一種用于免疫熒光反應的玻片制備工藝及其玻片的制作方法
【技術領域】
[0001]本發明涉及生物醫學檢測技術領域，尤其涉及一種用于免疫熒光反應的玻片制備工藝以及玻片。
【背景技術】
[0002]免疫學的基本原理是抗原-抗體反應。由于抗原抗體反應具有高度的特異性，所以當抗原抗體發生反應時，只要知道其中的一個因素，就可以查出另一個因素。免疫熒光技術就是將不影響抗原抗體活性的熒光色素標記在抗體(或抗原)上，與其相應的抗原(或抗體)結合后，在熒光顯微鏡下呈現一種特異性熒光反應。
[0003]間接免疫熒光方法是將已知抗原固定在玻片載體上的，利用一抗體，與已知抗原結合，將未結合的免疫球蛋白除去，加入用熒光素標記的抗抗體，與抗原-抗體復合物結合，通過免疫熒光顯微鏡進行結果觀察。現有的玻片在滴加抗體后，再將玻片置于37°C進行孵育，使得抗體與固定在玻片上面的抗原進行，但在這個過程中，現有的玻片有以下的缺點:抗體使用量大，否則易分散不均勻。抗體可能因輕微的晃動而溢出清洗過程中，液體的沖力可能造成玻片或玻片上的抗原物質丟失。37°C環境中，多數微生物在此溫度下可迅速繁殖，會對抗體及抗原造成污染，增加了實驗的不確定性。
【發明內容】
[0004]本發明的目的在于提供一種用于免疫熒光反應的玻片制備工藝，其解決了目前工藝制備的玻片，熒光反應用量大，容易溢出，易被污染的技術問題。
[0005]為達到上述目的，本發明所提出的技術方案為:
[0006]一種用于免疫熒光反應的玻片制備工藝，其包括以下步驟:
[0007]第一步，玻片預處理:將玻片置于烘箱中烘烤，烘烤之后冷卻，然后置于堿性溶液中浸泡，除去表面油污；
[0008]弟—■步，喂'涂疏水抗囷涂層:在玻片的加樣孔的周圍唆涂疏水抗囷層；
[0009]第三步，噴涂抗菌親水層:在玻片的加樣孔處噴涂抗菌親水層。
[0010]其中，所述的第一步中烘箱的溫度為180攝氏度至220攝氏度。
[0011]其中，所述的第二步中疏水抗菌層的噴涂厚度為0.5毫米至I毫米。
[0012]其中，所述的第二步與第三步之間還包括一將噴涂有疏水抗菌層的玻片置于90攝氏度至110攝氏度的恒溫箱中烘烤，疏水抗菌層固化的步驟。
[0013]其中，所述的第三步之后還包括一將玻片置于紫外光固化箱固化的步驟。
[0014]其中，所述的堿性溶液為濃度為lmol/L的NaOH溶液。
[0015]一種玻片，玻片的加樣孔處噴涂有抗菌親水層，加樣孔周圍噴涂有疏水抗菌層。
[0016]與現有技術相比，本發明的一種用于免疫熒光反應的玻片制備工藝，采用這種工藝制備的玻片，抗體使用量小，且不易溢出，從而保證了實驗的準確性。
【附圖說明】
[0017]圖1為本發明一種用于免疫熒光反應的玻片制備工藝的流程圖。
【具體實施方式】
[0018]以下參考附圖，對本發明予以進一步地詳盡闡述。
[0019]請參閱圖1，本發明的一種用于免疫熒光反應的玻片制備工藝，其包括以下步驟:
[0020]第一步SI，玻片預處理:將玻片置于烘箱中烘烤，烘烤之后冷卻，然后置于堿性溶液中浸泡，除去表面油污；其中，所述烘箱的溫度為180攝氏度至220攝氏度；
[0021]弟—■步S2，喂■涂疏水抗囷涂層:在玻片的加樣孔的周圍唆涂疏水抗囷層；并將唆涂有疏水抗菌層的玻片置于90攝氏度至110攝氏度的恒溫箱中烘烤，使疏水抗菌層固化；并且所述的疏水抗菌層的噴涂厚度為0.5毫米至I毫米。
[0022]第三步S3，噴涂抗菌親水層:在玻片的加樣孔處噴涂抗菌親水層。之后將玻片置于紫外光固化箱固化的步驟。
[0023]其中，所述的堿性溶液為濃度為lmol/L的NaOH溶液。
[0024]其中，所述的疏水抗菌原理為:聚四氟乙烯(PTFE)屬于非極性高分子材料，有較低的表面能(20mN/m)。但單一的PTFE材料不經過復雜的表面活化不能與涂層界面粘連而且不能在常溫固化。本發明通過硅烷偶聯劑γ-環氧丙氧基丙基三甲氧基硅烷改性硅溶液，使Si02離子表面的硅醇嫁接部分水水集團，同時提高例子的分散性。而Ti02還能分解有機物、具有抗菌、防污、防臭等作用。因此，改性硅溶膠、Ti02、PTFE乳液雜化形成均勻混合體系而制備超疏水抗囷涂層。
[0025]親水抗菌機理:在雜化溶膠的制備過程中，硅溶膠中的Si02溶膠粒子通過S1-OH集團與HPA中的羥基縮合以共價鍵鏈接丙烯酸酯集團。而S1-OH集團與HPA中的羥基縮合過程中丙烯酸羥丙酯剩余部分可通過與HDDA聚合形成聚合物，該聚合物可牢固地結合在玻璃表面。與此同時，硅溶液中剩余的S1-OH集團又能字縮合成新的S1-O-Si鏈接，形成二氧化硅相互交聯的表面網絡結構。這些帶有大量羥基的Si02納米微粒保證了加樣孔表面的親水性。而Ti02則保證了表面的抗菌性。
[0026]疏水抗菌層的涂料的制備工藝如下:
[0027]將Imly-環氧丙氧基丙基三甲氧基硅烷、5ml無水乙醇溶于1ml水中，調節pH至5.0并在磁力攪拌器下攪拌20min，再加入酸性Si02溶膠(質量分數30%、pH = 5.0，粒徑7-9nm) 20ml制備得到改性的硅溶膠。將3g的152nm粒徑的Ti02粉末(所述Ti02粉末的粒徑在95-400nm之間)可用粒徑范圍95_400nm)加入硅溶膠中調均，并加入0.1g分散劑使Ti02在溶劑中充分分散。將20ml PTFE乳液緩慢地加在上述溶膠體系中并加入2mlDMF、1g聚氨酯樹脂，充分混合。最后用酸調節混合乳膠至pH = 5。反應3h后在30°C的恒溫陳化24h待涂膜。將預處理玻片置200°C烘箱中烘烤lh，烘烤后冷卻后用lmol/L的NaOH溶液浸泡玻片30min充分去除油污。用噴槍將噴涂厚度0.5-lmm的玻片值室溫放置20_30min后值烘箱100°C烘烤lh，使涂層固化。為了保證反應孔出不被噴涂上涂層，用直徑相當的圓柱形石墨柱置于玻片上加樣孔處進行噴涂處理，并隨同玻片一起烘烤至涂層固化完成。
[0028]親水抗菌層的制備工藝如下:
[0029]取50ml的Si02溶液(30% )，升溫至40°C后邊攪拌邊以1.0ml/min的速度滴加5ml的ΗΡΑ (丙烯酸羥丙酯)；滴加完成后再37°C保溫攪拌lh。將5g的152nm粒徑的Ti02粉末(所述Ti02粉末的粒徑在95-400nm之間)可用粒徑范圍95_400nm)加入娃溶膠中調均，并加入0.2g分散劑使Ti02在溶劑中充分分散并溶解。之后轉入旋轉蒸發器中，在37°C下減壓反應并除去水分，反應3h后得到雜化溶膠。向雜化溶膠中加入HDDA(己二醇二丙烯酸酯)0.3g和1，1- 二甲基-1-羥基苯乙酮0.04g，再加入一定量的正丙醇稀釋，攪拌均勻后得到紫外光固化溶液。取適量涂料液加入反應孔中并自然流平，隨后放入紫菀光固化箱中固化形成抗菌親水涂層(lkw，365nm，3min)。
[0030]本發明中用于免疫熒光反應的玻片制備工藝制備的玻片，在結構上面，加樣孔會比表面低0.5-lmm，加樣孔中進行親水抗菌的處理，而加樣孔四周進行了疏水抗菌的處理，相對于現有玻片具有以下的優點:加樣孔比四周表面低0.5-lmm，液體不會因為輕微的晃動而溢出；沖洗時，因加樣孔略低，液體不會直接正面沖刷到抗原上；加樣孔采用了親水的處理，溶液在反應孔超親水涂層的作用下迅速被“拉開”并分散均勻，用量少且反應均勻；加樣孔四周的玻片表面有一層疏水涂層，加樣的液體在接觸到疏水涂層后，迅速“反彈”而不會外流，將反應的液體更好的控制在反應區域內。玻片整體進行了抗菌處理，由于Ti02的抗菌效果，免疫反應同時能夠保證在反應過程中不會迅速被污染。在外部表面疏水處理，加樣孔經超親水處理又略低于外表面的情況下，反應液體可以很好的被控制在加樣孔中。
[0031]本實施例還公開了一種采用如上方法制備的玻片，該玻片的加樣孔處噴涂有抗菌親水層，加樣孔周圍噴涂有疏水抗菌層。
[0032]上述內容，僅為本發明的較佳實施例，并非用于限制本發明的實施方案，本領域普通技術人員根據本發明的主要構思和精神，可以十分方便地進行相應的變通或修改，故本發明的保護范圍應以權利要求書所要求的保護范圍為準。
【主權項】
1.一種用于免疫熒光反應的玻片制備工藝，其特征在于，包括以下步驟: 第一步，玻片預處理:將玻片置于烘箱中烘烤，烘烤之后冷卻，然后置于堿性溶液中浸泡，除去表面油污； 弟—■步，喂'涂疏水抗囷涂層:在玻片的加樣孔的周圍唆涂疏水抗囷層； 第三步，噴涂抗菌親水層:在玻片的加樣孔處噴涂抗菌親水層。
2.如權利要求1所述的用于免疫熒光反應的玻片制備工藝，其特征在于，所述的第一步中烘箱的溫度為180攝氏度至220攝氏度。
3.如權利要求1所述的用于免疫熒光反應的玻片制備工藝，其特征在于，所述的第二步中疏水抗菌層的噴涂厚度為0.5毫米至I毫米。
4.如權利要求1所述的用于免疫熒光反應的玻片制備工藝，其特征在于，所述的第二步與第三步之間還包括一將噴涂有疏水抗菌層的玻片置于90攝氏度至110攝氏度的恒溫箱中烘烤，疏水抗菌層固化的步驟。
5.如權利要求1所述的用于免疫熒光反應的玻片制備工藝，其特征在于，所述的第三步之后還包括一將玻片置于紫外光固化箱固化的步驟。
6.如權利要求1所述的用于免疫熒光反應的玻片制備工藝，其特征在于，所述的堿性溶液為濃度為lmol/L的NaOH溶液。
7.一種采用如權利要求1至6任意一項制備的玻片，其特征在于，玻片的加樣孔處噴涂有抗菌親水層，加樣孔周圍噴涂有疏水抗菌層。
【專利摘要】一種用于免疫熒光反應的玻片制備工藝，其包括以下步驟：第一步，玻片預處理：將玻片置于烘箱中烘烤，烘烤之后冷卻，然后置于堿性溶液中浸泡，除去表面油污；第二步，噴涂疏水抗菌涂層：在玻片的加樣孔的周圍噴涂疏水抗菌層；第三步，噴涂抗菌親水層：在玻片的加樣孔處噴涂抗菌親水層。本發明的一種用于免疫熒光反應的玻片制備工藝，采用這種工藝制備的玻片，抗體使用量小，且不易溢出，從而保證了實驗的準確性。
【IPC分類】G01N33-552
【公開號】CN104614520
【申請號】CN201510081133
【發明人】張二盈
【申請人】深圳市金準生物醫學工程有限公司
【公開日】2015年5月13日
【申請日】2015年2月13日