一種聯二脲的液相色譜串聯質譜檢測方法
【技術領域】
[0001] 本發明屬于食品污染物的檢測領域，是利用液相色譜串聯質譜快速、準確地檢測 聯二脈的方法。
【背景技術】
[0002] 在現代工業中，聯二脈（皿C)是生產發泡劑偶氮甲醜胺（ADA)的主要中間體。其 主要工藝是原料水合脫溶液在酸性條件下發生縮合反應，生成中間體皿C，將皿C氧化制成 ADA。在食品行業中，ADA作為一種新型面團改良劑可改善面團的物理操作性質及面制品組 織結構，因而被廣泛應用于面粉及其面制品中。研究發現，添加了 ADA的面粉在揉制面團 時，ADA可通過小麥蛋白還原而轉化為皿C，皿C進一步降解又可轉化為有毒物質鹽酸氨基 脈（SEM)。由于皿C既是ADA的轉化產物又是ADA與SEM轉化的中間產物，其含量的監控對 于準確了解ADA在面制品加工過程的轉化規律起著重要作用。但是目前國內外并沒有能準 確快速檢測皿C的方法，既無國家標準，也無行業標準。
【發明內容】
[0003] 本發明目的在于提供一種操作簡便、分析迅速的皿C的液相色譜串聯質譜 (LC-MS/M巧檢測方法。本發明的技術方案如下：
[0004] (1)樣品預處理
[0005] 將樣品用0. 2mol/L鹽酸溶液進行皿C的浸泡萃取，離也，取上清液并稀釋后過 LC-18固相萃取小柱，棄去流出液，用甲醇進行洗脫，將洗脫液氮吹至干，并用純水定容，用 0. 22 y m膜過濾，從而完成樣品的前處理。
[0006] (2) LC-MS/MS 條件
[0007] 采用 XBridge 邸H Amide 色譜柱（3. 5 y y mX4. 6mmX 150mm);柱溫；35°C ;流動 相；等度洗脫，V(己膳）；V(水）=7〇 ;30 ;流速；0. 6血/min ;時間；8min ;
[0008] 電噴霧，正離子模式；掃描方式；多反應監測；離子噴霧電壓；5500V ;離子源溫度： 60(TC ;霧化氣；55。
[0009] (3)皿C液相色譜串聯質譜檢測標準曲線的繪制
[0010] 準確稱取皿C標準品0. 05g(精確到0. OOOlg)置于50血容量瓶中，先用少部分水 溶解，再用水定容至50mU配制成lOOmg/L的皿C儲備液。稱取6個陰性空白面粉0. 5g (精 確到0. OOOlg)于50mL離也管中，分別加入皿C標準溶液，配置最終分別含有0. 5、1. 0、5. 0、 10.0、15.0、20.0yg/kg皿C的面粉樣品。再按照方案（1)中樣品預處理后，按方案（2)的 檢測條件進行測定。W皿C濃度為橫坐標狂)，峰面積為縱坐標（Y)，繪制標準曲線，用于分 析樣品中皿C的含量。
[0011] (4)樣品的測定
[0012] 取不同的實際樣品，根據方案（1)中樣品預處理后，按方案（2)中檢測條件進行檢 巧1|，并利用方案（3)中得到的標準曲線計算樣品中皿C含量。
[0013] 本發明的優點與有益效果是；采用本發明的LC-MS/MS法檢測食品中皿C，方便快 捷，靈敏度高，檢測限低，有利于皿C的快速檢測，可用于大規模樣品檢測，適于標準化。
【附圖說明】
[0014] 圖1為皿C的標準曲線，橫坐標為皿C濃度，縱坐標為皿C色譜峰峰面積。
【具體實施方式】
[0015] 下面結合實施例對本發明做進一步詳細說明，但本發明并不僅僅局限于下述實施 例。
[001引 實施例1
[0017] 準確稱取皿C標準品0. 05g (精確到0. OOOlg)置于50血容量瓶中，先用少部分水 溶解，再用水定容至50血，配制成lOOmg/L的皿C儲備液，置于4°C冰箱中保存。稱取6個 陰性空白面粉0. 5g (精確到0. OOOlg)于50mL離也管中，分別加入皿C標準溶液，配置最終 濃度分別為0. 5、1.0、5.0、10.0、15.0、20.0yg/kg的標準溶液。根據方案（1)中樣品預處 理后，按方案（2)中檢測條件進行測定，W峰面積（巧對濃度X(mg/L)進行線性回歸，繪制 標準曲線（圖1)，通過不斷降低標準溶液濃度，取信噪比為3時的濃度為最低檢出限。得標 準曲線函數關系為；Y=3594.化19523X，相關系數為R 2=0. 9992,最低檢出限為0. 1 y g/kg。 [001引 實施例2
[0019] 準確稱取3份空白面粉0. 5g(精確至0. OOOlg)作為基質，分別添加皿C際準溶液， 使得面粉中皿C含量分別為2.0、5.0、10.0yg/kg，按照方案（1)中樣品前處理步驟進行處 理，每個濃度水平下做3個平行試驗，按照按方案（2)檢測條件進行檢測，測定該方法的回 收率與精密度。分析結果見表1，加標回收率在89. 00%?102. 73%之間，相對標準偏差均 小于5.0%，方法可靠。
[0020] 表1樣品回收率測定
[0021]
【主權項】
1. 一種聯二脲的液相色譜串聯質譜檢測方法，其特征在于：包括如下步驟： (1) 將樣品用提取溶劑進行聯二脲（HDC)的浸泡萃取，離心，取上清液并稀釋后過 固相萃取小柱，棄去流出液，用洗脫液進行洗脫，收集洗脫液氮吹至干，并用純水定容，用 0. 22 μ m膜過濾,從而完成樣品的前處理； (2) 用液相色譜串聯質譜（HPLC-MS/MS)測定樣品中HDC :液相色譜選用正相色譜柱，乙 腈和純水作為流動相；質譜采用電噴霧，正離子模式，多反應監測的掃描方式； (3) 將步驟（1)所得的經過處理的樣品按步驟（2)設定的參數進行HPLC-MS/MS檢測。
2. 根據權利要求1所述的HDC的HPLC-MS/MS檢測方法，其特征在于：所述步驟（1)中 提取溶劑為〇· 2mol/L鹽酸。
3. 根據權利要求1所述的HDC的HPLC-MS/MS檢測方法，其特征在于：所述步驟（1)中 固相萃取小柱為LC-18小柱。
4. 根據權利要求1所述的HDC的HPLC-MS/MS檢測方法，其特征在于：所述步驟（1)中 的洗脫液為甲醇。
5. 根據權利要求1所述的HDC的HPLC-MS/MS檢測方法，其特征在于：所述步驟（2)中 所用正相色譜柱為XBridge BEHAmide色譜柱。
6. 根據權利要求1所述的HDC的HPLC-MS/MS檢測方法，其特征在于：所述步驟（2)中 流動相的體積比為V(乙腈）：V(純水）=70 :30。
【專利摘要】本發明屬于食品污染物聯二脲(HDC)的檢測領域。用0.2mol/L鹽酸溶液對樣品中的HDC進行浸泡萃取，離心，取上清液進行稀釋，過LC-18固相萃取小柱，甲醇洗脫，將洗脫液氮吹至干，純水定容，0.22μm膜過濾，進液相色譜串聯質譜儀檢測。液相色譜選用XBridge？BEH？Amide正相色譜柱，乙腈和純水(70∶30，體積比)作為流動相；質譜采用電噴霧，正離子模式，多反應監測的掃描方式。最低檢出限為0.1μg/kg。本方法提供了一種檢測速度快，靈敏度高，檢測成本低的HDC測定方法。
【IPC分類】G01N27-62, G01N30-02
【公開號】CN104569167
【申請號】CN201310498768
【發明人】李培, 胡建, 丁洪流, 姚永清, 卞汪鋒, 袁麗紅, 姚衛蓉
【申請人】蘇州市產品質量監督檢驗所, 江陰市產品質量監督檢驗所, 江南大學
【公開日】2015年4月29日
【申請日】2013年10月17日