采用sle法分離豬尿中的萊克多巴胺的方法
【技術領域】
[0001] 本發明設及動物飼料的檢測領域，特別是一種采用SLE法分離豬尿中的萊克多己 胺的方法。
【背景技術】
[0002] 樣品前處理是分析檢測過程的關鍵環節，是濃縮被測定的痕量組分，提高方法的 靈敏度，及除去對分析系統有干擾的物質的重要手段。萃取是從樣品集體中分離出目標化 合物的一項技術，是樣品預處理中最重要的方法之一。目前，液液萃取仍然是應用最廣泛的 樣品制備方法之一，但是，傳統的液液萃取的操作繁瑣費時、有機溶劑消耗量大，而且容易 出現乳化現象的缺陷，使得在實際應用中具有一定的局限性。
[0003] 1998年，科學家提出了在傳統的液液萃取的基礎上，利用一種具有吸附性和較大 的比表面積的惰性多空填料作為介質，建立的一種新型高效樣品的制備方法-介質液液萃 取（suppo;rtedliquidextraction簡稱SLE)，SLE萃取技術就是選用一種多孔性惰性材 料-鍛燒娃藻±作為介質，取代分液漏斗，增大了兩相接觸時的作用面積，實現高效、快速 的萃取過程。
[0004] 當水溶液樣品加樣到固定的聚丙締注射管中的鍛燒娃藻±上后，經過一定時間 (一般分為幾分鐘），水相溶液W-層薄薄的液膜形式分布在填料表面，之后，將有機溶劑 從柱管上端加入，當互不相溶的兩相在娃藻±表面接觸的同時萃取立即發生，最后萃取液 在重力作用下流出，必要情況下，可W施加較小的壓力，而水相保留在介質中。盛接的流出 液直接將溶劑吹干，復溶后，即可用于下一步分析檢測。
[0005] 農業部1025號公告-11-2008公開了豬尿中0 -受體激動劑多殘留檢測，其采用 酶解后異丙醇-己酸己醋進行萃取，并通過內標法可W得到相關的檢測結果，但是在實際 應用中，采用酶解后然后在采用傳統方法萃取后通過色譜檢測有時無法檢出殘留項。
【發明內容】
[0006] 本發明的目的在于提供一種分離效率高、操作簡單的采用SLE法分離豬尿中的萊 克多己胺的方法。
[0007] 本發明的技術方案為：一種采用SLE法分離豬尿中的萊克多己胺的方法，包括W 下步驟：
[000引步驟1 ;樣品預處理；收集豬尿，首先加入0 -鹽酸葡萄糖醒巧酶/芳基硫酸醋酶 進行酶解，每毫升的尿液中加入0 -鹽酸葡萄糖醒巧酶/芳基硫酸醋酶12y以酶解結束后 加入S氯己酸沉淀豬尿中的蛋白質，加入4倍豬尿體積的化范圍為8. 0~10. 0的氨水-氯 化錠緩沖液，縱禍混合器混合后離屯、；取離屯、后的上清液；
[0009] 步驟2 ;將上清液加入到SLE柱后，靜置2~4分鐘；
[0010] 步驟3 ;采用二元洗脫劑對SLE柱洗脫至少兩次，接收洗脫液，得到含有萊克多己 胺的洗脫液；
[0011] 其中，所述的二元洗脫劑為異丙醇和二氧六環的混合物，其中異丙醇和二氧六環 的重量比為0.8~1:1。
[0012] 在上述的采用SLE法分離豬尿中的萊克多己胺的方法中，所述的豬尿為1ml，緩沖 溶液為4ml，步驟2中所取的上清液為0. 5ml，所述的步驟3中，每次洗脫時所用的洗脫劑為 0. 5ml。
[0013] 在上述的采用SLE法分離豬尿中的萊克多己胺的方法中，所述的步驟3中，每次洗 脫時所用的洗脫劑為0. 5ml。
[0014] 在上述的采用SLE法分離豬尿中的萊克多己胺的方法中，所述的=氯己酸和豬尿 的質量比為1:98~100。
[0015] 在上述的采用SLE法分離豬尿中的萊克多己胺的方法中，所述的步驟1中，縱禍混 合器混合處理的時間為0. 5~1. 5分鐘。
[0016] 在上述的采用SLE法分離豬尿中的萊克多己胺的方法中，所述的步驟1中，所述的 離屯、處理的具體操作為；將經混合處理的溶液在離屯、機中W9000~11000轉/分鐘的速度 離屯、0. 5~1. 5分鐘。
[0017] 在上述的采用SLE法分離豬尿中的萊克多己胺的方法中，所述的SLE柱為奧秘山 東科技有限公司生產的介質液液萃取SLE柱。
[001引本發明的有益效果如下；
[0019] 采用SLE法分離豬尿中的萊克多己胺，先進行酶解使蛋白質和萊克多己胺分離， 采用緩沖溶液進行混合，然后通過SLE柱分離出萊克多己胺，萃取劑為異丙醇和二氧六環， 本發明的分離效率好、分離時間短，有利于后期的測量。
【具體實施方式】
[0020] 下面結合【具體實施方式】，對本發明的技術方案作進一步的詳細說明，但不構成對 本發明的任何限制。
[0021] 實施例1
[002引步驟1 ;取豬尿Ig，首先加入12化0 -鹽酸葡萄糖醒巧酶/芳基硫酸醋酶進行酶 解，酶解時間為3-4小時，酶解結束后加入立氯己酸沉淀豬尿中的蛋白質，加入4ml的化為 9的氨水-氯化錠緩沖液，縱禍混合器混合后離屯、；取離屯、后的上清液0. 5ml 氯己酸和 豬尿的質量比為1:99。
[0023] 步驟2 ;將上清液加入到SLE柱后，靜置3分鐘；
[0024] 步驟3;采用二元洗脫劑對SLE柱洗脫2次，接收洗脫液，得到含有萊克多己胺的 洗脫液；每次消耗的洗脫劑為0. 5ml，所述的二元洗脫劑為異丙醇和二氧六環的混合物，異 丙醇和二氧六環的重量比為1:1。
[0025] 實施例2
[0026] 步驟1;取豬尿Ig，首先加入12yL0 -鹽酸葡萄糖醒巧酶/芳基硫酸醋酶進行酶 解，酶解時間為3-4小時，酶解結束后加入互氯己酸沉淀豬尿中的蛋白質，加入4ml的化為 9的氨水-氯化錠緩沖液，縱禍混合器混合后離屯、；取離屯、后的上清液0. 5ml 氯己酸和 豬尿的質量比為1:100。
[0027] 步驟2 ;將上清液加入到SLE柱后，靜置3分鐘；
[002引步驟3 ;采用二元洗脫劑對SLE柱洗脫2次，接收洗脫液，得到含有萊克多己胺的 洗脫液；每次消耗的洗脫劑為0. 5ml，所述的二元洗脫劑為異丙醇和二氧六環的混合物，異 丙醇和二氧六環的重量比為0. 8:1。
[0029] 標準樣的制備
[0030] 稱取萊克多己胺標準品（純度>99 %)O.OlOOg，置于1000ml容量瓶中，用重量比 為1:1的異丙醇和二氧六環的混合物的溶劑溶解定容，其濃度為10yg/ml;
[003U 取上述濃度為10yg/ml的萊克多己胺溶液于1000ml容量瓶中，配制成為2yg/L、 5yg/L、8yg/L、10yg/L、20yg/L的標準樣。
[003引對比例1
[0033] 與實施例1大體相同，不同的地方在于，步驟3中，洗脫劑為異丙醇與己酸己醋的 混合物，其體積比為40:60。
[0034]分析；
[0035] 檢測方法具體為；
[0036] 儀器；LC-2010型高效液相色譜儀（日本島津）
[0037]色譜柱；C18 柱，150mm*3. 9mmTD
[003引 柱溫；室溫
[0039]流動相巧酬；己膳=100:12 ;
[0040] 檢測器；UV檢測器；
[0041]檢測波長；226nm;
[0042] 進樣量；25化
[00創 W2yg/L、5yg/L、8yg/L、10yg/L、20yg/L的標準樣進行測試，回歸方程為Y= 12715X+1. 1，R2= 0. 9994,X為待測物濃度，Y為峰面積。
[0044] 取同一份豬尿化g，按照實施例1的方法制備10份萃取樣品A標號為A1-A10,按 照對比例1的方法制備10份萃取樣品B標號為B1-B10。
[0045] 按照上述檢測方法進樣檢測，得到如下的檢測結果：
[0046]
【主權項】
1. 一種采用SLE法分離豬尿中的萊克多巴胺的方法，其特征在于，包括以下步驟： 步驟1 :樣品預處理；收集豬尿，首先加入0 _鹽酸葡萄糖醛苷酶/芳基硫酸酯酶進行 酶解，每毫升的尿液中加入0 -鹽酸葡萄糖醛苷酶/芳基硫酸酯酶12 y L，酶解結束后加入 三氯乙酸沉淀豬尿中的蛋白質，加入4倍豬尿體積的Ph范圍為8. O~10.0 的氨水-氯化 銨緩沖液，漩渦混合器混合后離心；取離心后的上清液； 步驟2 :將上清液加入到SLE柱后，靜置2~4分鐘； 步驟3 :采用二元洗脫劑對SLE柱洗脫至少兩次，接收洗脫液，得到含有萊克多巴胺的 洗脫液； 其中，所述的二元洗脫劑為異丙醇和二氧六環的混合物，其中異丙醇和二氧六環的重 量比為0.8~1:1。
2. 根據權利要求1所述的采用SLE法分離豬尿中的萊克多巴胺的方法，其特征在于，所 述的豬尿為lml，緩沖溶液為4ml，步驟2中所取的上清液為0. 5ml。
3. 根據權利要求2所述的采用SLE法分離豬尿中的萊克多巴胺的方法，其特征在于，， 所述的步驟3中，每次洗脫時所用的洗脫劑為0. 5ml。
4. 根據權利要求2所述的采用SLE法分離豬尿中的萊克多巴胺的方法，其特征在于，所 述的三氯乙酸和豬尿的質量比為1:98~100。
5. 根據權利要求1所述的采用SLE法分離豬尿中的萊克多巴胺的方法，其特征在于，所 述的步驟1中，漩渦混合器混合處理的時間為0. 5~1. 5分鐘。
6. 根據權利要求5所述的采用SLE法分離豬尿中的萊克多巴胺的方法，其特征在于，所 述的步驟1中，所述的離心處理的具體操作為：將經混合處理的溶液在離心機中以9000~ 11000轉/分鐘的速度離心0. 5~1. 5分鐘。
7. 根據權利要求1至6任一所述的采用SLE法分離豬尿中的萊克多巴胺的方法，其特 征在于，所述的SLE柱為奧秘山東科技有限公司生產的介質液液萃取SLE柱。
【專利摘要】本發明公開了一種采用SLE法分離豬尿中的萊克多巴胺的方法，包括以下步驟：步驟1：樣品預處理；收集豬尿，首先加入β-鹽酸葡萄糖醛苷酶/芳基硫酸酯酶進行酶解，每毫升的尿液中加入β-鹽酸葡萄糖醛苷酶/芳基硫酸酯酶12μL；取離心后的上清液；步驟2：將上清液加入到SLE柱后，靜置2～4分鐘；步驟3：采用二元洗脫劑對SLE柱洗脫至少兩次，接收洗脫液，得到含有萊克多巴胺的洗脫液；其中，所述的二元洗脫劑為異丙醇和二氧六環的混合物，其中異丙醇和二氧六環的重量比為0.5～1:1。本發明的目的在于提供一種分離效率高、操作簡單的采用SLE法分離豬尿中的萊克多巴胺的方法。
【IPC分類】G01N30-06
【公開號】CN104880519
【申請號】CN201510243114
【發明人】陳學松, 賴秀梅, 溫志芳, 陳啟釗, 郭振旺, 吳嵐
【申請人】廣西壯族自治區梧州食品藥品檢驗所
【公開日】2015年9月2日
【申請日】2015年5月12日