一種預測家禽種蛋受精率的方法
【專利說明】[0001] -種預測家禽種蛋受精率的方法 一、技術領域： 本發明設及的是畜牧業領域中家禽養殖技術，具體設及的是利用精子穿過卵黃膜產生 的微孔數預測家禽種蛋受精率的方法。
[000引二、【背景技術】： 雞蛋是人們生活中不可缺少的食品，隨著人民生活水平的提高，雞蛋的需要量不斷增 加，運對于家禽養殖企業來講是機遇，具有規模的家禽養殖企業應運而生。家禽養殖企業的 生產過程中要對種蛋進行解化，種蛋解化率的高低影響企業的生產效益，不論是蛋雞還是 肉雞的繁育都需要保證種蛋解化率持續保持較高水平，否則會造成重大生產事故和嚴重的 經濟損失。一批種蛋入解前，目前通常不對該批次的種蛋受精情況進行預測，運就存在著種 蛋受精率不高的情況下，仍進行種蛋入解的現象，從而難W保證種蛋的高解化率。
[000引S、
【發明內容】
： 本發明的目的是提供一種預測家禽種蛋受精率的方法，運種預測家禽種蛋受精率的方 法用于評價種蛋受精質量，避免低受精率批次的種蛋入解的問題。
[0004] 本發明解決其技術問題所采用的技術方案是：運種預測家禽種蛋受精率的方法： (1)輕輕打開種蛋蛋殼的純端，將蛋內容物輕輕倒出，避免將卵子劃破；利用蛋黃分離 器分開卵子和卵清蛋白； 似在盛有質量百分比濃度為l%NaCl溶液的燒杯中，浸泡卵子3分鐘，除去多余的卵 清蛋白； (3) 轉移步驟（2)處理后的卵子到一個培養皿中，用手輕輕轉動卵子使胚盤區域正好 朝上放置，用解剖針在非胚盤區域偏下穿刺，形成幾個小桐，降低內部卵黃壓力； (4) 用小剪刀，沿胚盤周圍距離胚盤邊緣至少1cm的區域將該部分卵黃膜切下，在質 量百分比濃度為l%NaCl溶液中清洗干凈，除去全部卵黃后得到卵黃膜； (5)將步驟（4)分離得到的卵黃膜放置在載玻片上，滴入數滴l%NaCl，用解剖針輕輕 將卵黃膜展平，避免形成皺權； (6) 用吸管吸走化C1液體，滴入3~5滴20%福爾馬林溶液； (7) 10-20秒后，用吸管吸走福爾馬林溶液，加入幾滴Schiff'S溶液，使卵黃膜充分染 色，控制染色時間，W免染色太深，影響觀察； (8) 在卵黃膜上加上蓋玻片，在100倍光學顯微鏡下觀察經過精卵互作之后形成的微 孔數量，微孔直徑為10~30ul;統計每個卵黃膜上胚盤區域1. 35mm2面積內微孔數量； (9) 重復步驟（1)-(8)，對每批次的種蛋逐個統計每個卵黃膜上胚盤區域1.35mm2面積 內微孔數量，來預測本批次種蛋受精情況；若種蛋卵黃膜上微孔數平均為5,則種蛋的受精 率為70%左右；若微孔數低于0. 5,則種蛋受精率接近于零。
[0005] 上述方案步驟巧）中，在載玻片上滴入質量百分比濃度為3%的多聚甲醒，用蓋玻 片封閉，可W實現長期保存。
[0006] 上述方案步驟巧）中，卵黃膜上的微孔數和種蛋受精率的回歸曲線方程如下： CN105116120A 呪明巾 2/3 頁
其中，y是種蛋受精率，X是種蛋卵黃膜上的微孔數，該回歸曲線的滬=0.9目。
[0007] 有益效果： 1、本發明通過觀察種蛋卵黃膜上的微孔數，能夠較準確預測種蛋的受精率。給母雞 輸入一定數量的精子后，精子利用頂體反應穿過卵黃膜，在內卵黃膜上形成許多微孔，受精 后，未穿過卵黃膜的精子集中在外卵黃膜上。內卵黃膜中屯、有一著色較深的圓形區域即是 胚盤位置，胚盤區域1. 35mm2的范圍內分布大量微孔，微孔直徑為10~30ul。微孔數可W 代表進入母雞輸卵管的精子數，并且與母雞所產種蛋的受精率顯著相關，通過抽測種蛋卵 黃膜上因精子穿過產生的微孔數，可間接預測該批次種蛋的受精率，為采精困難或精液質 量不穩定的家禽種蛋解化提供決策建議，避免低受精率批次的種蛋入解。
[0008] 2、本發明操作簡單、快速，容易上手，所需費用較低，能夠利用小樣本較準確地預 測某批次種蛋的受精率，保障入解蛋受精率在較高水平，降低解化產業的風險成本。
[0009] 四、【附圖說明】： 圖1是卵黃膜微孔數中位數與種蛋受精率的關系圖。
[0010] 五、【具體實施方式】： 下面對本發明做進一步的說明： 運種預測家禽種蛋受精率的方法： (1)輕輕打開種蛋蛋殼的純端，將蛋內容物輕輕倒出，避免將卵子劃破；利用蛋黃分離 器分開卵子和卵清蛋白； 似在盛有質量百分比濃度為l%NaCl溶液的燒杯中，浸泡卵子3分鐘，除去多余的卵 清蛋白； (3) 轉移步驟（2)處理后的卵子到一個培養皿中，用手輕輕轉動卵子使胚盤區域正好 朝上放置，用解剖針在非胚盤區域偏下穿刺，形成幾個小桐，降低內部卵黃壓力； (4) 用小剪刀，沿胚盤周圍距離胚盤邊緣至少1cm的區域將該部分卵黃膜切下，在質 量百分比濃度為l%NaCl溶液中清洗干凈，除去全部卵黃，得到卵黃膜； (5) 將步驟（4)分離得到的卵黃膜放置在載玻片上，滴入數滴l%NaCl，用解剖針輕輕 將卵黃膜展平，避免形成皺權； (6) 用吸管吸走化C1液體，滴入3~5滴20%福爾馬林溶液； (7) 10-20秒后，用吸管吸走福爾馬林溶液，加入幾滴Schiff'S溶液，使卵黃膜充分染 色，控制染色時間，W免染色太深，影響觀察； (8) 在卵黃膜上加上蓋玻片，在100倍光學顯微鏡下觀察經過精卵互作之后形成的微 孔數量，微孔直徑為10~30ul;統計每個卵黃膜上胚盤區域1. 35mm2面積內微孔數量； (9) 重復步驟（1)-(8)，對每批次的種蛋逐個統計每個卵黃膜上胚盤區域1.35mm2面積 內微孔數量，來預測本批次種蛋受精情況；若種蛋卵黃膜上微孔數平均為5,則種蛋的受精 率為70%左右；若微孔數低于0. 5,則種蛋受精率接近于零。
[0011] 實例證明： 34周齡的白來航雞，母雞為150只，公雞4只。經精液質量測定，公雞精液質量良好，精 子密度在40XlOVmL左右。4只公雞的精液混合稀釋，每只母雞人工輸入0. 05血精液，其 含有的精子數量為20Xl〇6。人工輸精48小時后開始收集種蛋。將每天所產種蛋隨機分成 等量兩份，一份進行精卵質膜互作實驗，另一份進行機器解化測定種蛋的真實受精率，檢測 種蛋的實際受精效果。種蛋收集直到種蛋的受精率為零為止。
[0012] 隨著授精后天數的延長，卵黃膜上的微孔數和真實受精率的關系如下：
注：微孔數目是每個卵黃膜胚盤區域1. 35mm2面積內的微孔數量 經過SAS軟件的C0RR過程分析，上述數據的卵黃膜上微孔數目的中位數與種蛋受精率 存在顯著的相關關系（K0. 05);利用SAS軟件的REG過程，擬合出卵黃膜上的微孔數和種蛋 受精率的回歸曲線（圖1，圖中橫坐標為微孔數目的中位數，縱坐標是對應的受精率)，方程 如下：
其中，y是種蛋受精率，X是種蛋卵黃膜上的微孔數，該回歸曲線的及2 。從擬合 曲線方程可W得出，全群平均受精率54. 7%對應微孔中位數為2. 6;如果卵黃膜上微孔數的 中位數為5,則受精率為70%左右；若微孔數低于0.5個，則受精率急劇下降接近于零左右。
[0013] 禽種蛋受精過程中，精子能夠在卵黃膜上產生多個微孔，用眼科手術剪刀分離胚 盤區域約1. 5平方厘米的卵黃膜，用解剖針將卵黃膜平鋪于載玻片上，使用20%福爾馬林 溶液固定，Schiff'S溶液染色后，于100倍光學顯微鏡下可觀察到微孔數目。微孔直徑為 10~30ym，大多數微孔集中在胚盤區域1. 35mm2的范圍內。經過統計分析發現，受精雞蛋 卵黃膜上微孔數目與雞蛋受精率呈顯著的相關關系，通過觀察種蛋卵黃膜上的微孔數，能 夠較準確預測種蛋的受精率。如果抽測一批種蛋卵黃膜上微孔數平均為5,則該批種蛋的受 精率為70%左右；若微孔數低于0. 5,則種蛋受精率接近于零。該方法能夠快速、準確地預 測種蛋受精率，從而評價種蛋受精質量，評估種雞的精液質量，避免低受精率批次的種蛋入 解，進而降低家禽養殖業生產風險，提高經濟效益，為生產決策提供依據。
【主權項】
1. 一種預測家禽種蛋受精率的方法，其特征在于：這種預測家禽種蛋受精率的方法： (1) 輕輕打開種蛋蛋殼的鈍端，將蛋內容物輕輕倒出，避免將卵子劃破；利用蛋黃分離 器分開卵子和卵清蛋白； (2) 在盛有質量百分比濃度為l%NaCl溶液的燒杯中，浸泡卵子3分鐘，除去多余的卵 清蛋白； (3) 轉移步驟（2)處理后的卵子到一個培養皿中，用手輕輕轉動卵子使胚盤區域正好 朝上放置，用解剖針在非胚盤區域偏下穿刺，形成幾個小洞，降低內部卵黃壓力； (4) 用小剪刀，沿胚盤周圍距離胚盤邊緣至少lcm的區域將該部分卵黃膜切下，在質 量百分比濃度為l%NaCl溶液中清洗干凈，除去全部卵黃后得到卵黃膜； (5)將步驟（4)分離得到的卵黃膜放置在載玻片上，滴入數滴l%NaCl，用解剖針輕輕 將卵黃膜展平，避免形成皺褶； (6) 用吸管吸走NaCl液體，滴入3~5滴20%福爾馬林溶液； (7) 10-20秒后，用吸管吸走福爾馬林溶液，加入幾滴SchifT's溶液，使卵黃膜充分染 色，控制染色時間，以免染色太深，影響觀察； (8) 在卵黃膜上加上蓋玻片，在100倍光學顯微鏡下觀察經過精卵互作之后形成的微 孔數量，微孔直徑為10~30ul;統計每個卵黃膜上胚盤區域1. 35mm2面積內微孔數量； (9) 重復步驟（1)-(8)，對每批次的種蛋逐個統計每個卵黃膜上胚盤區域1.35mm2面積 內微孔數量，來預測本批次種蛋受精情況；若種蛋卵黃膜上微孔數平均為5,則種蛋的受精 率為70%左右；若微孔數低于0. 5,則種蛋受精率接近于零。2. 根據權利要求1所述的預測家禽種蛋受精率的方法，其特征在于：所述的步驟（5) 中，在載玻片上滴入質量百分比濃度為3%的多聚甲醛，用蓋玻片封閉。3. 根據權利要求1所述的預測家禽種蛋受精率的方法，其特征在于：所述的步驟（9) 中，卵黃膜上的微孔數和種蛋受精率的回歸曲線方程如下：其中，y是種蛋受精率，x是種蛋卵黃膜上的微孔數，該回歸曲線的爐=0.98。
【專利摘要】本發明涉及的是一種預測家禽種蛋受精率的方法，這種預測家禽種蛋受精率的方法：(1)分開種蛋的卵子和卵清蛋白；(2)用1%NaCl溶液浸泡卵子，除去卵清蛋白；(3)在卵子非胚盤區域偏下穿刺，形成幾個小洞；(4)沿胚盤周圍距離胚盤邊緣至少1cm的區域將該部分卵黃膜切下，得到卵黃膜；(5)將卵黃膜滴入1%NaCl并展平；(6)吸走NaCl液體，滴入20%福爾馬林溶液；(7)10-20秒后，吸走福爾馬林溶液，加入幾滴Schiffˊs溶液染色；(8)在光學顯微鏡下觀察經過精卵互作之后形成的微孔數量；(9)重復步驟(1)-(8)，對每批次的種蛋逐個統計微孔數量，若種蛋卵黃膜上微孔數平均為5，則種蛋受精率為70%左右；若微孔數低于0.5，則種蛋受精率接近于零。本發明能夠較準確預測種蛋的受精率。
【IPC分類】G01N33/08, G06F19/00
【公開號】CN105116120
【申請號】CN201510477460
【發明人】劉勝軍, 張瑩, 劉勃麟
【申請人】黑龍江八一農墾大學
【公開日】2015年12月2日
【申請日】2015年8月7日