一種唾液酸質(zhì)控品及其制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明設(shè)及醫(yī)學(xué)檢驗技術(shù)領(lǐng)域，具體設(shè)及一種唾液酸質(zhì)控品及其制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002] N-己酷神經(jīng)氨酸（N-Acet}dneuraminicAcid,NANA)，俗稱唾液酸（Sialicacid, SA)，是多種天然神經(jīng)氨酸衍生物之一，其母體結(jié)構(gòu)是九個碳原子組成的內(nèi)環(huán)氨基酸，是一 族化合物的總稱，它由于最初從頌下腺粘蛋白中分離出而得名。唾液酸是糖綴合物和多聚 唾液酸的重要組分，廣泛分布于生物體系內(nèi)寡糖鏈的終端。天然的唾液酸都是Wa-糖巧 鍵的方式存在，主要通過a(2-3)或a(2-6)糖巧鍵與半乳糖巧連接構(gòu)成糖綴合物（包括 糖蛋白、低聚糖和糖脂體），或通過a(2-8)、a(2-9)或a(2-8)/a(2-9)交替連接的方式 構(gòu)成線性的多聚唾液酸。唾液酸糖綴合物和多聚唾液酸具有多樣的生物學(xué)功能，主要包括 唾液酸本身能被所識別的受體作用、細(xì)胞之間的信息傳遞和通過阻止或減弱細(xì)胞或分子對 其特異性識別部位的接觸所起到的掩蔽作用。已經(jīng)證實，唾液酸能夠促進(jìn)細(xì)胞間的黏附、調(diào) 節(jié)細(xì)胞之間W及細(xì)胞與環(huán)境之間的信息交換、控制機體糖蛋白的生命周期W及誘導(dǎo)病毒的 感染等。許多研究發(fā)現(xiàn)帶瘤動物及腫瘤患者的瘤體及血液中唾液酸含量增加并隨病情的加 重而升高、隨病情的緩解而降低，因此在臨床檢驗中唾液酸常被作為惡性腫瘤存在和發(fā)展 監(jiān)控的一個指標(biāo)，被廣泛地應(yīng)用于很多腫瘤的診斷和監(jiān)控中。
[0003] 目前，檢測唾液酸含量的方法有很多，例如HPLC法、酶法、化學(xué)比色法（常見的有 硫代己比妥酸法、間苯二酪法）。HPLC方法具有靈敏度高、特異性好的優(yōu)點，但是儀器昂貴 且不適合臨床批量檢測?；瘜W(xué)比色法雖然價格比較低，但是特異性低，操作復(fù)雜繁瑣，需要 高溫萃取，不適合自動化分析，其試劑成分具有一定的腐蝕性和人體危害性。酶法通過神 經(jīng)氨酸巧酶（Neuraminidase,NA)來檢測血液樣本中的唾液酸含量。其反應(yīng)原理為；通過 神經(jīng)氨酸巧酶催化水解使唾液酸a-糖巧鍵斷裂生成游離的N-己酷神經(jīng)氨酸，N-己酷神 經(jīng)氨酸在神經(jīng)氨酸醒縮酶的作用下生產(chǎn)成丙酬酸和甘露糖胺，丙酬酸與還原性輔酶（NADH) 在乳酸脫氨酶（LDH)的作用下生成乳酸和NAD+，而NADH在340nm有特異性吸收，通過檢測 NADH的減少量就可W檢測出血液樣本中的唾液酸含量。
[0004]目前，酶法唾液酸檢測試劑盒在國內(nèi)外均已出現(xiàn)，但因缺乏國際標(biāo)準(zhǔn)，造成了檢測 結(jié)果隨生產(chǎn)廠家、試劑不同而可能出現(xiàn)不一致的現(xiàn)象，給該項目的推廣應(yīng)用帶來了極大困 難。此外，在唾液酸檢測質(zhì)量管理體系中，應(yīng)用質(zhì)控品進(jìn)行室內(nèi)質(zhì)控和參加室間的質(zhì)量評價 是保證實驗室檢測結(jié)果質(zhì)量，減少誤差，使不同實驗室之間的結(jié)果具有較好可比性的重要 措施。
【發(fā)明內(nèi)容】
[0005] 本發(fā)明針對現(xiàn)有技術(shù)的上述不足，提供一種能保證唾液酸測定穩(wěn)定性的唾液酸質(zhì) 控品。
[0006] 為了解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明所采用的技術(shù)方案為；一種唾液酸質(zhì)控品，由W下 濃度的各組分組成：
[0007]
[0008] 本發(fā)明所述的緩沖液為哲己基嗽嗦己硫橫酸緩沖液、4-哲己基嗽嗦丙橫酸緩沖 液、=哲甲基氨基甲燒鹽酸鹽緩沖液、3-=哲甲基甲胺-2-哲基丙橫酸緩沖液中的一種，pH 為 7. 0-7. 5。
[0009] 本發(fā)明所述的防腐劑為山梨酸鐘、苯甲酸鋼、疊氮鋼、Proclin300中的一種或幾 種。
[0010] 本發(fā)明上述唾液酸質(zhì)控品的制備方法，包括W下步驟：
[0011] (1)將配方比例的棚酸及甘露醇溶于二甲基亞諷中，混合均勻，再加入配方比例的 多聚唾液酸鋼鹽，混合均勻；
[0012] (2)在 40-200mmol/LpH7. 0-7. 5 的緩沖液中加入l-20mmol/L谷脫甘膚，l-20g/ L牛血清白蛋白，9g/L氯化鋼，0.1-lg/L防腐劑（上述各組分濃度均為最終質(zhì)控品中的濃 度），混合均勻；
[001引 做將上述（1)和（2)溶液按體積比5:1000-20:1000混合均勻。
[0014]本發(fā)明的優(yōu)點和有益效果：
[00巧]1、選用多聚唾液酸鋼鹽為原料，比唾液酸（N-己酷基神經(jīng)氨酸）更能代表唾液酸 在體內(nèi)的存在形式，并且來源充足，易獲得。
[0016]2、液體型質(zhì)控品，無需復(fù)溶。
[0017] 3、氯化鋼、牛血清白蛋白的加入，使得制備成的液體質(zhì)控品基質(zhì)類似人血清，盡量 模擬了唾液酸在血液中的存在狀態(tài)，不僅質(zhì)控品制劑的穩(wěn)定性好，不易降解，保存時間長， 而且由于質(zhì)控品是模擬人血清制備而成，同檢測樣品基質(zhì)類似，因此檢測準(zhǔn)確度高，有效的 保證了臨床檢驗需求。
[0018] 4、制備工藝簡單，生產(chǎn)成本低，該質(zhì)控品采用制備方法制成，加入的物質(zhì)和含量可 控，所W質(zhì)控品成分穩(wěn)定，不存在人血清中存在的干擾檢測結(jié)果的物質(zhì)，抗干擾能力強，也 不存在人血清中存在的導(dǎo)致不安全情況的物質(zhì)（如HIV)，非常安全，可放屯、使用。
【具體實施方式】
[0019] W下結(jié)合實施例對本發(fā)明作進(jìn)一步具體描述，但不局限于此。
[0020] 實施例1;
[0021]
[0022] 該唾液酸質(zhì)控品的制備方法，包括W下步驟：
[002引 （1)將Ig的棚酸及0.Imol甘露醇溶于20ml的二甲基亞諷中，混合均勻，再加入 50mg的多聚唾液酸鋼鹽，混合均勻；
[0024]似配制50mmol的哲己基嗽嗦己硫橫酸緩沖液1L，調(diào)節(jié)抑至7. 0,加入5mmol谷 脫甘膚，lOg牛血清白蛋白，9. 2g氯化鋼，0.Ig疊氮鋼，混合均勻；
[00幼 做將上述（1)和似溶液按體積比20;1000混合。
[002引 實施例2;
[0027]
[0028]
[0029] 該唾液酸質(zhì)控品的制備方法，包括W下步驟：
[0030] (1)將0. 5g的棚酸及0. 2mol甘露醇溶于10ml的二甲基亞諷中，混合均勻，再加入 lOOmg的多聚唾液酸鋼鹽，混合均勻；
[003。 似配制100臟01的^哲甲基氨基甲燒鹽酸鹽緩沖液山調(diào)節(jié)抑至7.5，加入 20mmol谷脫甘膚，20g牛血清白蛋白，9.Ig氯化鋼，0.IgProclin300,混合均勻；
[003引做將上述（1)和似溶液按體積比10 ; 1000混合。
[0033] 本發(fā)明上述實施例制備的質(zhì)控品在2-8°C環(huán)境中保存1年的結(jié)果如下表1所示：
[0034] 表 1
[00巧]
[003引從上表1的檢測'數(shù)據(jù)可獲知，說明本k明的質(zhì)控品穩(wěn)i可存放較長時間。
[0037] 實施例所用的原料，除另有說明外，均為市售工業(yè)品。
[0038] 本發(fā)明的上述實施例是對本發(fā)明的說明而不能用于限制本發(fā)明，與本發(fā)明的權(quán)利 要求書相當(dāng)?shù)暮x和范圍內(nèi)的任何改變，都應(yīng)認(rèn)為是包括在權(quán)利要求書的范圍內(nèi)。
【主權(quán)項】
L一種唾液酸質(zhì)控品，其特征在于：該質(zhì)控品由以下濃度的各組分組成：
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的唾液酸質(zhì)控品，其特征在于：所述的緩沖液為羥乙基哌嗪乙 硫磺酸緩沖液、4-羥乙基哌嗪丙磺酸緩沖液、三羥甲基氨基甲烷鹽酸鹽緩沖液、3-三羥甲 基甲胺-2-羥基丙磺酸緩沖液中的一種。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的唾液酸質(zhì)控品，其特征在于：所述的防腐劑為山梨酸鉀、苯甲 酸鈉、疊氮鈉、Proclin300中的一種或幾種。
4. 一種唾液酸質(zhì)控品的制備方法，其特征在于：制備步驟包括： (1) 將配方比例的硼酸及甘露醇溶于二甲基亞砜中，混合均勻，再加入配方比例的多聚 唾液酸鈉鹽，混合均勻； (2) 在40-200mmol/LpH7.0-7.5的緩沖液中加入1-20臟〇1/1谷胱甘肽，1-2(^/1牛 血清白蛋白，9g/L氯化鈉，0. 1-lg/L防腐劑，混合均勾； (3) 將上述（1)和（2)溶液按體積比5:1000-20:1000混合均勻。
【專利摘要】本發(fā)明公開一種唾液酸質(zhì)控品及其制備方法，該質(zhì)控品由以下濃度的各組分組成：緩沖液(pH7.0-7.5)40-200mmol/L，多聚唾液酸鈉鹽1-300mg/L，二甲基亞砜5-20ml/L，硼酸0.1-3g/L，甘露醇0.05-0.5mol/L，谷胱甘肽1-20mmol/L，牛血清白蛋白1-20g/L，氯化鈉9g/L，防腐劑0.1-1g/L。本發(fā)明具有選用多聚唾液酸鈉鹽為原料，比唾液酸(N-乙?；窠?jīng)氨酸)更能代表唾液酸在體內(nèi)的存在形式，并且來源充足，易獲得，液體型質(zhì)控品，無需復(fù)溶的優(yōu)點。
【IPC分類】G01N33/96
【公開號】CN104965091
【申請?zhí)枴緾N201510267785
【發(fā)明人】沃燕波, 鄒炳德, 鄒繼華
【申請人】寧波美康生物科技股份有限公司
【公開日】2015年10月7日
【申請日】2015年5月22日