一種血紅蛋白d的檢測方法【
技術領域：
】[0001]本發明屬于醫學檢驗
技術領域：
，具體涉及一種血紅蛋白D的檢測方法。【
背景技術：
】[0002]血紅蛋白病是由于血紅蛋白的質和量發生異常而引起的一種遺傳性貧血綜合癥，現代醫學稱其為分子病。這種病在我國十分常見，目前常見的血紅蛋白病有鐮狀細胞貧血、高鐵血紅蛋白癥、氧親和力異常血紅蛋白癥、HbE和HbC等。HbDebrousse(血紅蛋白D變異體)是近年來出現的一種罕見的血紅蛋白病。PhilippeLacan等在美國血液學雜志發表了一篇題目為《HemoglobinDebrousse(β96[FG3]Leu-Pro):ANewUnstableHemoglobinWithTwofoldIncreasedOxygenAffinity》的論文，該論文公開了HbDebrousse是一種外顯子基因突變(hgl9:chrll5，247，832)所致的血紅蛋白病，造成在β鏈96號密碼子發生基因序列突變CD96CTG>CCG(HbDebrousse(beta96(FG3)Leu>Pro)。[0003]HbDebrousse是一種不穩定血紅蛋白與高親氧性物質結合而產生的變異體，是在β鏈96號密碼子發生基因序列突變CD96CTG>CCG(beta96(FG3)Leu>Pro)的血紅蛋白病。血紅蛋白病重癥患者在胎兒期就可能死亡，有的終生靠輸血維持生命；病癥輕者，面色蒼白，全身乏力，隨時危及生命。因此，找出檢測和鑒別血紅蛋白病的可靠方法具有重要的意義。[0004]目前，檢測血紅蛋白變異體的方法有很多，如電泳分析法、反相高效液相色譜法和質譜分析法。電泳法分離異常血紅蛋白主要是依賴其不同的帶電狀態進行分離；而反相高效液相色譜法分離異常血紅蛋白主要是基于血紅蛋白鏈的疏水特性。但是，對于罕見的HbDebrousse,目前僅有基因測序方法可以檢測出HbDebrousse。由于基因測序法存在操作繁瑣、檢測成本高和對操作人員要求高的缺陷，對于HbDebrousse的臨床檢測存在諸多不便。[0005]經研究發現，HbDebrousse會干擾糖化血紅蛋白的檢測，影響糖尿病患者的血糖監測，不利于糖尿病患者的疾病監控和治療。因此，尋找出一種操作簡單、便捷，檢測結果準確的HbDebrousse檢測和鑒別方法是當前亟需解決的難題。【
發明內容】[0006]為了彌補現有技術中血紅蛋白D檢測方法操作繁瑣和檢測成本高的缺陷，本發明的目的在于提供操作簡單、檢測結果準確的血紅蛋白D的檢測方法。[0007]本發明提供的血紅蛋白D的檢測方法，包括以下步驟:[0008]SI標本溶液處理:取體積比為9:I的血標本和乙二胺四乙酸溶液完全混勻，得混合血標本，接著取混合血標本加入去離子水稀釋100倍；[0009]S2樣品測定:[0010]高效液相色譜儀的色譜條件:采用雙栗系統，所用流動相A為有機溶劑，流速為0.15-2.0mL/min，流動相B為純化水，流速為0.15-2.0mL/min，使用硼酸基親和色譜柱，柱流速為0.15-1.0mL/min,溫度為25-30°C，進樣量為20μL，設定色譜檢測波長為413-415nm，分別將標本溶液進行樣品測定。[0011]進一步地，所述步驟S2中樣品測定還包括內標FASC質控液、ControlI質控液和ControlII質控液的測定步驟。[0012]進一步地，所述步驟S2中流動相A的有機溶劑由0.0006-0.0009%BIS-TRIS鹽酸鹽、0.025-0.03%氰化鉀和96.91-97.44%純化水組成，有機溶劑進一步優選為0.0008%BIS-TRIS鹽酸鹽、0.028%氰化鉀和97.12%純化水組成。[0013]進一步地，所述步驟S2中有機溶劑的流速為1.5mL/min。[0014]進一步地，所述步驟S2中純化水的流速為1.5mL/min。[0015]進一步地，所述步驟S2柱流速為0.8mL/min。[0016]進一步地，所述步驟S2中溫度為25°C。[0017]進一步地，所述步驟S2色譜檢測波長為413nm。[0018]本發明中的BIS-TRIS鹽酸鹽的英文名稱為BisTriHCL,其CAS號為124763-51-5。[0019]與現有技術相比，本發明的血紅蛋白D檢測方法具有以下優點:本發明提供的血紅蛋白D的檢測方法為患有罕見的血紅蛋白D的患者提供了新的檢測方法，而且本發明的檢測方法還具有操作簡單、結果準確和檢測成本低的優點，更有利于臨床應用。【附圖說明】[0020]圖1為高效液相色譜儀法檢測HbDebrousse的色譜圖；[0021]圖2為HbDebrousse(beta96(FG3)Leu>Pro)的基因片段圖。【具體實施方式】[0022]以下通過具體實施例進一步描述本發明，本發明不僅僅限于以下實施例。在本發明的范圍內或者在不脫離本發明的內容、精神和范圍內，對本發明進行的變更、組合或替換，對于本領域的技術人員來說是顯而易見的，且包含在本發明的范圍之內。[0023]實施例1、[0024]1、試驗對象:患者是來自廣東省某醫院門診糖尿病患者，男性，42歲，10歲左右曾經有急性肝炎病史，經糖化血紅蛋白檢測，其結果達58mg/dl，抽取患者的全血備用。[0025]2、試驗方法:[0026]SI標本溶液處理:取2.7ml患者的全血加入0.3ml的乙二胺四乙酸溶液完全混勻，接著取出5ul加入995ul去離子水，充分混勻；[0027]S2內標FASC質控液的配制:吸取已溶化的FASC內標質控液1ul加入790ul去離子水，充分混勻；[0028]S3Control1、II質控溶液的配制:吸取已溶化的Control1、II質控溶液各5ul分別加入995ul去咼子水，充分混勾；[0029]S4樣品測定:[0030]高效液相色譜儀的色譜條件:采用雙栗系統，所用流動相A由0.0008%BIS-TRIS鹽酸鹽、0.028%氰化鉀和97.12%純化水組成，流速為1.5mL/min，流動相B為純化水，流速為1.5mL/min，使用硼酸基親和色譜柱，柱流速為0.8mL/min，溫度為25°C，進樣量為20μL，設定色譜檢測波長為413nm，分別將標本溶液、內標FASC質控液和Control1、II質控溶液進行樣品測定。[0031]3、試驗結果:[0032]試驗結果如圖1所示，圖中RT為4.542顯示出異常變異體，經與其他貧血患者和正常人的血紅蛋白色譜圖波峰對比，證明該變異體是HbDebrousse。[0033]實施例2、[0034]1、以實施例1的全血樣品進行基因測序，基因測序方法參照PhilippeLacan(菲利普拉康)在美國血液學雜志發表題目為《HemoglobinDebrousse(β96[FG3]Leu-Pro):ANewUnstableHemoglobinWithTwofoldIncreasedOxygenAffinity》的論文中HemoglobinDebrousse的基因測序方法。[0035]2、試驗結果:[0036]試驗結果如圖2所示，證明了該患者的病因是由于β鏈96號密碼子發生基因序列突變CD96CTG>CCG(HbDebrousse(beta96(FG3)Leu>Pro)所致，檢測結果如本發明的HbDebrousse檢測結果一致，證明本發明提供的血紅蛋白D檢測方法檢測結果準確，同時具有良好的實用性。【主權項】1.一種血紅蛋白D的檢測方法，其特征在于，包括以下步驟:SI標本溶液處理:取體積比為9:I的血標本和乙二胺四乙酸溶液完全混勻，得混合血標本，接著取混合血標本加入去離子水稀釋100倍；S2樣品測定:高效液相色譜儀的色譜條件:采用雙栗系統，所用流動相A為有機溶劑，流速為0.15-2.0mL/min，流動相B為純化水，流速為0.15-2.0mL/min，使用硼酸基親和色譜柱，柱流速為0.15-1.0mL/min,溫度為25-30°C，進樣量為20μL，設定色譜檢測波長為413-415nm，分別將標本溶液進行樣品測定。2.如權利要求1所述的血紅蛋白D的檢測方法，其特征在于，所述步驟S2中樣品測定還包括內標FASC質控液、ControlI質控液和ControlII質控液的測定步驟。3.如權利要求1所述的血紅蛋白D的檢測方法，其特征在于，所述步驟S2中流動相A的有機溶劑由0.0006-0.0009%BIS-TRIS鹽酸鹽、0.025-0.03%氰化鉀和96.91-97.44%純化水組成。4.如權利要求2所述的血紅蛋白D的檢測方法，其特征在于，所述步驟S2中流動相A的有機溶劑由0.0008%BIS-TRIS鹽酸鹽、0.028%氰化鉀和97.12%純化水組成。5.如權利要求1所述的血紅蛋白D的檢測方法，其特征在于，所述步驟S2中有機溶劑的流速為1.5mL/min。6.如權利要求1所述的血紅蛋白D的檢測方法，其特征在于，所述步驟S2中純化水的流速為1.5mL/min07.如權利要求1所述的血紅蛋白D的檢測方法，其特征在于，所述步驟S2中柱流速為0.8mL/min。8.如權利要求1所述的血紅蛋白D的檢測方法，其特征在于，所述步驟S2中溫度為25。。。9.如權利要求1所述的血紅蛋白D的檢測方法，其特征在于，所述步驟S2的色譜檢測波長為413nm。【專利摘要】本發明屬于醫學檢驗
技術領域：
，具體涉及一種血紅蛋白D的檢測方法。本發明的檢測方法的高效液相色譜儀的條件：采用雙泵系統，所用流動相A為有機溶劑，流速為0.15-2.0mL/min，流動相B為純化水，流速為0.15-2.0mL/min，使用硼酸基親和色譜柱，柱流速為0.15-1.0mL/min，溫度為25-30℃，進樣量為20μL，設定色譜檢測波長為413-415nm，分別將標本溶液、內標FASC質控液和Control？I、II質控溶液進行樣品測定。本發明提供的血紅蛋白D檢測方法具有操作簡單、結果準確和檢測成本低的優點，更有利于臨床應用。【IPC分類】G01N30/02,G01N30/06【公開號】CN105136923【申請號】CN201510528056【發明人】張玲【申請人】廣州金域醫學檢驗中心有限公司【公開日】2015年12月9日【申請日】2015年8月24日