一種利用斑馬魚模型快速評價抑制升糖功效的方法與流程

本發明屬于食品檢測，具體涉及一種利用斑馬魚模型快速評價抑制升糖功效的方法。

背景技術：

1、隨著我國人民生活水平的提高，人們的日常飲食中攝入的精制碳水量也日益增高，過量碳水化合物的攝入是導致超重、肥胖和糖尿病等代謝性疾病的主要原因之一。面對逐年上升的肥胖率及肥胖引起的代謝性疾病發病率的升高，控制精制碳水化合物的攝入量是治療肥胖及糖尿病等代謝性疾病的重要策略之一。

2、近年來，人們的健康意識也不斷提高，肥胖或糖尿病患者常借助藥物或功能性食品控制碳水化合物攝入量，包括選擇食用低升糖指數、高飽腹感的食物替代傳統的高升糖指數的食物、食用白蕓豆提取物等淀粉酶阻斷劑來減少碳水化合物，甚至注射或服用司美格魯肽等藥物來抑制食欲，從而減少能量攝入，但司美格魯肽作為一種新型藥物，存在胃腸道不良反應、引發低血糖、急性胰腺炎等風險。對于大多數具有控制碳水化合物攝入量需求的人群而言，通過食用阻斷碳水化合物吸收的功能食品是一種更低風險，高性價比的方式。目前，市面上在售的碳水阻斷劑種類繁多，質量良莠不齊，消費者如何選擇一款具有良好的阻斷碳水化合物吸收的產品是一個難題。對于功能食品制造商而言，宣稱具有阻斷碳水吸收、抑制食物升糖的原料數量也十分龐大，因此，如何從海量的原料中篩選出較優的原料進行配方設計也是一個需要攻克的難題。

3、目前，常規的評價抑制食物升糖能力的方法主要包括人體的血糖測試（《ws/t652-2019食物血糖生成指數測定方法》）、小鼠的口服糖耐量實驗、體外的α-淀粉酶或α-葡萄糖苷酶的酶活抑制評價實驗。人體或動物實驗存在檢測周期長、成本高、實驗操作要求高等問題。而體外的α-淀粉酶、α-葡萄糖苷酶等酶活實驗僅在體外水平檢測抑制酶活的能力，并不能全面反應阻斷碳水吸收類產品對生命體抑制升糖能力的整體評價。

4、斑馬魚作為一種新型的模式生物，其基因與人類基因的同源性高達87%，是保健品或功能性食品的一種重要評價模型。中國發明專利申請cn116508687a公開了一種用于測試升糖指數的斑馬魚模型的構建方法，利用斑馬魚模型測試了葡萄糖、大米、蕎麥面等碳水化合物的升糖指數，但該法沒有提出如何評價阻斷碳水類功能原料或食品的評價方法。

5、劉均等人在“基于斑馬魚模型評價白茶的降糖作用”（現代食品科技，2023，39(3):45-54）中以葡萄糖和四氧嘧啶聯合誘導斑馬魚的糖尿病模型，評價了白茶對于糖尿病斑馬魚的降糖作用，該模型同樣不適用于評價原料或產品阻斷碳水化合物吸收的效果。

6、中國發明專利申請cn117491323a公開了一種利用斑馬魚模型快速評價抗糖化功效的方法，所述方法包括：選取受精后48-72小時的斑馬魚幼魚，置于含有糖化誘導試劑和待測樣品的斑馬魚培養基中，在25-29℃條件下培養6-28小時；測定斑馬魚培養基中晚期糖化終末產物的熒光強度，以相對熒光強度表征待測樣品的抗糖化功效。所述糖化誘導試劑為丙酮醛、乙二醛、3-脫氧葡萄糖醛酮、葡萄糖、果糖中的一種或多種。但是該發明是利用斑馬魚評價抗糖化原料抑制糖對肌膚真皮層膠原蛋白、彈力蛋白的糖化效果，不適用于評價一些原料阻斷大分子碳水吸收的功效。

7、因此，開發一種檢測快速、成本低廉的評價阻斷碳水化合物吸收能力的體內方法具有重要意義。

技術實現思路

1、針對現有技術的不足，本發明提供一種利用斑馬魚模型快速評價抑制升糖功效的方法技術，提供一種操作簡單快速、檢測成本低、能實現大批量操作的評價產品阻斷碳水吸收、抑制食物升糖的方法。

2、為了達到本發明的上述目的，本發明采用的具體技術方案為：

3、一種利用斑馬魚模型快速評價抑制升糖功效的方法，包括以下步驟：

4、（1）選取受精后5-7天的斑馬魚幼魚分別置于養殖用水中，設置空白對照組、模型對照組、陽性對照組和待測樣品組，其中模型對照組、陽性對照組和待測樣品組中均加入麥芽糊精，進行培養；

5、（2）測定斑馬魚體內葡萄糖含量，以相對葡萄糖含量表征待測樣品的抑制升糖功效。

6、優選地，所述斑馬魚為ab品系斑馬魚，各組中斑馬魚幼魚的數量為15-30尾。

7、優選地，所述麥芽糊精在養殖用水中的質量濃度為4%-8%。

8、優選地，所述養殖用水的原料包括去離子水、人工海鹽和碳酸氫鈉。

9、進一步優選地，所述養殖用水中人工海鹽的質量濃度為350-450mg/l，所述碳酸氫鈉的質量濃度為150-250mg/l。

10、優選地，所述培養的溫度為26.5-28.5℃，培養的時間為23-25h。

11、優選地，步驟（1）中陽性對照組中還加入阿卡波糖，待測樣品組中還加入待測樣品，所述待測樣品為食品或其有效成分。

12、優選地，步驟（2）中測定斑馬魚體內葡萄糖含量的方法包括以下步驟：

13、收集各組的全部斑馬魚，水洗，pbs溶液洗滌，然后加入pbs溶液，冷凍麻醉致死，勻漿，離心，取上清液，用葡萄糖檢測試劑盒檢測各組的葡萄糖含量，用酶標儀檢測波長在500-510nm處的吸光值，重復測試，取平均值。

14、優選地，步驟（2）中所述相對葡萄糖含量的計算公式為：

15、葡萄糖相對含量=待測樣品吸光度平均值/空白對照樣品吸光度平均值×100。

16、與現有技術相比，本發明具有以下有益效果：

17、（1）相比常規的用于評價食物升糖指數或評價產品抑制食物升糖能力的人體或動物模型的檢測方法，本發明方法具有檢測時間短，操作簡便、檢測成本低、可實現大批量操作的優勢，可進行不同原料阻斷碳水吸收能力的橫向對比。

18、（2）相比常規的用于評價阻斷碳水吸收類產的體外酶活方法，本發明方法利用與人類基因同源性高的斑馬魚模型，在動物體內可更全面反應阻斷碳水吸收類產品對生命體抑制升糖能力的整體評價。

19、（3）相比已有的以葡萄糖為主要的升糖誘導劑的斑馬魚高糖模型，本發明方案首次引入以麥芽糊精為升糖誘導劑的高糖模型，以阿卡波糖作為陽性對照，本發明采用斑馬魚模型可實現對阻斷碳水吸收類產品的功效評價，而已有的以葡萄糖為升糖誘導劑的斑馬魚模型不能實現阻斷碳水吸收類產品的功效評價。

技術特征：

1.一種利用斑馬魚模型快速評價抑制升糖功效的方法，其特征在于，包括以下步驟：

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述斑馬魚為ab品系斑馬魚，各組中斑馬魚幼魚的數量為15-30尾。

3.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述麥芽糊精在養殖用水中的質量濃度為4%-8%。

4.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述養殖用水的原料包括去離子水、人工海鹽和碳酸氫鈉。

5.根據權利要求4所述的方法，其特征在于，所述養殖用水中人工海鹽的質量濃度為350-450mg/l，所述碳酸氫鈉的質量濃度為150-250mg/l。

6.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述培養的溫度為26.5-28.5℃，培養的時間為23-25h。

7.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟（1）中陽性對照組中還加入阿卡波糖，待測樣品組中還加入待測樣品，所述待測樣品為食品或其有效成分。

8.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟（2）中測定斑馬魚體內葡萄糖含量的方法包括以下步驟：

9.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟（2）中所述相對葡萄糖含量的計算公式為：

技術總結
本發明屬于食品檢測技術領域，具體涉及一種利用斑馬魚模型快速評價抑制升糖功效的方法。所述方法包括以下步驟：（1）選取受精后5?7天的斑馬魚幼魚分別置于養殖用水中，設置空白對照組、模型對照組、陽性對照組和待測樣品組，其中模型對照組、陽性對照組和待測樣品組中均加入麥芽糊精，進行培養；（2）測定斑馬魚體內葡萄糖含量，以相對葡萄糖含量表征待測樣品的抑制升糖功效。本發明方法具有檢測時間短，操作簡便、檢測成本低、可實現大批量操作的優勢，可進行不同原料阻斷碳水吸收能力的橫向對比。

技術研發人員：鄧昌勇,史慧茹,鄭雅丹
受保護的技術使用者：浙江衡美健康科技股份有限公司
技術研發日：
技術公布日：2024/10/21