沙眼衣原體、解脲支原體和人型支原體聯合檢測試劑盒的制作方法
【專利摘要】本實用新型公開了一種沙眼衣原體、解脲支原體和人型支原體聯合檢測試劑盒，屬于臨床醫學檢測領域。所述試劑盒由試紙條與盒體兩部分組成：盒體包括盒蓋(7)與盒底(10)，盒體內置檢測三個試紙條。盒體正面可見三個檢視窗(4)和三個加樣孔(6)，盒蓋正面印有信息記錄欄(1)、三個檢測項說明(2)、三組結果判別說明(3)及三個加樣孔標注(5)。本實用新型采用膠體金免疫層析技術，分別針對沙眼衣原體、解脲支原體和人型支原體的特定抗原表位，以高效單克隆抗體作為捕獲抗體和檢測抗體制作這三種病原微生物的聯檢試劑盒，具有檢測方法簡單，結果顯示準確、快速，無需特殊儀器設備的優點。
【專利說明】沙眼衣原體、解脲支原體和人型支原體聯合檢測試劑盒
所屬【技術領域】
[0001]本實用新型屬臨床醫學檢測【技術領域】，具體涉及膠體金免疫層析檢測技術。
【背景技術】
[0002]沙眼衣原體(ChlamydiaTrachomatis, CT)> 解服支原體(Ureaplasmaurealyticum,UU)、人型支原體(Mycoplasma hominis,MH)是感染男性尿道或女性宮頸柱狀上皮細胞的一組病原體，在性傳播疾病中所占比率日益增高，在歐美國家已躍居性傳播疾病的首位；在我國其發病率也呈逐年上升趨勢。近年來，受耐藥菌株增加及治療不規范等諸多因素影響，CT、UU和MH感染的并發癥逐漸增多，其癥狀趨于頑固持續。
[0003]CT是衣原體屬的一種，是一類近似細菌的病原微生物，其細胞內有DNA和RNA兩種核酸，目前發現它有15個血清型，不同的血清型能引起不同的疾病。通常情況下，CT僅感染表層細胞，以眼、鼻、咽部、子宮頸、尿道及直腸粘膜最常受累，CT不僅能引起眼部沙眼，孕婦感染后，病原體上行可引起宮內感染，造成胎盤功能不全，可導致子宮頸炎、子宮內膜炎、輸卵管炎、盆腔炎，從而引起輸卵管性不孕、異位妊娠、胎膜早破、早產和死產，還可能通過受感染的母親經產道傳播給新生兒，引起新生兒結膜炎和肺炎。UU是一種介于細菌和病毒之間的原核微生物，沒有細胞壁，呈多形性，革蘭染色不著色，菌體直徑約0.2、.3 μ m，可通過0.45 μ m的微孔濾膜。UU分2個生物群和14種血清型，健康者體內攜帶UU的概率高達40%飛0%。支原體感染引起的非淋菌性尿道炎(N⑶)已經成為NGU中最主要病因；此外，UU與宮頸炎、盆腔炎、輸卵管妊娠、不良妊娠及不孕等均有關。MH是柔膜菌綱(Mollicutes)支原體屬(Mycoplasmas)的一個種,主要寄生在人體泌尿生殖道,能引起男性前列腺炎、尿道炎，女性產后發熱、反復流產、死產，新生兒初生重低、腦膜炎、肺炎等疾病。感染CT、UU或MH的患者通常病程遷延，若不能及時確診有效治療易產生較為嚴重的后果。
[0004]檢測CT、UU或MH感染常用的方法包括對泌尿生殖道標本進行培養或核酸檢測，或通過人體免疫反應檢測血清中的抗體鑒定感染。培養法是常用的檢測方法之一，該方法可同時進行病原菌的藥敏試驗，但其耗時較長，培養條件不適宜還可能出現漏診；核酸檢測是較靈敏的檢測方法，同時具有較高的準確度，但這種方法需要專業的試劑和儀器，對設備要求較高；常用于對血清學抗體檢測只能反應曾經感染過，不能反應現時感染。而應用膠體金免疫層析技術制作的抗原檢測試劑盒具有操作簡單、無需特殊輔助儀器，結果判讀快速、檢測結果能反應現時感染等優點。
[0005]本實用新型首次應用膠體金免疫層析技術針對CT、UU和MH三種病原菌進行聯檢，提供了一種操作簡便、一份標本多項檢測、結果顯示迅速的試劑盒。
【發明內容】
[0006]本實用新型旨在提供一種CT、UU和MH聯合檢測試劑盒，用于同時檢測患者CT、UU和MH感染情況。本實用新型可解決CT、UU和MH需分別檢測，需特殊儀器及耗時長等問題，提供一種可聯合檢測、特異性強、操作簡單快速的試劑盒，可廣泛用于各級醫療機構的臨床檢測。
[0007]本實用新型由卡盒和試紙條兩部分組成。
[0008]所述卡盒分為盒蓋與盒底兩部分，材質為ABS樹脂(丙烯腈-丁二烯-苯乙烯共聚物)；盒蓋與盒底由柱槽和柱以插接方式連接，盒蓋與盒底均為圓角長方形；卡盒正面可見三個長方形的檢視窗和三個長圓形的加樣孔；在加樣孔位置可見試紙條樣品墊，在檢視窗位置可見反應膜、檢測線T和質控線C ;盒蓋正面印有信息記錄欄、三個檢測項說明、三組結果判別說明及三個加樣孔標注的文字說明。
[0009]所述3個試紙條分別平行置于卡盒內部盒底上的3個卡槽中，由樣品墊、基板、雙面膠、膠體金墊、膠帶、反應膜、吸樣墊組成，膠體金墊上固化有膠體金標記的捕獲抗體，反應膜上包被有檢測抗體和質量控制抗體，分別顯示為檢測線T和質控線C。基板材質為PVC塑料(聚氯乙烯)，樣品墊及膠體金墊材質為無紡布，反應膜為硝酸纖維素膜(Ne膜)，吸樣墊材質為吸油紙。
[0010]本實用新型應用膠體金免疫層析技術，可同時檢測泌尿生殖道分泌物標本中的CT、UU和MH抗原，所述試紙條分別簡稱為CT試紙條、UU試紙條和MH試紙條。所述CT試紙條其特征在于膠體金標記的捕獲抗體和反應膜上的檢測抗體分別是以工程表達的沙眼衣原體MOMP蛋白為抗原制備的一對高效配對鼠源單克隆抗體，簡稱抗體a和抗體b，抗體a用膠體金標記并固化于膠體金墊上作為捕獲抗體，抗體b包被在反應膜檢測線T位置作為檢測抗體；所述UU試紙條其特征在于膠體金標記的捕獲抗體和反應膜上的檢測抗體分別是以工程表達的解脲支原體MB蛋白為抗原制備的一對高效配對鼠源單克隆抗體，簡稱抗體c和抗體d，抗體c用膠體金標記并固化于膠體金墊上作為捕獲抗體，抗體d包被在反應膜檢測線T位置作為檢測抗體；所述MH試紙條其特征在于膠體金標記的捕獲抗體和反應膜上的檢測抗體分別是以工程表達的人型支原體Lmpl蛋白為抗原制備的一對高效配對鼠源單克隆抗體，簡稱抗體e和抗體f，抗體e用膠體金標記并固化于膠體金墊上作為捕獲抗體，抗體f包被在反應膜檢測線T位置作為檢測抗體；所述3個試紙條的質量控制抗體均為羊抗鼠或兔抗鼠抗體，包被在反應膜質控線C位置。
[0011 ] 當檢測CT時，若待測樣品中若含有達到閾值的沙眼衣原體MOMP蛋白，足量的MOMP蛋白與膠體金標記的抗體a形成MOMP蛋白-抗體a-膠體金復合物,在毛細作用下，MOMP蛋白-抗體a-膠體金復合物在NC膜上移動，在檢測線T處與抗體b結合形成肉眼可見的紅色檢測線T，而未與MOMP蛋白結合的抗體a-膠體金復合物則越過檢測線T與包被在NC膜質控線C位置的羊抗鼠或兔抗鼠抗體結合形成紅色質控線C ;若樣本中無達閾值的沙眼衣原體MOMP蛋白，則檢測線T不可見，只見紅色質控線C。檢測UU和檢測MH的原理類同，分別檢測樣品中的解脲支原體MB蛋白和人型支原體Lmpl蛋白。
[0012]本實用新型可同時檢測泌尿生殖道分泌物標本中的CT、UU和MH，避免重復取樣給患者帶來的痛苦。
[0013]本實用新型調整膠體金標記技術，有效組合抗原抗體，使所述試劑盒可在常溫下保存(4°C?30°C);同時，本實用新型具有免疫膠體金技術操作簡單、結果判讀快速、無需特殊設備的優點。
【專利附圖】
【附圖說明】
[0014]圖1是本實用新型的盒蓋(7)正面不意圖。
[0015]圖2是本實用新型的盒蓋(7)背面示意圖。
[0016]圖3是本實用新型的盒底(10)正面示意圖。
[0017]圖4是本實用新型的試紙條正面示意圖。
[0018]圖5是本實用新型的試紙條側面示意圖。
[0019]圖中各數字表示內容如下:1.信息記錄欄2.檢測項說明3.結果判別說明4.檢視窗5.加樣孔標注6.加樣孔7.盒蓋8.柱9.柱槽10.盒底11.試紙條槽12.樣品墊13.膠帶14.反應膜15.檢測線T 16.質控線C 17.吸樣墊18.基板19.雙面膠20.膠體金墊
【具體實施方式】
[0020]提供下述實施例是為了進一步理解本實用新型，并不局限于所述最佳實施方式，不對本實用新型的內容和保護范圍構成限制，任何人在本實用新型的啟示下或是將本實用新型與其他現有技術的特征相組合而得出的任何與本實用新型相同或相似的產品，均落在本實用新型的保護范圍之內。
[0021]本實用新型包括卡盒和試紙條兩部分，下面結合說明書附圖，對本實用新型外觀進行簡述:
[0022]圖1所示為所述試劑盒的盒蓋(7)正面示意圖，盒蓋為圓角長方形；盒蓋正面可見三個檢視窗(3)和個加樣孔(6)，檢視窗為圓角長方形，加樣孔為長圓形；試劑盒組裝好后，在加樣孔位置可見圖4所示試紙條樣品墊(12)，在檢視窗位置可見反應膜(14)、檢測線T
(15)和質控線C (16);盒蓋正面印有信息記錄欄(I)、三個檢測項說明(2)、三組結果判別說明(3 )和三個加樣孔標注(5 )。
[0023]圖2和圖3分別是盒體打開后，盒蓋(7)背面與盒底(10)正面的示意圖，盒底為與盒蓋大小相同的圓角長方形，整個盒體由圖2所示柱(8)和圖3所示柱槽(9)以插接方式連接；圖4所示試紙條置于盒體內部，具體位置在圖3所示盒底(10)上的試紙條槽(11)中；將盒底、試紙條與盒蓋組裝接合呈試劑盒整體。
[0024]圖4所示為試紙條正視圖，圖5所示為試紙條側視圖。所述CT試紙條、UU試紙條及MH試紙條結構相似，現以CT試紙條為例，對試紙條結構進行簡述:試紙條最底層為基板
(18)，材質為PVC塑料(聚氯乙烯);基板上附著一層雙面膠(19)用于固定基板與其他部件；試紙條前端(圖4、圖5所示左側)放置膠體金墊(20)，并覆蓋一層較長樣品墊(12)，樣品墊及膠體金墊材質為無紡布，膠體金墊上固化有抗體a-膠體金復合物；膠體金墊右端壓在反應膜(14)上，并以膠帶(13)在上端固定，反應膜材質為NC膜，反應膜上包被有檢測抗體和質量控制抗體，顯示為檢測線T (15)和質控線C (16);試紙條末端(圖4、圖5所示右側)為吸樣墊(17)，吸樣墊左端覆蓋反應膜右端，以提供毛細作用力并吸收樣品余液，吸樣墊材質為吸油紙。
[0025]本實用新型卡盒部分選擇有資質的供應商進行定制，所述CT試紙條、UU試紙條及MH試紙條制備方法相似，現以CT試紙條為例，現對試紙條制備方法進行描述:
[0026]所述試紙條的膠體金墊制備方法如下:①膠體金的制備:在濃度為0.0049Π).012%的氯金酸中加入其體積的1.3%?2%、濃度為1%?3%的檸檬酸三鈉，煮沸10?20分鐘，得到膠體金溶液?’②膠體金標記抗體a:將①中所得膠體金溶液中用0.2M碳酸鉀溶液調pH至8.(T9.0，加入一定量抗體a，置磁力攪拌器上攪拌均勻后，按0.Γ0.6g/100ml在溶液中加入動物血清蛋白，4°C靜置2小時將②中所得抗體a-膠體金混合溶液經1000轉/分鐘離心30分鐘,棄上清液,取沉淀物將③中所得沉淀物按4"10ml/100ml溶于0.02M pH 7.4 Tris-Hcl緩沖液(含0.2%?0.6%的動物血清蛋白和0.ΟΡ/ΓΟ.06%疊氮鈉)中，得到抗體a-膠體金復合物溶液；?將無紡布浸入④中所得膠體金溶液中，待浸入的無紡布有液體滲出后，37°C干燥,即得包被有抗體a-膠體金復合物的膠體金墊。
[0027]所述試紙條反應膜上的檢測線T和質控線C的包被方法如下:取高濃度抗體b，調濃度至lmg/ml，加入適量甲醛，用專用噴膜機在反應膜中段包被檢測線T ;取高濃度羊抗鼠或兔抗鼠IgG抗體，調濃度為2mg/ml，加入適量甲醛，用專用噴膜機在反應膜中段距檢測線T 4^5mm處包被質控線C ;檢測線T和質控線C均按1(Γ20 μ 1/ml設置噴量，反應膜完成包被后，立即置入45°C烘箱中，干燥I小時即得。
[0028]使用本實用新型檢測時需用一定濃度的磷酸鹽稀釋液對樣品進行稀釋處理，稀釋液成分如下:每 100mL 稀釋液含 0.004M Na2HP04,0.0OlM NaH2P04,0.15M NaCl，溶劑為蒸餾水。檢測時先將泌尿生殖道分泌物棉簽拭子置入無菌試管中加入400 μ L稀釋液攪拌浸泡，溶出樣品。
[0029]使用所述試劑盒檢測方法如下:將干燥密封的試劑盒從包裝內取出，平放在實驗室臺面上，用移液器分別吸取處理后的樣本100 μ L，依次加入3個加樣孔，每孔100 μ L同時將樣本編號填寫在盒蓋正面信息記錄欄，開始觀察結果；20分鐘內，觀察3個檢視窗處質控線C和檢測線T是否顯紅色；若某一檢測項下質控線C和檢測線T顯紅色，則說明該項檢測結果呈陽性；若僅質控線C顯色，則該檢測結果呈陰性。
【權利要求】
1.一種沙眼衣原體、解脲支原體和人型支原體聯合檢測試劑盒，其特征在于一個卡盒內設置3個試紙條；所述試紙條包括沙眼衣原體檢測試紙條、解脲支原體檢測試紙條和人型支原體檢測試紙條，分別針對沙眼衣原體、解脲支原體和人型支原體的特異抗原表位以3對不同的高效鼠源單克隆抗體檢測沙眼衣原體抗原、解脲支原體抗原和人型支原體抗原；所述試劑盒可對一份樣品同時完成沙眼衣原體、解脲支原體和人型支原體3種病原微生物的檢測。
2.根據權利要求1所述的沙眼衣原體、解脲支原體和人型支原體聯合檢測試劑盒，其特征在于所述卡盒分為盒蓋(7)與盒底(10)兩部分；盒蓋與盒底由柱(8)和柱槽(9)以插接方式連接，盒蓋與盒底均為圓角長方形；卡盒正面可見三個檢視窗(4)和三個加樣孔(6)，檢視窗為圓角長方形，加樣孔為長圓形；在加樣孔位置可見試紙條樣品墊(12)，在檢視窗位置可見反應膜(14)、檢測線T (15)和質控線C (16);盒蓋正面印有信息記錄欄(I)、三個檢測項說明(2)、三組結果判別說明(3)及三個加樣孔標注(5)。
3.根據權利要求1所述的沙眼衣原體、解脲支原體和人型支原體聯合檢測試劑盒，其特征在于所述試紙條置于卡盒內部盒底(10)上的平行卡槽(11)中，由樣品墊(12)、基板(18)、雙面膠(19)、膠體金墊(20)、膠帶(13)、反應膜(14)、吸樣墊(17)組成；膠體金墊上固化有膠體金標記的捕獲抗體；反應膜上包被有檢測抗體和質量控制抗體，分別顯示為檢測線T (15)和質控線C (16)。
【文檔編號】G01N33/558GK204142733SQ201420428752
【公開日】2015年2月4日 申請日期:2014年7月31日 優先權日:2014年7月31日
【發明者】李克生, 杜惠芬, 楊立雅, 王開倩, 辛彬先, 武建海, 王金芳, 范麗赟 申請人:李克生