一種監測免疫膠體金試驗中hook效應的方法
【技術領域】
[0001] 本發明屬于一種監測方法，具體地涉及一種監測免疫膠體金試驗中HOOK效應的 方法。
【背景技術】
[0002] 免疫膠體金技術是以膠體金作為示蹤標志物應用于抗原抗體的一種新型的免疫 標記技術，將膠體金標記的免疫反應性物質--抗原（或抗體）與樣本中對應的抗體（或 抗原）進行反應，并在硝酸纖維素膜上進行層析，并進而與硝酸纖維素膜上包被的另一抗 原（或抗體）結合而被固定在硝酸纖維素膜上并顯現膠體金顆粒的顏色（T線），以便對在 該樣本中的指定抗體或抗原進行定量分析。
[0003] 有時在測定含有高濃度分析物的樣品中觀察到沒有T線顏色發生或僅發生輕微 的T線顏色。在高濃度下T線顏色的消失或減少稱作前帶效應或"鉤狀效應"(Η00Κ效應）， 并且與如下事實相關：例如在樣品中過量的抗原導致形成小抗體-抗原-復合物，它們不會 形成可見的凝集。一般而言，抗原的濃度與抗體的濃度相比越高，則觀察到的信號越低。當 抗原的遞增濃度超過了抗體群識別和結合的相對能力時，T線灰度會衰減。這種效應是動 態的并且代表了從抗原一抗體凝集物形成到非凝集化形式占優勢的較高可能性之間反應 平衡的改變。
[0004] 當出現HOOK效應時，就會出現假陰性結果，影響檢測結果準確性，造成誤診等嚴 重后果。
【發明內容】
[0005] 本發明的目的是提供一種監測免疫膠體金試驗中HOOK效應的方法，能夠快速有 效判斷HOOK效應的發生并及時更正檢測結果。
[0006] 本發明通過如下技術方案實現：
[0007] -種監測免疫膠體金試驗中HOOK效應的方法，使用免疫結果判讀記錄儀在t5。和 t時間時，測定T線灰度值A5。和A，t表示抗原與抗體完全反應的時間；t 5。表示抗原與抗體 反應完成50%時的時間，當A/A5Q< 1. 05時，判為存在HOOK效應，提示需要適當稀釋樣本 后再測，結果乘以稀釋倍數；當A/A5(]> 1. 05時，即未出現倒鉤現象。
[0008] 其中免疫結果判讀記錄儀為（天津中新科炬生物制藥有限公司生產）NS7001或 NS3001〇
[0009] 所述t5。和t是通過如下方法確定的：取一標準待測樣本，使用免疫結果判讀記錄 儀連續監測該待測樣本的免疫膠體金層析反應T線灰度隨時間變化，待T線灰度不再變化 即確定出完全反應的時間t，T線灰度為完全反應的50%的時間為t 5。。
[0010] 如果是低濃度樣本，T線顏色深度會緩慢增加，不會在短時間內達峰值，t時T線 的灰度值與t50的灰度值之比大于> 1. 05 ;如果是高濃度樣本但未超過檢測的濃度范圍， 即未出現倒鉤現象，T線t時的灰度值與t50的灰度值之比也會大于1. 05。
[0011] 本發明具有的優點和積極效果是：采用本發明的檢測方法可以快速判斷所有免疫 膠體金實驗中是否出現HOOK效應，及時更正檢測結果，對于出現HOOK效應的樣本進行稀 釋，重新測定，結果乘以稀釋倍數為最終檢測結果，如判斷不存在HOOK效應，直接報告檢測 結果無需再講樣本稀釋重測，可大大提高免疫膠體金檢測效率和準確率。
【附圖說明】
[0012] 圖1為標準樣本HCG免疫膠體金層析反應的T線灰度與時間的關系圖；
[0013] 圖2為待測樣本HCG免疫膠體金層析反應的T線灰度值與時間的關系圖；
[0014] 圖3為標準樣本鐵蛋白免疫膠體金層析反應的T線灰度與時間的關系圖；
[0015] 圖4為待測樣本鐵蛋白免疫膠體金層析反應的T線灰度值與時間的關系圖；
【具體實施方式】
[0016] 實施例1 :
[0017] 監測膠體金免疫層析法測定尿液絨毛膜促性腺激素（HCG)的HOOK效應的方法
[0018] (l)t 和 t50 的確定
[0019] 取濃度為5000mIU/mL的HCG標準樣本，采用免疫結果判讀記錄儀連續監測HCG的 免疫膠體金層析反應的T線灰度與時間的關系見圖1所示，T線灰度恒定開始值即確定出完 全反應時間t，從圖1可以判斷為10分鐘，而T線為完全反應時濃度的50%的時間即t50， 從圖1可判斷為2分鐘。
[0020] (2) HOOK效應的監測方法
[0021] 由此設置，t為10分鐘，t5。為2分鐘。在2分鐘和10分鐘時分別測定T線灰度 值，實驗數據如圖2所示，HOOK效應的判斷結果見表1。對于樣本4用水稀釋5倍后重新測 定，結果乘以5作為最終檢測結果。
[0022] 表1膠體金免疫層析法測定尿液HCG的HOOK效應判斷結果
[0023]
[0024] 實施例2 :
[0025] 監測膠體金免疫層析法測定血液中鐵蛋白的HOOK效應的方法
[0026] (價和心。的確定
[0027] 取濃度為100ng/ml的鐵蛋白標準樣本，采用免疫結果判讀記錄儀連續監測鐵蛋 白的免疫膠體金層析反應的T線灰度與時間的關系見圖3所示，反應產物恒定開始值即 確定出完全反應時間t，從圖3可以判斷為10分鐘，而反應產物濃度為完全反應時濃度的 50%的時間即t5。，從圖3可判斷為3分鐘。
[0028] (2) HOOK效應的監測方法
[0029] 由此設置，t為10分鐘，t5。為3分鐘。在10分鐘和3分鐘時分別測定T線灰度 值，實驗數據如圖4所示，HOOK效應的判斷結果見表2。對于樣本4用水稀釋5倍后重新測 定，結果乘以5作為最終檢測結果。
[0030] 表2膠體金免疫層析法測定血液中鐵蛋白的HOOK效應判斷結果
[0031]
【主權項】
1. 一種監測免疫膠體金試驗中HOOK效應的方法，使用免疫結果判讀記錄儀在15。和t 時間時，測定T線灰度值A 5。和A， 當A/A5(]< 1. 05時，判為存在HOOK效應，提示需要稀釋樣本后再測，結果乘以稀釋倍 數； 當A/A5Q> 1. 05時，即未出現倒鉤現象； t-表示抗原與抗體完全反應的時間； t5。-表示抗原與抗體反應完成50%的時間。2. 如權利要求1所述的監測免疫膠體金試驗中HOOK效應的方法，所述免疫結果判讀記 錄儀為 NS7001 或 NS3001。3. 如權利要求1所述的監測免疫膠體金試驗中HOOK效應的方法，所述15。和t是通過 如下方法確定的：取一標準待測樣本，使用免疫結果判讀記錄儀連續監測該待測樣本的免 疫膠體金層析反應T線灰度隨時間變化，待T線灰度不再變化即確定出完全反應的時間t， T線灰度為完全反應的50%的時間為t 5。。
【專利摘要】本發明公開了一種監測免疫膠體金試驗中HOOK效應的方法，使用免疫結果判讀記錄儀在t50和t時間時，測定T線灰度值A50和A，當A/A50＜1.05時，判為存在HOOK效應，提示需要稀釋樣本后再測，結果乘以稀釋倍數；當A/A50＞1.05時，即未出現倒鉤現象；采用本發明的監測方法可以快速判斷所有免疫膠體金實驗中是否出現HOOK效應，及時更正檢測結果，對于出現HOOK效應的樣本進行稀釋，重新測定，結果乘以稀釋倍數為最終檢測結果，如判斷不存在HOOK效應，直接報告檢測結果無需再講樣本稀釋重測，可大大提高免疫膠體金檢測效率和準確率。
【IPC分類】G01N33/76, G01N33/558, G01N33/68
【公開號】CN105044332
【申請號】CN201510303846
【發明人】葉濤
【申請人】天津起跑線生物信息技術有限公司
【公開日】2015年11月11日
【申請日】2015年6月4日