出口蔬菜中多種植物生長調節劑的同時測定方法
【技術領域】
[0001] 本發明屬于化學分析檢測領域，具體涉及一種出口蔬菜中17種植物生長調節劑 的同時測定方法。
【背景技術】
[0002] 蔬菜不僅是多種維生素及鉀、鎂、鈣、磷、鐵等礦物質和膳食纖維的主要供給來源， 并且是植物化學成分如類胡蘿卜素、植物多酚等抗氧化劑的重要來源，對增強體內抗氧化 防御系統及營養修復基因、糾正基因弱點起著重要的作用。為了能通過化學調控改變蔬菜 生長、發育的固有模式，有效改善蔬菜生產狀況，提高蔬菜產量和品質，植物生長調節劑已 廣泛應用于蔬菜生產中。近年來，植物生長調節劑在蔬菜上的廣泛應用，給使用者帶來了一 定的經濟效益。但是，蔬菜中殘留的植物生長調節劑同樣也給人們的健康帶來了安全隱患， 例如生殖和內分泌系統紊亂、免疫功能障礙、癌癥以及其他潛在的疾病。那么在既需要保障 農業的經濟利益的同時，又需要保護消費者的身體健康，對蔬菜中植物生長調節劑殘留的 檢測成為了一項必要的工作，不僅有助于監督食品安全也可以對植物生長調節劑施用提供 一定依據。
[0003] 目前，國內外有關植物生長調節劑殘留的檢測方法主要有酶聯免疫法（ELISA)、離 子色譜法（1C)、氣相色譜法（GC)、氣相色譜-質譜法（GC-MS)、高效液相色譜法（HPLC)和液 相色譜-串聯質譜法（LC-MS/MS)。采用ELISA易產生假陽性，運用GC和GC-MS時通常要進 行衍生化的復雜操作，HPLC的靈敏度較低且難以實現確證分析，而液相色譜-串聯質譜法 (LC-MS/MS)可對多組分同時進行定性和定量分析，且具有專屬性強、選擇性好、靈敏度高等 優勢，彌補了前述方法的不足，LC-MS/MS所具備的一系列優勢，決定了它廣泛的應用前景。
【發明內容】
[0004] 鑒于此，本發明的目的是提供一種出口蔬菜中多種植物生長調節劑的同時測定 方法，采用UHPLC-QTRAP可同時檢測出待測蔬菜中的17種植物生長調節劑，包括赤霉素、 吲哚-3- 丁酸、對氯苯氧乙酸、阿維菌素、胺鮮酯、莠去津、西瑪津、6-芐氨基嘌呤、2, 4-二 氯苯氧乙酸、氯吡苯脲、助壯素、矮壯素、多效唑、烯效唑、脫落酸、噻苯隆、對氟苯氧乙酸。 UHPLC-QTRAP既保留LC-MS/MS較好的選擇性與靈敏度，也可作為線性離子肼增強二級碎片 離子定性功能。
[0005] 本發明方法具體包括如下步驟：
[0006] 1)提取
[0007] 加入蔬菜勻漿與含1% (v/v)乙酸的乙腈溶液于離心管中，按每lg蔬菜勻漿與 2mL含1% (v/v)乙酸的乙腈溶液的比例，水平振蕩lOmin，再按每lg蔬菜勾衆加入0. 5g氯 化鈉的比例加入氯化鈉于離心管中，再次渦旋混勻lmin，5000r/min離心3min，吸取上清液 I于離心管中，待凈化；
[0008] 2)凈化樣本
[0009] 將十八烷基硅烷鍵合硅膠和無水硫酸鎂按重量比1:5加入所述裝有上清液I的 離心管中，禍旋混勾2min，5000r/min離心3min，吸取上清液II于旋蒸瓶中；
[0010] 3)濃縮
[0011] 將旋蒸瓶置于40°C以下水浴中旋蒸濃縮至凈干，加入lmL含1% (v/v)乙酸的乙 腈，渦旋振蕩，溶解旋蒸瓶中殘渣，濾膜過濾后，供UHPLC-QTRAP測定；
[0012] 4)UPLC-MS/MS測定，測定條件如下：
[0013] 色譜柱：C18 ;
[0014] 流動相：乙腈-2mmol/L乙酸銨緩沖液，梯度洗脫；
[0015] 各化合物的參考保留時間及質譜參數見表1，其中帶*代表定性離子和定量離子；
[0016] 柱溫：4(TC;
[0017] 流速：0? 3mL/min;
[0018] 進樣量：10yL;
[0019] 預運行時間：1.Omin;
[0020] 正離子模式總運行時間：5min;
[0021] 負離子模式總運行時間：6min;
[0022] 獲得UHPLC-QTRAP圖；
[0023] 表1十七種植物生長調節劑的參考保留時間及質譜參數
[0024]
【主權項】
1.出口蔬菜中多種植物生長調節劑的同時測定方法，其特征在于，包括如下步驟： 1) 提取 加入蔬菜勻漿與含1%乙酸的乙腈溶液于離心管中，按每Ig蔬菜勻漿與2mL含1%乙 酸的乙腈溶液的比例，水平振蕩IOmin，再按每Ig蔬菜勻漿加入0. 5g氯化鈉的比例，加入氯 化鈉于離心管中，禍旋混勾lmin，5000r/min離心3min，吸取上清液I于離心管中，待凈化； 2) 凈化樣本 將十八烷基硅烷鍵合硅膠和無水硫酸鎂按重量比1:5加入所述裝有上清液I的離心 管中，禍旋混勾2min，5000r/min離心3min，吸取上清液II于旋蒸瓶中； 3) 濃縮 將旋蒸瓶置于40°C以下水浴中旋蒸濃縮至凈干，加入ImL含1 %乙酸的乙腈，渦旋振 蕩，溶解旋蒸瓶中殘渣，濾膜過濾后，供UHPLC-QTRAP測定； 4. UHPLC-QTRAP測定，測定條件如下： 色譜柱：C18 ; 流動相：乙腈-2mmol/L乙酸銨緩沖液，梯度洗脫； 各化合物的參考保留時間及質譜參數見表1，其中帶*代表定性離子和定量離子； 柱溫：40°C ; 流速：〇. 3mL/min ; 進樣量：10yL; 預運行時間：1. Omin ; 正離子模式總運行時間：5min ; 負離子模式總運行時間：6min ; 獲得 UHPLC-QTRAP 圖； 表1十七種植物生長調節劑的參考保留時間及質譜參數
5)結果計算 用色譜數據處理機或按公式（1)計算試樣中植物生長調節劑的含量，計算結果須扣除 空白值；
式中： Xi一一待測試樣中待測物質的含量，單位為毫克每千克； Ci一一從UHPLC-QTRAP圖上得到的待測物質的溶液濃度，單位為微克每毫升； V一一樣液最終定容體積，單位為毫升； m一一最終樣液所代表的待測試樣質量，單位為克。
2.根據權利要求2所述出口蔬菜中多種植物生長調節劑的同時測定方法，其特征在 于：步驟4)中所述梯度洗脫的洗脫程序如下： 正離子模式：
3.根據權利要求1所述出口蔬菜中多種植物生長調節劑的同時測定方法，其特征在 于：步驟3)所述濾膜選用0. 22 y m親油性尼龍66膜。
【專利摘要】本發明公開了一種出口蔬菜中多種植物生長調節劑的同時測定方法。包括提取、凈化、濃縮和超高效液相色譜-三重四級桿/復合線性離子肼質譜(UHPLC-QTRAP)測定等步驟，該方法可同時測定赤霉素、吲哚-3-丁酸、對氯苯氧乙酸、阿維菌素、胺鮮酯、莠去津、西瑪津、6-芐氨基嘌呤、2,4-二氯苯氧乙酸、氯吡苯脲、助壯素、矮壯素、多效唑、烯效唑、脫落酸、噻苯隆、對氟苯氧乙酸17種植物生長調節劑。本發明提供的出口蔬菜中多種植物生長調節劑的同時測定方法具有步驟簡便、耗時短、準確度和精密度高的優點。
【IPC分類】G01N30-02
【公開號】CN104820034
【申請號】CN201510238783
【發明人】曹淑瑞, 李賢良, 唐柏彬, 郗存顯, 周雪, 張雷
【申請人】重慶出入境檢驗檢疫局檢驗檢疫技術中心
【公開日】2015年8月5日
【申請日】2015年5月12日