一種甲羥孕酮及其抗體殘留的免疫學檢測試紙卡的制作方法
【專利摘要】本實用新型公開了一種甲羥孕酮及其抗體殘留的免疫學檢測試紙卡，包括塑料卡殼和封裝于塑料卡殼內的試紙條，所述的塑料卡殼的中部設有加樣孔，該加樣孔的兩側分別設有相對稱的第一觀察窗、第二觀察窗和透氣孔，并且在加樣孔的位置設有手持端，所述的試紙條的底層為PVC板構成的支撐層，附著在支撐層中央的為樣品墊，該樣品墊與塑料卡殼上加樣孔的位置相對應，樣品墊左側依次設有緊密相連的金標抗體結合墊、硝酸纖維素膜和吸收墊，樣品墊右側依次設有緊密相連的金標抗原結合墊、硝酸纖維素膜和吸收墊。本實用新型操作簡單，可同時對甲羥孕酮及其抗體殘留進行批量定性檢測。
【專利說明】一種甲羥孕酮及其抗體殘留的免疫學檢測試紙卡
【技術領域】
[0001]本實用新型屬于免疫化學檢測【技術領域】，具體涉及一種定性檢測甲羥孕酮及其抗體殘留的免疫學檢測試紙卡。
【背景技術】
[0002]醋酸甲輕孕酮(Medroxyprogesterone acetate，MPA)，又稱甲輕孕酮、甲孕酮、安宮黃體酮，是一種孕激素類藥物，臨床上主要用于長效避孕、流產、功能性閉經、子宮出血等的治療和一些腫瘤的姑息治療。在畜牧養殖業中，MPA和其他蛋白同化激素藥物一樣，作為生長促進劑用于動物的增肥和非發情期誘導發情、誘發超數排卵、同步發情等，以提高繁殖率和經濟效益。但MPA具有廣泛的毒副作用，可引起不規則性出血、閉經、精神抑郁、失眠、惡心、乳脹等不良反應，甚至導致不孕不育癥，因此MPA作為飼料添加劑在動物體內不斷累積嚴重威脅著人類健康。歐盟成員國早已嚴禁在食源性動物飼養管理中使用MPA，并規定其在食源性動物產品中殘留最高限量(MRL)為“不得檢出”。我國農業部2002年4月發布的第193號公告《食品動物禁用的獸藥及其它化合物清單》中明確將醋酸甲羥孕酮及其制劑列為禁用藥物。
[0003]目前，甲羥孕酮及其衍生物的殘留檢測方法主要有高效液相色譜法(HPLC)、氣相色譜-質譜聯用法(GC-MS )，液相色譜-質譜聯用(LC-MS )或多級聯用技術，如LC-MS-MS等。理化檢測方法，雖然靈敏度高，但需要昂貴的儀器設備、經驗豐富的操作人員，以及復雜的提取凈化過程，不利于在生產實踐中推廣應用。膠體金標記免疫分析法是近年來迅速發展的一種新型分析技術，其特點是簡便快速、成本低、無污染、無需培訓，且所有試劑包含在一根試紙條上，非常適合于現場檢測，具有廣闊的市場前景和應用價值。本課題得到國家自然科學基金(U1204310)和河南省高校科技創新人才計劃(14HASTIT026)資金支持。
【發明內容】
[0004]本實用新型解決的技術問題是提供了一種操作簡便、快速準確、靈敏度高、成本低廉且穩定性好，可進行批量檢測的甲羥孕酮及其抗體殘留的免疫學檢測試紙卡。
[0005]本實用新型的技術方案是:一種甲羥孕酮及其抗體殘留的免疫學檢測試紙卡，其特征在于包括塑料卡殼和封裝于塑料卡殼內的試紙條，所述的塑料卡殼的中部設有加樣孔，該加樣孔的兩側分別設有相對稱的第一觀察窗、第二觀察窗和透氣孔，并且在加樣孔的位置設有手持端，所述的試紙條的底層為PVC板構成的支撐層，附著在支撐層中央的為樣品墊，該樣品墊與塑料卡殼上加樣孔的位置相對應，樣品墊左側依次設有緊密相連的金標抗體結合墊、硝酸纖維素膜和吸收墊，樣品墊右側依次設有緊密相連的金標抗原結合墊、硝酸纖維素膜和吸收墊。
[0006]本實用新型所述的塑料卡殼上加樣孔的形狀為漏斗狀橢圓形開口，塑料卡殼的兩端開有透氣孔，且透氣孔為多個，呈扇形排列，并且透氣孔、第一觀察窗、第二觀察窗和加樣孔處于塑料卡殼的同一水平面上。
[0007]本實用新型所述的樣品墊左側的硝酸纖維素膜上噴涂有醋酸甲羥孕酮-OVA包被原印制的檢測線T線及羊抗鼠IgG溶液印制的質控線C線，兩者間距5mm，其中醋酸甲羥孕酮-OVA包被原印制的檢測線T線位于靠近樣品墊的一側，且醋酸甲羥孕酮-OVA包被原印制的檢測線T線及羊抗鼠IgG溶液印制的質控線C線與塑料卡殼上第一觀察窗的位置相對應。本實用新型所述的樣品墊左側的金標抗體結合墊上灌注有膠體金標記的抗甲羥孕酮單克隆抗體。
[0008]本實用新型所述的樣品墊右側的硝酸纖維素膜上噴涂有抗甲羥孕酮單克隆抗體印制的檢測線T線及羊抗鼠IgG溶液印制的質控線C線，兩者間距5mm，其中抗甲羥孕酮單克隆抗體印制的檢測線T線位于靠近樣品墊的一側，且抗甲羥孕酮單克隆抗體印制的檢測線T線及羊抗鼠IgG溶液印制的質控線C線與塑料卡殼上第二觀察窗的位置相對應。本實用新型所述的樣品墊右側的金標抗原結合墊上灌注有膠體金標記的醋酸甲羥孕酮載體蛋白。
[0009]本實用新型具有如下有益效果:
[0010](I)操作簡單、方便快捷。使用快速檢測試紙卡時無需其它任何儀器或試劑，只需將處理后的樣品溶液用滴管滴入試紙卡加樣孔內4-6滴，3-5 min即可觀察結果。
[0011](2)能同時檢測甲羥孕酮及其抗體殘留，結果形象、直觀。當第一觀察窗硝酸纖維素膜上C線顯示一條紅色“ I ”印跡時，表示甲羥孕酮含量呈陽性，當C線和T線同時出現兩條紅色“ II ”印跡時，表示甲羥孕酮含量呈陰性；當第二觀察窗硝酸纖維素膜上C線顯示一條紅色“ I ”印跡時，表示抗體含量呈陽性，當C線和T線同時出現兩條紅色“ II”印跡時，表示抗體含量呈陰性。結果形象直觀，簡單準確，不容易出現誤判。
[0012](3)塑料卡殼上的透氣孔使溶液“爬坡”順暢，顯色時間短。透氣孔使塑料卡殼內非常狹窄的空間與外界保持空氣流通，保證反應膜正常發揮毛吸作用，使檢測物能夠快速地定向移動至透氣孔，避免了阻滯或者不完全泳動等現象，提高了顯色效率。
【專利附圖】
【附圖說明】
[0013]圖1是本實用新型的結構示意圖，圖2是本實用新型中試紙條的側視圖。
[0014]圖面說明:1、塑料卡殼，2、第一觀察窗，3、第二觀察窗，4、加樣孔，5、透氣孔，6、手持端，7、支撐層，8、樣品墊，9、金標抗體結合墊，10、金標抗原結合墊，11、硝酸纖維素膜，12、質控線C線，13、醋酸甲羥孕酮-OVA包被原印制的檢測線T線，14、抗甲羥孕酮單克隆抗體印制的檢測線T線，15、吸收墊。
【具體實施方式】
[0015]結合附圖詳細描述實施例。一種甲羥孕酮及其抗體殘留的免疫學檢測試紙卡，包括塑料卡殼I和封裝于塑料卡殼I內的試紙條，所述的塑料卡殼I的中部設有加樣孔4，該加樣孔4的兩側分別設有相對稱的第一觀察窗2、第二觀察窗3和透氣孔5，并且在加樣孔4的位置設有手持端6，所述的試紙條的底層為PVC板構成的支撐層7，附著在支撐層7中央的為樣品墊8，該樣品墊8與塑料卡殼I上加樣孔4的位置相對應；樣品墊8左側依次設有緊密相連的金標抗體結合墊9、硝酸纖維素膜11和吸收墊15，其中硝酸纖維素膜11上噴涂有醋酸甲羥孕酮-OVA包被原印制的檢測線T線13和羊抗鼠IgG溶液印制的質控線C線12，兩者間距5mm，且醋酸甲羥孕酮-OVA包被原印制的檢測線T線13和羊抗鼠IgG溶液印制的質控線C線12與塑料卡殼I上第一觀察窗2的位置相對應，金標抗體結合墊9上灌注有膠體金標記的抗甲羥孕酮單克隆抗體；樣品墊8右側依次設有緊密相連的金標抗原結合墊10、硝酸纖維素膜11和吸收墊15，其中硝酸纖維素膜11上噴涂有抗甲羥孕酮單克隆抗體印制的檢測線T線14和羊抗鼠IgG溶液印制的質控線C線12，兩者間距5mm，且抗甲羥孕酮單克隆抗體印制的檢測線T線14和羊抗鼠IgG溶液印制的質控線C線12與塑料卡殼I上第二觀察窗3的位置相對應，金標抗原結合墊10上灌注有膠體金標記的醋酸甲羥孕酮載體蛋白。
[0016]本實用新型所述的塑料卡殼I上加樣孔4的形狀為漏斗狀橢圓形開口，所述的塑料卡殼I的兩端開有呈扇形排列的透氣孔5，并且透氣5孔、第一觀察窗2、第二觀察窗3和加樣孔4處于塑料卡殼I的同一水平面上。
[0017]本實用新型所述的支撐層7是由聚氯乙烯樹脂與穩定劑及輔料配合制成的PVC板。本實用新型所述的吸收墊15是由吸水能力極強的植物長纖維為原材料制成的純白濾紙。本實用新型所述的樣品墊8、金標抗體結合墊9和金標抗原結合墊10是由玻璃纖維棉制作而成的。本實用新型所述的樣品墊8與金標抗體結合墊9和金標抗原結合墊10的疊壓寬度分別為l_2mm，吸收墊15與硝酸纖維素膜11的疊壓寬度為l_2mm。
[0018]本實用新型所述的試紙卡的制備方法:
[0019]I)硝酸纖維素膜的制備:將硝酸纖維素膜置于X-only單向噴點儀平臺上，醋酸甲羥孕酮-OVA包被原或抗甲羥孕酮單克隆抗體放于A池，RaMIgG放于B池，展平壓緊，開機后將抗原和二抗分別點射于硝酸纖維素膜上，形成檢測線T線和質控線C線。室溫自然干燥后，將其浸入封閉液(質量濃度為1%的BSA的PBS緩沖液，pH 7.4)中30min，37°C烘干后，加入干燥劑，4 0C密封保存。
[0020]2)結合墊的制備:將玻璃纖維棉裁成4mm寬的細條，放入含質量濃度為5%的BSA，質量濃度為2%的蔗糖，質量濃度為0.8%的NaCl和質量濃度為0.05%的似乂的PBS處理液中20min，37°C恒溫烘干，然后將金標抗體或金標抗原灌注已處理好的玻璃纖維棉上，真空凍干4h，即為結合墊。
[0021]3)樣品墊的制備:玻璃纖維棉要用含質量濃度為2%的BSA，質量濃度為1%的蔗糖，質量濃度為0.5%的硼酸鈉和質量濃度為0.1%的似乂的PBS處理后，干燥備用，即為樣品墊。
[0022]4)吸收墊的制備:將吸水能力極強的植物長纖維為原材料制作的純白濾紙用切割機切成4 mm寬的細條，并用膠膜進行一側封閉，干燥備用。
[0023]5)試紙條的制備:在支撐板(PVC板)上，將硝酸纖維素膜、結合墊、樣品墊和吸收墊等按一定工藝組裝在一起，用CM4000切割機制成4_寬的試紙條，放入帶干燥劑的密閉容器中儲存。
[0024]6)試紙卡的組裝:按一定工藝將試紙條封裝于帶有加樣孔、第一觀察窗、第二觀察窗和透氣孔的特制的塑料卡殼中，即為本實用新型的試紙卡。
[0025]本實用新型所述的試紙卡的使用方法:
[0026]I)樣品前處理:
[0027]取均質器或搗碎機勻漿后的動物組織樣品5g，加20ml乙腈水溶液(85份乙腈+15份水)混勾，然后沸水浴加熱5min ;混合液定容為原體積，3000r/min離心lOmin，取上清液lml，加入4ml正已燒去脂，旋轉混合5min，3000r/min離心lOmin，取下層溶液用于試紙卡檢測。
[0028]2)樣品滴加:
[0029]將試紙卡平放后，用滴管將樣品溶液滴入試紙卡加樣孔內4-6滴，3-5min后即可觀察結果。
[0030]3)檢測結果分析:
[0031]陰性:若第一觀察窗或第二觀察窗硝酸纖維素膜上質控線C線和檢測線T線同時出現兩條紅色“ II ”印跡時，判為陰性。
[0032]陽性:若第一觀察窗或第二觀察窗硝酸纖維素膜上質控線C線顯示一條紅色“ I ”印跡，而檢測線T線不顯色，判為陽性。
[0033]無效:若第一觀察窗或第二觀察窗硝酸纖維素膜上質控線C線不顯示紅色條帶，則無論檢測線T線是否出現紅色印跡，該試紙卡均判為無效。
[0034]以上實施例僅為說明本實用新型的技術思想，不能以此限定本實用新型的保護范圍，凡是按照本實用新型提出的技術思想，在技術方案基礎上所做的任何改動，均落入本實用新型保護范圍之內。
【權利要求】
1.一種甲羥孕酮及其抗體殘留的免疫學檢測試紙卡，其特征在于包括塑料卡殼和封裝于塑料卡殼內的試紙條，所述的塑料卡殼的中部設有加樣孔，該加樣孔的兩側分別設有相對稱的第一觀察窗、第二觀察窗和透氣孔，并且在加樣孔的位置設有手持端，所述的試紙條的底層為PVC板構成的支撐層，附著在支撐層中央的為樣品墊，該樣品墊與塑料卡殼上加樣孔的位置相對應，樣品墊左側依次設有緊密相連的金標抗體結合墊、硝酸纖維素膜和吸收墊，其中硝酸纖維素膜上噴涂有醋酸甲羥孕酮-OVA包被原印制的檢測線T線及羊抗鼠IgG溶液印制的質控線C線，兩者間距5mm，醋酸甲羥孕酮-OVA包被原印制的檢測線T線位于靠近樣品墊的一側，且醋酸甲羥孕酮-OVA包被原印制的檢測線T線和羊抗鼠IgG溶液印制的質控線C線與塑料卡殼上第一觀察窗的位置相對應，金標抗體結合墊上灌注有膠體金標記的抗甲羥孕酮單克隆抗體，樣品墊右側依次設有緊密相連的金標抗原結合墊、硝酸纖維素膜和吸收墊，其中硝酸纖維素膜上噴涂有抗甲羥孕酮單克隆抗體印制的檢測線T線及羊抗鼠IgG溶液印制的質控線C線，兩者間距5mm，抗甲羥孕酮單克隆抗體印制的檢測線T線位于靠近樣品墊的一側，且抗甲羥孕酮單克隆抗體印制的檢測線T線和羊抗鼠IgG溶液印制的質控線C線與塑料卡殼上第二觀察窗的位置相對應，金標抗原結合墊上灌注有膠體金標記的醋酸甲羥孕酮載體蛋白。
2.根據權利要求1所述的甲羥孕酮及其抗體殘留的免疫學檢測試紙卡，其特征在于:所述的塑料卡殼的兩端開有呈扇形排列的透氣孔，并且透氣孔、第一觀察窗、第二觀察窗和加樣孔處于塑料卡殼的同一水平面上。
【文檔編號】G01N33/74GK204241491SQ201420708887
【公開日】2015年4月1日 申請日期:2014年11月24日 優先權日:2014年11月24日
【發明者】姜金慶, 王秋霞, 楊理, 王自良, 范國英, 齊永華 申請人:河南科技學院