一種人體血清中降鈣素原定量測定方法、試劑及試劑盒的制作方法
【技術領域】
[0001] 本申請涉及一種人體血清中降鈣素原定量測定方法、試劑及試劑盒。
【背景技術】
[0002] 降鈣素原是一種蛋白質，當嚴重細菌、真菌、寄生蟲感染以及膿毒癥和多臟器功能 衰竭時它在血漿中的水平升高。自身免疫、過敏和病毒感染時降鈣素原不會升高。局部有 限的細菌感染、輕微的感染和慢性炎癥不會導致其升高。細菌內毒素在誘導過程中擔任了 至關重要的作用。
[0003] 降鈣素原反映了全身炎癥反應的活躍程度。影響降鈣素原水平的因素包括被感染 器官的大小和類型、細菌的種類、炎癥的程度和免疫反應的狀況。另外，降鈣素原只是在少 數患者的大型外科術后1~4d可以測到。
[0004] 降鈣素原水平的升高出現在嚴重休克、全身性炎癥反應綜合征（SIRS)和多器官 功能紊亂綜合征（MODS)，即使沒有細菌感染或細菌性病灶。但是，在這些病例中降鈣素原水 平通常低于那些有細菌性病灶的患者。從腸道釋放細胞因子或細菌移位可能引起誘導。
[0005] 降鈣素原是診斷和監測細菌炎性疾病感染的一個參數。降鈣素原的測定可以預示 為：作為一個急性的參數來鑒別診斷細菌性和非細菌性感染和炎癥。監測有感染危險的患 者以及需要重癥監護患者，用來探測細菌感染的全身影響或檢測膿毒性并發癥；評價嚴重 炎癥性疾病臨床進程及預后。
[0006] 目前，檢測降鈣素原的方法有很多，不僅可以定性，亦可以定量，常用的方法有：凝 膠層析及高效液相色譜分析、酶聯免疫吸附測定、免疫發光法和膠體金層析法。這些方法具 有操作繁瑣、耗時長、價格昂貴、過度浪費資源的缺點，不適于常規檢驗，尤其是大規模流行 病學檢查或臨床大批量標本諸多項目的同時檢測。
【發明內容】
[0007] 本申請的目的是一種人體血清中降鈣素原定量測定方法、試劑及試劑盒。
[0008] 本申請采用了以下技術方案：
[0009] 本申請的一方面公開了一種定量測定人體血清中降鈣素原含量的試劑，該試劑 由分別放置的試劑I和試劑Π 組成，其中，所述試劑I含有磷酸二氫鈉、磷酸氫二鈉、聚 乙二醇8000、氯化鈉；所述試劑II含有磷酸二氫鈉、磷酸氫二鈉、羊抗人降鈣素原抗體、吐 溫-20、小牛白蛋白、乳膠。
[0010] 進一步的，所述試劑I中磷酸二氫鈉含量為50-150mmol/L，磷酸氫二鈉含量為 50-150mmol/L，聚乙二醇 8000 的濃度為 1. 5-2. 8 %，氯化鈉含量為 0. 1-0. 5mol/L。
[0011] 進一步的，所述試劑I中磷酸二氫鈉含量為100mm〇l/L，磷酸氫二鈉含量為 100mmol/L，聚乙二醇8000的濃度為2. 5 %，氯化鈉含量為0. 22mol/L。
[0012] 進一步的，所述試劑II中磷酸二氫鈉含量為50-150mmol/L，磷酸氫二鈉含量為 50-150mmol/L，羊抗人降鈣素原抗體含量為0. 1-0. 5g/L，吐溫-20含量為0. 05-0. 5% (V/ V)，小牛白蛋白含量為0. l-o. 5%，乳膠含量為l-2g/L。
[0013] 進一步的，所述試劑II中磷酸二氫鈉含量為100mmol/L，磷酸氫二鈉含量為 100mmol/L，羊抗人降鈣素原抗體含量為0. 2g/L，吐溫-20含量為0. 1 %，小牛白蛋白含量為 0. 4% (V/V)，乳膠含量為 I. 4g/L。
[0014] 本申請的另一方面提供一種定量測定人體血清中降鈣素原含量的試劑盒，其中裝 有上述定量測定人體血清中降鈣素原含量的試劑，該試劑由分別放置的試劑I及試劑II組 成。
[0015] 本申請的另一方面提供一種定量測定人體血清中降鈣素原含量的方法，該方法包 括向血清樣品中加入所述試劑I，37°C孵育1-5分鐘，空白管調零，在一定的波長下測定樣 品吸光度Al ;然后向樣品中加入試劑II，繼續孵育5分鐘后在上述波長下測定吸光度A2， 由下式（1)計算Λ A樣本；用同樣的方法測定校準液的吸光度值Λ A標準；再通過下式（2) 計算得到血清樣品的降鈣素原含量：
[0016] AA = Α2-Α1 (1)
[0017] 血清中降鈣素原含量（ng/mL) = (ΛΑ樣本-ΛΑ空白V(AA標準-ΛΑ空 白）X標準液濃度（2)
[0018] 本方法的原理為：將樣品中的降鈣素原與試劑中羊抗人降鈣素原抗體的致敏乳膠 顆粒反應，出現凝集反應，在510nm波長檢測其吸光度的變化，其變化程度與樣本中的降鈣 素原含量成正比。
[0019] 本發明直接定量測定人血清樣品中降鈣素原含量的試劑盒，是將分別放置的上述 試劑I和試劑II以不同的規格裝入試劑盒包裝中。該試劑盒具有多種不同的規格，可以分 別適用于目前在臨床實驗室普遍使用的各種國內外品牌的自動生化分析儀器。
[0020] 本發明采用的試劑盒及檢測方法只需幾十微升血清，無需離心或電泳等分離處 理，操作簡便，可滿足全自動化分析的要求，適用于大規模樣品的及時準確檢測。
【具體實施方式】
[0021] 實施例一
[0022] 按照下述成分和比例配置下述本發明試劑I及試劑II :
[0023] 試劑 I:
【主權項】
1. 一種定量測定人體血清中降鈣素原含量的試劑，該試劑由分別放置的試劑I和試劑 II組成，其中，所述試劑I含有磷酸二氫鈉、磷酸氫二鈉、聚乙二醇8000、氯化鈉；所述試劑 II含有磷酸二氫鈉、磷酸氫二鈉、羊抗人降鈣素原抗體、吐溫-20、小牛白蛋白、乳膠。
2. 根據權利要求1所述的試劑，其特征在于，所述試劑I中磷酸二氫鈉含量為 50-150mmol/L，磷酸氫二鈉含量為50-150mmol/L，聚乙二醇8000的濃度為1. 5-2. 8 %，氯化 鈉含量為 〇? 1-0. 5mol/L。
3. 根據權利要求2所述的試劑，其特征在于，所述試劑I中磷酸二氫鈉含量為 100mmol/L，磷酸氫二鈉含量為100mmol/L，聚乙二醇8000的濃度為2. 5%，氯化鈉含量為 0.22mol/L〇
4. 根據權利要求1所述的試劑，其特征在于，所述試劑II中磷酸二氫鈉含量為 50-150mmol/L，磷酸氫二鈉含量為50-150mmol/L，羊抗人降鈣素原抗體含量為0. 1-0. 5g/ L，吐溫-20含量為0. 05-0. 5 %，小牛白蛋白含量為0. 1-0. 5 %，乳膠含量為l-2g/L。
5. 根據權利要求4所述的試劑，其特征在于，所述試劑II中磷酸二氫鈉含量為 100mmol/L，磷酸氫二鈉含量為100mmol/L，羊抗人降鈣素原抗體含量為0. 2g/L，吐溫-20含 量為0. 1%，小牛白蛋白含量為0.4%，乳膠含量為1.4g/L。
6. -種定量測定人體血清中降鈣素原含量的試劑盒，其特征在于，其中裝有權利要求 1至5中任一所述的定量測定人體血清中降鈣素原含量的試劑，該試劑由分別放置的試劑I 及試劑II組成。
7. -種定量測定人體血清中降鈣素原含量的方法，該方法包括向血清樣品中加入所述 試劑I，37°C孵育1-5分鐘，空白管調零，在一定的波長下測定樣品吸光度Al;然后向樣品中 加入試劑II，繼續孵育5分鐘后在上述波長下測定吸光度A2,由下式（1)計算AA樣本；用 同樣的方法測定校準液的吸光度值AA標準；再通過下式（2)計算得到血清樣品的降鈣素 原含量： AA=A2-A1 (1) 血清中降鈣素原含量（ng/mL) = (AA樣本-AA空白V(AA標準-AA空白）X標準液濃度 （2)。
【專利摘要】本申請涉及一種定量測定人體血清中降鈣素原含量的試劑，該試劑由分別放置的試劑I和試劑II組成，其中，所述試劑I含有磷酸二氫鈉、磷酸氫二鈉、聚乙二醇8000、氯化鈉；所述試劑II含有磷酸二氫鈉、磷酸氫二鈉、羊抗人降鈣素原抗體、吐溫-20、小牛白蛋白、乳膠。本發明采用的試劑盒及檢測方法只需幾十微升血清，無需離心或電泳等分離處理，操作簡便，可滿足全自動化分析的要求，適用于大規模樣品的及時準確檢測。
【IPC分類】G01N33-68, G01N21-31
【公開號】CN104730252
【申請號】CN201510070009
【發明人】梁朝陽
【申請人】浙江凱成生物科技有限公司
【公開日】2015年6月24日
【申請日】2015年2月10日