一種α-巖藻糖苷酶測定液體單一試劑的制作方法
【技術領域】
[0001] 本發明設及醫學檢驗技術領域，具體設及一種a-巖藻糖巧酶測定液體單一試 劑。
【背景技術】
[0002] a-巖藻糖巧酶（a-化cosidase，AFU)是一種溶酶體酸性水解酶，廣泛分布于人 體內的各種組織、細胞及體液中，尤其W肝、腎等組織活性較高。近年來，隨著對A即檢測方 法及其他腫瘤或非腫瘤性疾病的血A即水平變化的深入研究，A即活力測定已經成為一個 基本診斷指標，并與其他實驗室指標相結合，成為肝癌、胃癌、膜腺癌、結腸癌、口腔癌、白血 病、卵巢腫瘤等疾病診斷的重要指標。
[0003] 目前，測定A即活力的方法主要有巧光法、終點比色法、速率法。巧光法是利用巖 藻糖巧化合物在AFU水解后釋放出可發射巧光的4-甲基傘型酬，通過檢查巧光強度來分析 酶活力，該法的靈敏度高，既能用于血清，也適用于活檢組織、細胞、腦脊液等量小的樣本， 但該法對儀器要求高，不僅需要凝膠過濾除去干擾物質，而且需要巧光分光光度計，因而不 能實現自動化分析，難W進行普及推廣；終點比色法是WPNP-A即為底物，底物被酶分解 后產生的色團在堿性條件下呈黃色，利用分光光度法進行定量分析，本法簡便、設備要求不 高，但是酶底物本身的抗干擾性差，不能解決血清黃痘和溶血、脂血等因素對測定結果的影 響，且操作繁瑣，所需反應時間長，而且A即需在酸性環境下進行酶促反應，而色團需在堿 性條件下呈色，所W也不適合自動化檢測，推廣難度大。速率法WA即在適宜反應條件下催 化含呈色基團的特定底物水解，在一定波長下可使吸光度增加，連續監測吸光度值的變化， 可計算出樣本中A即的活性，該法操作簡單，測定時間短，靈敏度及抗干擾性都較好，并且 適用于各種半/全自動分析儀器，由于速率法具有便于臨床推廣應用的特點，近年來，速率 法AFU活力測定逐步在臨床醫學方面得到普遍應用。
[0004] 在日常檢驗工作中，由于肝癌、肝硬化患者分離血清需要時間長，為了能快速回報 結果，縮短樣本周轉時間和防止儀器樣品針被堵，不少醫院使用肝素裡或肝素鋼抗凝管采 集血樣進行測定，由于肝素為陰離子黏多糖，帶有大量負電荷，呈強酸性，易與速率法檢測 AFU所用試劑反應形成沉濁使吸光度升高，從而影響檢測準確度，因此，AFU測定試劑開發 時需充分考慮樣品中肝素干擾的問題，同時，若能制備成單一試劑則可有效節省全自動生 化分析儀試劑盤空間，提高全自動生化分析儀的利用率，更有利于該試劑在臨床上的推廣 應用。
【發明內容】
[0005] 本發明所要解決的技術問題是提供一種具有良好的抗肝素干擾性能，良好的穩定 性，且成本較低的A即測定液體單一試劑。
[0006] 為了解決上述問題，本發明采用的技術方案為：一種A即測定液體單一試劑，試劑 中的各組分及組分濃度范圍為：
[0007] 緩沖液（pH4. 5 ~5. 5) 50-200mmol/L,
[0008] 抗干擾劑 20-80g/l，
[0009] 2-氯-4-硝基苯-aA-巖藻糖巧（CNP-Afu) 0. 1-lg/L。
[0010] 本發明上述所述的抗干擾劑為可溶性巧鹽或儀鹽中的一種，進一步優選為氯化巧 或氯化儀或硫酸巧或硫酸儀。
[0011] 其中所述緩沖液可W是磯酸緩沖液、甘氨酸-NaOH緩沖液、巧樣酸-巧樣酸S鋼緩 沖液、棚酸緩沖液、咪挫緩沖液、醋酸-醋酸鋼緩沖液，2-嗎咐己橫酸緩沖液中的一種。
[0012] 本發明試劑的配制方法為常規方法，即試劑所述組分配方用量加入蒸饋水后各自 混合攬勻即可。
[0013] 本發明試劑盒測定樣本中的A!^U的測試條件如下；溫度；30-37°C;比色杯光徑為 1. 0畑1。檢測主波長405皿。
[0014] 應用本發明AFU測定試劑盒測定樣本中AFU的方法如下；樣品（校準管W校準品 做樣品）加試劑R混勻后，30-37°C解育2min，連續檢測2min吸光度變化，計算AA/min。其 中樣本用量25y1，試劑用量225y1。
[0015] 本發明試劑盒測定樣本中AFU含量按W下公式進行計算：
[0016]
【主權項】
L 一種a -巖藻糖苷酶測定液體單一試劑，其特征在于：該試劑中的各組分及組分濃 度為： 緩沖液（pH 4. 5 ~5. 5) 50-200mmol/L, 抗干擾劑 20-80g/L， 2-氣-4_硝基苯-a -L-巖澡糖昔 0. 1-lg/L。 其中，所述的抗干擾劑為可溶性鈣鹽或鎂鹽中的一種。
2. 根據權利要求1所述的a -巖藻糖苷酶測定液體單一試劑，其特征在于：所述的鈣 鹽為氯化鈣或硫酸鈣，所述的鎂鹽為氯化鎂或硫酸鎂。
3. 根據權利要求1所述的a -巖藻糖苷酶測定液體單一試劑，其特征在于：所述緩沖 液為磷酸緩沖液、甘氨酸-NaOH緩沖液、檸檬酸-檸檬酸三鈉緩沖液、硼酸緩沖液、咪唑緩沖 液、醋酸-醋酸鈉緩沖液，2-嗎啉乙磺酸緩沖液中的一種。
【專利摘要】本發明公開一種α-巖藻糖苷酶測定液體單一試劑，該試劑中的各組分及組分濃度為：pH4.5～5.5的緩沖液50-200mmol/L，抗干擾劑20-80g/L，2-氯-4-硝基苯-α-L-巖藻糖苷0.1-1g/L。本發明可有效節省全自動生化分析儀試劑盤空間，提高全自動生化分析儀的利用率，更有利于該試劑在臨床上的推廣應用。而且，本發明特定的緩沖液可以有效的實現對底物的穩定；此外，本發明抗干擾劑的加入可瞬間將樣本中的肝素干擾效應去除，實現降解或屏蔽肝素的作用，從而使本發明液體單一試劑同時具有良好的抗肝素干擾性能，且因加入的抗干擾劑市場價格較為便宜，使得本發明試劑的成本較為低廉。
【IPC分類】G01N21-31
【公開號】CN104865210
【申請號】CN201510267236
【發明人】沃燕波, 鄒炳德, 鄒繼華
【申請人】寧波美康生物科技股份有限公司
【公開日】2015年8月26日
【申請日】2015年5月22日