一種Cortactin蛋白的應用
【技術領域】
[0001] 本發明屬于醫藥診斷試劑領域，具體涉及一種涉及Cortactin蛋白的應用，特別 是涉及Cortactin蛋白作為乳腺癌轉移EMT相關標志物用于制備乳腺癌轉移診斷試劑。
【背景技術】
[0002] 乳腺癌是女性第二大發病率的惡性腫瘤，乳腺癌轉移是致死的主要原因。通常， 乳腺癌轉移是不可治愈的。在臨床中，乳腺癌轉移的診斷多需要借助影像學檢查或醫生觸 診，而在乳腺癌轉移的早期，很難使用現有的設備和方法進行診斷，現有技術下也沒有特異 性和敏感性均達到要求的診斷標志物。目前臨床使用的乳腺癌分子標志物如ER、PR、Her2、 Ki67、P53、CK5/6、T0PII等在乳腺癌早期和乳腺癌轉移階段的表達均未有顯著差異。因此， 現有的乳腺癌診斷標志物并不能診斷或預測乳腺癌轉移的發生和風險。
[0003] 皮細胞-間充質轉化（EMT)，是指上皮細胞通過特定程序轉化為具有間質表型細 胞的生物學過程。在胚胎發育、慢性炎癥、組織重建、癌癥轉移和多種纖維化疾病中發揮了 重要作用，其主要的特征有細胞黏附分子（如E-鈣黏蛋白）表達的減少、細胞角蛋白細胞 骨架轉化為波形蛋白（Vimentin)為主的細胞骨架及形態上具有間充質細胞的特征等。乳 腺癌轉移與EMT的發生機制與微環境密不可分，其特異性標志物對于臨床有著極高的預后 和治療價值。但是目前，乳腺癌EMT研宄的證據和手段仍不完整，不具備尋找新的EMT靶點 的條件。
【發明內容】
[0004] 本發明中的Cortactin是指皮層肌動蛋白結合蛋白，是一種微絲骨架結合蛋白。 可作為Src激酶直接磷酸化的底物受到酪氨酸磷酸化信號通路的調控，從而成為信號通路 與細胞骨架重要的聯系分子。Cortactin與肌動蛋白纖絲的側面相結合，并直接參與皮層 細胞骨架的組建，它可以通過影響細胞運動前沿微絲骨架重組從而提高細胞迀移的能力。 (Weaver, A. Μ. , Cortactin and tumor invasiveness. Cancer Lett, 2008. 265 (2):p. 14.)本 發明的目的是提供一種Cortactin蛋白在制備乳腺癌轉移診斷試劑中的應用，為乳腺癌復 發轉移風險的評估提供有力的工具。
[0005] 進一步的，上述應用中，Cortactin蛋白可作為乳腺癌轉移EMT相關標志物，用于 診斷與EMT相關的乳腺癌轉移。
[0006] 進一步的，上述應用中，Cortactin蛋白可以作為乳腺癌轉移診斷試劑反應底物， 用于診斷與EMT相關的乳腺癌轉移。本發明所述的診斷檢測可以采用常規的技術方法，如 利用抗原抗體反應的原理制備Cortactin蛋白抗體，利用抗體檢測人體內Cortactin蛋白 水平，或者利用Cortactin蛋白檢測人體內Cortactin蛋白抗體的水平。本發明所述的診 斷檢測樣本可以選擇血漿、血清或體液等。
[0007] 本發明是建立在人乳腺癌細胞株在活體內自然發生的EMT過程上。本發明以具有 人源性乳腺微環境的活體動物模型為基礎進行實驗，該動物模型具有人源性乳腺微環境， 能夠較好的模擬臨床。通過在人源性乳腺微環境的活體動物模型中提取背景高度一致的 細胞系進行高通量蛋白組學對比實驗，發現Cortactin蛋白可用作乳腺癌轉移EMT相關標 志物，然后使用細胞學、分子生物學、動物模型、以及臨床標本檢測等方法，證明Cortactin 可以調節乳腺癌細胞株EMT的狀態，Cortactin的調節可以影響乳腺癌細胞株的轉移效率， Cortactin表達與EMT相關的乳腺癌轉移高度相關。
[0008] 本發明通過對乳腺癌組織的石蠟標本進行蛋白Cortactin的檢測，可對乳腺癌患 者轉移風險進行預測，Cortactin蛋白的下調和缺失與乳腺癌轉移高風險相關；目前臨床 上尚無成熟的乳腺癌轉移相關蛋白標志物的檢測，Cortactin蛋白的臨床免疫組化檢測將 為乳腺癌復發轉移風險的評估提供有力的工具。
【附圖說明】
[0009] 圖1為MDA-MB-231-br銀染二維凝膠電泳圖。
[0010] 圖2為MDA-MB-231銀染二維凝膠電泳圖。
[0011] 圖3為Cortactin表達進行下調對人乳腺癌細胞株MDA-MB-231的細胞學形態影 響。
【具體實施方式】
[0012] 以下通過實施例說明本發明的具體步驟，但不受實施例限制。
[0013] 在本發明中所使用的術語，除非另有說明，一般具有本領域普通技術人員通常理 解的含義。
[0014] 下面結合具體實施例并參照數據進一步詳細描述本發明。應理解，這些實施例只 是為了舉例說明本發明，而非以任何方式限制本發明的范圍。
[0015] 在以下實施例中，未詳細描述的各種過程和方法是本領域中公知的常規方法。
[0016] 下面結合具體實施例對本發明進一步說明。
[0017] 實施例1 創建具有人源性微環境的乳腺癌小鼠模型（參照文獻Wang J，Xia TS，Liu XA，Ding Qj Du Qj Yin Hj Wang S. A novel orthotopic and metastatic mouse model of breast cancer in human mammary microenvironment. Breast Cancer Res Treat. 2010Apr ； 120 (2) : 337-44. PMID: 19350386.公開的方法造模）。在移植正常人源性乳腺組織中接種人 乳腺癌細胞，提高原位成瘤率，檢測并收集對側人源性組織中的轉移乳腺癌細胞及瘤組織。 用于乳腺癌EMT相關轉移蛋白標志物的鑒定和提取。造模結果如表1所示： 表1病理學檢查MDA-MB-231的原位成瘤和轉移成瘤情況
【主權項】
1. 一種Cortactin蛋白的應用，其特征在于將Cortactin蛋白用于制備乳腺癌轉移診 斷試劑。
2. 如權利要求1所述的應用，其特征在于Cortactin蛋白可作為乳腺癌轉移EMT相關 標志物，用于診斷與EMT相關的乳腺癌轉移。
3. 如權利要求1所述的應用，其特征在于Cortactin蛋白作為乳腺癌轉移診斷試劑反 應底物用于制備乳腺癌轉移診斷試劑。
【專利摘要】本發明公開了一種Cortactin蛋白的應用，將Cortactin蛋白用于制備乳腺癌轉移診斷試劑。Cortactin蛋白可作為乳腺癌轉移EMT相關標志物，用于診斷與EMT相關的乳腺癌轉移。本發明通過在人源性乳腺微環境的活體動物模型中提取背景高度一致的細胞系進行高通量蛋白組學對比實驗，發現Cortactin蛋白可用作乳腺癌轉移EMT相關標志物，使用細胞學、分子生物學、動物模型、以及臨床標本檢測等方法，證明Cortactin可以調節乳腺癌細胞株EMT的狀態，Cortactin的調節可以影響乳腺癌細胞株的轉移效率，Cortactin表達與EMT相關的乳腺癌轉移高度相關。
【IPC分類】G01N33-68
【公開號】CN104655856
【申請號】CN201510066650
【發明人】王水, 查小明, 夏添松, 梁夢迪
【申請人】南京醫科大學第一附屬醫院
【公開日】2015年5月27日
【申請日】2015年2月9日