杏仁質譜檢測特征序列組及檢測試劑盒的制作方法
【技術領域】
[0001] 本發明提供一種杏仁的檢測方法，屬于食品檢測領域，具體地講，涉及用質譜方法 來檢測杏仁中特征序列組的技術。
【背景技術】
[0002] 食物過敏癥是越來越被重視的健康問題，堅果屬于八大食物過敏原之一，涉及食 物過敏癥的90%。樹堅果過敏原對于食品加工和消化是穩定的。在一些種子中，類似的穩 定過敏原已經被確定，因為它們的獨特口味，種子和堅果經常用于食品工業。自90年代W 來，由于食品產品的多樣化，導致與堅果和種子相關的食譜越來越多。不包含堅果或種子的 產品也許會利用加工過堅果和種子的設備，形成了潛在的風險交叉接觸。對于目前假設的 含有豐富堅果或種子成分的產品中過敏原的探索發現，該些過敏原已導致一些嚴重的過敏 反應。該表明，檢測堅果和種子過敏原的方法是食品工業控制制造和處理程序的重要手段。 由于杏仁利用了很長一段時間，尤其是在西歐，許多的努力是投入于杏仁的檢測。
[0003] 1996年，Tariq等發表了一篇關于流行的樹堅果過敏癥的調查研究，其中包括英 國的懷特島的1218新生兒。經過皮膚反應測試，其中1. 2%是樹堅果Ig E陽性，臨床反應 0. 16%。該與Sicherer等人的研究相一致，利用隨機數字撥號電話調查超過12 000在美 國的個體，評估出樹堅果過敏癥患者在0.5%。堅果誘導的過敏性反應有所不同，有的是輕 微的局部反應如口腔過敏綜合征，有的是嚴重的全身過敏性反應，有些甚至是致命和近乎 致命的過敏反應。由于美國和歐洲堅果消費量的不同，導致對過敏原的感受度不同。在歐 洲，杏仁過敏十分普遍，經常與禪樹花粉過敏相結合，而在美國過敏反應主要由胡桃導致， 腰果，杏仁，山核桃，開也果次之。歐盟在2007/68/EC中要求的14種必須標注的過敏原中 包含杏仁，同樣加拿大的CODEX STAN118-1979中同樣對過敏原的標注做出了明確的要求。 為了滿足監管的要求及過敏人群的需求，需要開發相應的檢測方法。目前杏仁的檢測方法 有酶聯免疫法，由于抗體特異性問題很容易導致假陽性結果。
【發明內容】
[0004] 本發明需要解決的技術問題是提供用于質譜檢測的杏仁特征序列。
[0005] 本發明是通過W下技術方案實現的： 1. 杏仁過敏原Prunin氨基酸序列 2. 特征序列的篩選；通過Pinpoint軟件針對杏仁過敏原Prunin找到適合的氨基酸序 列作為檢測標簽。
[0006] 杏仁過敏原Prunin氨基酸序列uniprot ;Q43607 經過篩選確認適合的杏仁質譜檢測標簽組為： 1. GNLDFVPPR 2. ALPDEVLANAYQISR 表1杏仁過敏蛋白特征性膚段及SRM離子對
【主權項】
1. 一種杏仁質譜檢測特征序列組，其特征在于，其為用于通過質譜法檢測杏仁過敏原 的檢測標簽組，含有以下特征序列 ： 特征序列I :GNLDFVPPR 特征序列 2 :ALPDEVLANAYQISR。
2. 根據權利要求2所述的杏仁質譜檢測特征序列組，所述試樣可以是面包、蛋糕、冰激 淋、餅干含有杏仁的加工產品。
3. 權利要求1至2中所述的質譜檢測特征序列組需要用杏仁成分檢測試劑盒處理試 樣，其特征在于包括： (1) 提取緩沖液 〇· 2M Tris-HCl pH8. 1 ?8. 3 ;和 (2) 胰酶IOng/μ 1，溶劑為50mM碳酸氫氨；和 (3) 質譜檢測特征序列組的標肽。
4. 權利要求1至3中一種杏仁的檢測方法，其中步驟包括：以試劑盒中的提取緩沖液 提取試樣中的蛋白質，進行酶解，溶于溶解緩沖液，通過分離器分離肽段，在質譜儀上進行 離子化及檢測，以峰面積及標簽濃度進行線性回歸處理，計算樣品中的杏仁過敏原的有無 及濃度。
5. 根據權利要求4所述的杏仁質譜檢測特征序列組的檢測方法，其在所述步驟中，用 到的分離器可以是碳18柱，也可以是離子交換柱和碳18柱的串接或者離子交換柱和碳18 柱的二維一體柱。
6. 根據權利要求4所述的杏仁質譜檢測特征序列組的檢測器可以是三重四級桿，或復 合型電場軌道阱回旋共振質譜，或串聯質譜。
7. -種檢測結果的判斷方法，其特征在于，如果同時出現杏仁質譜檢測特征序列組的 陽性結果則試樣中含有杏仁，如果出現杏仁質譜檢測特征序列組陰性結果則試樣中不含杏 仁成分。
8. -種檢測結果的判斷方法，其特征在于，通過線性回歸的方法可以對試樣中的杏仁 含量進行定量檢測。
【專利摘要】本發明涉及一種杏仁質譜特征序列組和檢測試劑盒，屬于食品檢驗領域。本發明為一種杏仁質譜檢測特征組，以及一種杏仁過敏原檢測用試劑及杏仁過敏原檢測方法。本發明靈敏度高、精確度好，適合于面包、雪糕等含有杏仁的加工產品中杏仁的檢測，以及杏仁的真偽鑒別，便于在各檢測機構推廣應用。
【IPC分類】G01N30-02
【公開號】CN104569171
【申請號】CN201410235232
【發明人】賀艷, 鄭文杰, 張裕君, 趙璟源, 張霞, 陳其勇, 趙衛東, 許泓
【申請人】天津出入境檢驗檢疫局動植物與食品檢測中心
【公開日】2015年4月29日
【申請日】2014年5月29日