇床子素，大大節省了分 析時間，常規分析時間為〇. 1~〇. 3小時，提高了分析效率。
[0019] 2)靈敏度好，所需樣品量少。HPLC檢測方法受到儀器的限制，一般需要先分離得 到粗品溶液，因此需要的樣品量較大，通常是幾克到幾十克不等；本發明方法的分析所用樣 品量一般為〇. 02~lmg，提高了分析靈敏度。
[0020] 3)本發明優化了熱解、色譜、質譜等檢測條件，可以快速定性所需的色譜峰，實現 了快速和準確檢測。
【具體實施方式】
[0021] 下面結合實施例對本發明作進一步說明。
[0022] 本發明針對蛇床子素熔沸點相對較低且易揮發的特點，采用快速熱解-氣相色譜 /質譜聯用技術（PY-GC/MS)，充分將熱分離和色譜分離相結合，實現蛇床子素的快速分離， 隨后采用質譜定性和定量檢測，達到快速、微量檢測的目的。
[0023] 實施例
[0024] 一種基于PY-GC/MS檢測蛇床子素的方法，以中藥材蛇床子為例，但本發明的保護 范圍不局限于該實施例，具體步驟如下：
[0025] 一、樣品準備
[0026] 將取得的蛇床子（陜西紫杉科技股份有限公司，西安）準確稱取 1.0 Omg (±0. 02mg)放入50 μ L的熱解小杯中；
[0027] 二、熱解：
[0028] 熱裂解爐采用 Frontiers 的 PY2020is ;
[0029] ①熱解溫度：240 °C ;
[0030] ②熱解時間：0· 40min。
[0031] 三、分離、檢測
[0032] 色譜：
[0033] 氣相色譜采用安捷倫7890A :
[0034] ①分析柱是HP-5MS彈性石英毛細管柱（30m*0. 25id*0. 25 μ m);
[0035] ②載氣：高純氦氣，流速為1.0 mL/min ;
[0036] ③進樣方式為分流進樣，分流比為200 :1 ;
[0037] ④進樣口溫度為280 °C，傳輸線溫度為290 °C ;
[0038] ⑤程序升溫：初始溫度為60°C，保持2min，然后以15°C /min升至300°C。
[0039] 質譜（采用安捷倫5975C):
[0040] ①EI源，正離子檢測，電子能量為70eV ;
[0041] ②離子源溫度為230°C，單四級桿溫度為150°C ;
[0042] ③掃描方式為全掃描方式；
[0043] ④電子倍增器電壓為2532V，溶劑延遲為4min。
[0044] 四、數據分析及處理
[0045] 色譜圖的保留時間和積分面積由工作站自動完成，利用NIST08譜庫定性色譜峰。 各揮發性成分的相對含量通過面積歸一化法得到。
[0046] 本樣品蛇床子熱解組分中可辨認的峰為35個，成分及其保留時間列于表1。保留 時間及峰面積用安捷倫Chemstation計算，相對含量用面積歸一化的方法計算。
[0047] 表1.蛇床子中揮發性成分的組成和含量U1= 13. 312 :蛇床子素）
[0048]
[0049] LlN 丄UOldbydO A I ^ 4/0 JM
[0050] LlN 丄UOldbydO /\ I ^ 〇/〇 JM
[0051] 五、精密度、重現性及穩定性實驗
[0052] 1.精密度實驗：以取自同一蛇床子的樣品5份，按照上述方法連續進樣5次，對相 對峰面積大于0. 5%的35個色譜峰進行分析，其相對保留時間和相對峰面積的RSD (相對標 準偏差）分別在2. 43~4. 75%和2. 76~4. 67%之間，說明本發明方法精密度良好。
[0053] 2.重現性實驗：取同一批次蛇床子的樣品5份，按照上述方法連續進樣5次。結果 35個色譜峰的相對保留時間和相對峰面積的RSD分別在1. 26~4. 98%和2. 54~4. 59% 之間，說明本發明方法重現性良好。
[0054] 3.穩定性實驗：取制備好的樣品1份，分別在0、2、4、8、12、24h進樣測定，結果35 個色譜峰的相對保留時間和相對峰面積的RSD均小于4. 39%，說明本發明方法在24h內測 定是穩定的。
[0055] 中藥材因產地、季節、炮制方式的不同，其含水量、密度等都有細微的不同，繼而其 復方制劑中的含量也有所不同。因此，需要的熱解、分離和分析條件均不相同，據此得出本 發明中的條件范圍。
[0056] 本發明具有操作簡單，檢測限低，實驗重現性好，實驗數據直觀可靠等特點，特別 適用于微量樣品檢測（樣品量可低至20 μ g)，并可用于對不同樣品間的質量差別進行定量 的比較，應用性廣，為該類中藥材的質量標準和現代化應用提供了一條參考的思路和方法。
【主權項】
1. 一種蛇床子素的快速檢測方法，其特征在于：包括以下步驟： 1) 準確稱取蛇床子或其復方制劑0. 02~5. OOmg得樣品，將樣品加入熱解杯中； 2) 采用快速熱解-氣相色譜-質譜聯用儀對加入熱解杯中的樣品進行測定； 3) 經過步驟2)后，根據測定的原始色譜數據及質譜數據，定性樣品中蛇床子素的色譜 峰，并獲得樣品中蛇床子素的相對含量。2. 根據權利要求1所述一種蛇床子素的快速檢測方法，其特征在于：所述樣品為塊狀 或粉末狀固體。3. 根據權利要求1所述一種蛇床子素的快速檢測方法，其特征在于：所述熱解的條件 為：熱解溫度為180~400°C，熱解時間為0. 1~2min。4. 根據權利要求1所述一種蛇床子素的快速檢測方法，其特征在于：所述氣相色譜的 工作條件為：載氣為流速〇. 1~4. OmL/min的氦氣，分流比為0~500 :1，升溫程序為：初始 溫度為40~70°C，并保持0~3min，然后以彡20°C /min升至300°C。5. 根據權利要求1所述一種蛇床子素的快速檢測方法，其特征在于：所述質譜的工作 條件為：采用EI源、正離子檢測，電子能量為50~85eV，離子源溫度為215~245°C，單四 級桿溫度為145~185 °C，掃描方式為全掃描方式，電子倍增器電壓為1075~2980V，溶劑 延遲為0~6min。6. 根據權利要求1所述一種蛇床子素的快速檢測方法，其特征在于：所述相對含量采 用面積歸一化方法進行計算。7. 根據權利要求1所述一種蛇床子素的快速檢測方法，其特征在于：所述蛇床子素的 色譜峰的定性采用NIST08軟件自動匹配計算。
【專利摘要】本發明提供一種蛇床子素的快速檢測方法：1)樣品的準備；2)PY-GC/MS檢測；3)數據分析及定性和定量分析。本發明選擇PY-GC/MS技術對蛇床子素含量進行檢測，是針對實際生產、生活中蛇床子等以蛇床子素為主要活性成分的中藥材，因產地、季節、炮制等不同而品質不同的問題，提供一種蛇床子素快速、微量的檢測方法，進而初步判斷此類中藥材的質量，本發明具有操作簡單，檢測限低，實驗重現性好，實驗數據直觀可靠等特點，特別適用于微量樣品檢測，可用于對不同產地、品種、批次的蛇床子樣品間的質量差別進行初步的比較，應用性廣。
【IPC分類】G01N30/02
【公開號】CN105136935
【申請號】CN201510598230
【發明人】龔頻
【申請人】陜西科技大學
【公開日】2015年12月9日
【申請日】2015年9月18日