專利名稱：安全的人類免疫缺陷病毒抗體陽性血清替代物的制作方法
技術領域：
本發明涉及一種陽性血清替代物，具體地說就是一種人類免疫缺陷病毒抗體(HIV Ab)陽性血清的替代物，屬于免疫學技術領域。
隨著人類免疫缺陷病毒抗體酶聯免疫測定試劑盒(HIV Ab EIA KIT)在全國的大規模生產和廣泛使用，該類試劑盒中陽性對照血清的潛在感染性不容忽視。用于該類試劑盒的陽性對照血清雖經滅活處理，但目前對于既保持其中的HIV抗體的活性又使其中的HIV病毒徹底滅活的方法并沒有定論，因此，國內外所有采用間接酶聯免疫吸附測定法(ELISA法)的該類試劑盒中的說明書都注明“本試劑盒所用HIV Ab陽性對照血清(或血漿)已經滅活處理，但仍應視為感染性物質。”另外，由于國家對HIV抗體陽性血漿管理十分嚴格，HIV抗體陽性血清(或血漿)的購買不僅環節多，而且價格高。
為了克服現有技術的不足，本發明的目的在于提供一種安全的HIV Ab陽性血清的替代物，這種替代物應既與HIV Ab陽性血清的性能相當，又能完全避免陽性血清的潛在感染的危險性，而且該替代物還應該具有生產制備簡單、成本低的特點。簡言之，本發明提供一種安全、可靠、易得的HIV Ab陽性血清替代物。
為實現本發明的目的所采取的技術措施是一種安全的抗HIV Ab陽性血清替代物，它是將非人的抗HIV抗體或其處理液與正常人免疫球蛋白或其處理液通過交聯反應得到的交聯物。本發明的實質是把非人的抗HIV Ab的抗體活性(即與HIV抗原的反應活性)和正常人免疫球蛋白的抗原活性(即與抗人免疫球蛋白抗體酶結合物的反應活性)相結合，從而達到消除人抗致病因子抗體陽性血清(或血漿)中可能帶有致病因子的危險性又具備抗致病因子抗體陽性血清的反應性的目的。
其中，非人的抗HIV抗體可以是單克隆抗體、基因工程抗體或HIV抗原(病毒裂解物或合成肽或基因工程肽)免疫動物得到的抗體。可以是完整的抗體或具抗體活性的片段。正常人免疫球蛋白是指無抗HIV抗體活性的人免疫球蛋白，即經酶免疫測定法(EIA)檢測HIV Ab為陰性的人免疫球蛋白，可以是完整的人免疫球蛋白或其片段。
交聯的方法有多種，如常用的有戊二醛法、琥珀酰亞胺吡啶二硫基丙酯(SPDP)法、苯醌法等。
與已有技術相比，采用本發明的技術措施所取得的有益效果1.本發明的替代物來源于非人的抗HIV Ab抗體和正常人免疫球蛋白，因此從根本上避免了陽性血清潛在感染的危險性。
2.EIA檢測結果表明，替代物對二抗酶有很好的反應性；從整體上看，多抗酶的反應強于單抗酶，呈現出放大效果。
3.經37℃熱穩定性試驗，結果表明，替代物的熱穩定性與真實的HIV Ab陽性血清相當，即放37℃后，前3天樣品的反應性都有所下降，后4天則趨于平穩。
4.本發明的替代物與真實的HIV Ab陽性血清對不同濃度的二抗酶有近似一致的反應性和敏感性，它們與作對照的正常人血漿的反應性有很大的區別。
總之，本發明的HIV Ab陽性血清替代物的熱穩定性，對HIV抗原及二抗酶的反應性和敏感性等主要性能指標與真實的HIV Ab陽性血清相當，并從根本上避免了陽性血清的潛在感染的危險性，而且，獲得該替代物的方法簡單、成本低。因此，這種替代物具有安全、可靠、易得的特點，它的應用必將對HIV Ab EIA KIT的生產、使用產生極大影響。具有重要的使用價值和社會效益。
下面結合具體的實施例對本發明作進一步的說明實施例1①將8mg抗HIV-1gp160單克隆抗體(McAb)溶解于2ml 0.1M PH7.5PBS，于23℃下，攪拌加入0.2μmol SPDP，反應30分鐘后，裝透析袋，對0.1M PH7.5PBS透析，換液四次。
②將16mg人丙種球蛋白(抗HIV抗體活性經EIA檢測為陰性)溶解于2ml 0.1M PH7.5PBS，于23℃下，攪拌加入0.4μmol SPDP，反應30分鐘后，裝透析袋，對0.1M PH4.5醋酸鹽緩沖液透析，換液四次。加入終濃度為25mM的DTT(二硫蘇糖醇)于23℃下，反應30分鐘，裝透析袋，對0.1M PH7.5PBS透析，換液四次。
③將①、②中的處理物混合，于23℃反應1小時，于4℃下反應24小時，即得交聯物，離心去沉淀，上清用正常人血清或血漿稀釋備用，并加入萬分之一硫柳汞防腐。
實施例2本步驟與實施例1相同，只是把實施例1中的①和②中的SPDP的用量提高一倍。兩種蛋白的交聯比例有所提高，其他特性不變。
權利要求
1.一種安全的HIV Ab陽性血清替代物，其特征在于它是由非人的抗HIV抗體或其處理液與正常人免疫球蛋白或其處理液通過交聯反應得到的交聯物，該產物能與HIV抗原及抗人免疫球蛋白抗體酶結合物反應，并能在HIV Ab EIA KIT中被檢測出來。
2.按權利要求1所述的HIV Ab陽性血清替代物，其特征在于所述的非人的抗HIV抗體為單克隆抗體、基因工程抗體或HIV抗原免疫動物得到的抗體。
3.按權利要求1或2所述的HIV Ab陽性血清替代物，其特征在于所述的非人的抗HIV抗體為完整的抗體或具有抗體活性的片段。
4.按權利要求1所述的HIV Ab陽性血清替代物，其特征在于所述的正常人免疫球蛋白為經HIV Ab EIA KIT檢測證實為HIV Ab陰性的人血清或血漿提純而來。
5.按權利要求1或4所述的HIV Ab陽性血清替代物，其特征在于所述的正常人免疫球蛋白為完整的免疫球蛋白或具抗原活性的片段。
全文摘要
本發明公開了一種安全的HIV Ab陽性血清替代物，屬于免疫學領域。它是由非人的抗HIV抗體或其處理液與正常人免疫球蛋白或其處理液通過交聯反應得到的交聯物，其反應性、熱穩定性、敏感性等主要性能與真實的HIV Ab陽性血清相當，并從根本上避免了陽性血清的潛在感染的危險性，具有安全、可靠、易得的特點。該產物作為HIV Ab陽性血清的替代物可用于HIV Ab EIA KIT的生產、使用，具有極大的使用價值和社會效益。
文檔編號G01N33/68GK1167920SQ9710910
公開日1997年12月17日 申請日期1997年5月14日 優先權日1997年5月14日
發明者張為, 舒邦良, 王志友, 蔡曉晴, 林剛, 史良如, 余模松 申請人:衛生部武漢生物制品研究所