一種電鏡超薄切片批量染色裝置制造方法
【專利摘要】本實用新型提供一種電鏡超薄切片批量染色裝置，由2個染色管，2個染色管蓋，防污套管，預置有固體NaOH的防污套管蓋及染色膠條組成，染色膠條置于染色管內，染色管置于防污套管內。2個染色管分別裝載醋酸鈾染液和檸檬酸鉛染液。本實用新型設計合理，可對超薄切片載網樣品進行批量化染色操作；節省操作時間，實現超薄切片染色批量化；染色過程在密閉容器中進行，隔絕鉛染色液與二氧化碳接觸，減少對樣品的污染；染色使用的染液在不進行染色操作時可直接保存于裝置中，反復使用，節省染液；染色過程更方便、安全，無需另行使用其他容器或設備，降低對容器和環境的污染；減少染色液毒性對操作者造成的污染；制備及使用極其簡單易行，成本極低。
【專利說明】—種電鏡超薄切片批量染色裝置
【技術領域】
[0001]本實用新型涉及一種電子顯微鏡超薄切片批量染色裝置，屬于生物電子顯微科學領域。
技術背景
[0002]在生物電子顯微科學領域中，超薄切片是一種經典方法，電子染色是其中的關鍵技術之一。傳統的超薄切片電子染色，其染液采用醋酸鈾和檸檬酸鉛，具體染色方法是:在蠟板或parafilm M上滴鈾染液，將載有超薄切片的載網的樣品面向下懸浮在染液滴上，15-20分鐘后用鑷子夾持載網，在雙蒸水的燒杯中上下反復沖洗多次，將載網放置在干凈濾紙上，干燥后使用；樣品經醋酸鈾染色后，在蠟板或周圍放置固體NaOH，操作同醋酸鈾染色進行檸檬酸鉛染色。醋酸鈾具有毒性和放射性，檸檬酸鉛不僅有化學毒性，而且極易與空氣中的二氧化碳結合產生碳酸鉛沉淀污染切片。這種常規染色方法效率低，染色后的清洗需要對每個超薄切片載網分別進行多達幾十次的清洗，費時，費力；滴染過程暴露在空氣中，檸檬酸鉛會和空氣中的二氧化碳反應，容易污染切片；檸檬酸鉛在染色過程中受二氧化碳污染而無法重復使用，染色液消耗量大且每次需要清洗染色容器，對環境污染大，操作者在多次操作的過程中所受污染也大。
[0003]針對常規染色技術容易出現的問題，國內外很多實驗室和專業廠商不斷推出各種創新或改良方法。近幾年的多個廠家生產出了幾種染色套裝(2013-2015年度，北京中鏡科儀產品目錄生物篇P17)，在方便染色操作等方面有一定改進，但仍存在一些問題。如:1，一套染色裝置只能對20個左右的載網進行操作，無法滿足日益增長的電鏡樣品需求；2，使用這些染色套裝染色完畢，仍要清洗器皿，操作繁瑣，且清洗干凈與否影響下次染色質量；3，染色液無法重復使用，消耗量大且對環境的污染也較大；4，市售染色套裝價格仍較高，數百元至上千元。
【發明內容】
[0004]本實用新型的目的是克服現有技術存在的不足，提供一種電鏡超薄切片批量染色裝置，由染色管，染色管蓋，防污套管，預置有固體NaOH的防污套管蓋及染色膠條組成，染色膠條置于染色管內，染色管置于防污套管內，染色管蓋與染色管活動連接，防污套管蓋與防污套管活動連接，整套染色裝置中有2個染色管和染色管蓋,分別裝載醋酸鈾染液和朽1檬酸鉛染液。
[0005]具體使用本發明裝置的步驟如下:
[0006]1.非染色時,將醋酸鈾染液保存于染色管中，蓋緊染色管蓋；將朽1檬酸鉛染液保存于另一染色管中，蓋緊管蓋，置于裝有固體NaOH的防污套管中，蓋好防污套管蓋。
[0007]2.染色步驟如下:
[0008](I)取市售染色膠條，或取塑料片自行裁剪做為染色膠條，在染色膠條中間段一面貼上雙面膠，作為載網粘著區，將載有超薄切片的載網粘于染色膠條的兩側，確定不會脫落；
[0009](2)將帶有載網的整根染色膠條置于裝有醋酸鈾染液的染色管中，蓋好管蓋，進行醋酸鈾染色，雙蒸水清洗；
[0010](3)將帶有載網的整根膠條置于防污套管中的裝有檸檬酸鉛染色液的另一染色管中，蓋緊防污套管蓋，但不蓋染色管蓋，進行檸檬酸鉛染色，之后取出帶有載網的染色膠條，以NaOH水溶液、雙蒸水依次清洗；
[0011](4)干燥后取下載網上機鏡檢。
[0012]3.裝置中的醋酸鈾及檸檬酸鉛無需倒出，可直接保存并下次使用(可反復染色20次以上)。
[0013]本實用新型可對超薄切片載網樣品進行批量化染色操作；節省操作時間，實現了超薄切片染色批量化；染色過程在密閉容器中進行，隔絕鉛染色液與二氧化碳接觸，減少對樣品的污染；染色使用的染液在不進行染色操作時可直接保存于裝置中，可反復使用，節省染液；染色過程更方便、安全，無需另行使用其他容器或設備，降低對容器和環境的污染；減少染色液毒性對操作者造成的污染；本實用新型設計合理，制備及使用極其簡單易行，成本極低。
【專利附圖】
【附圖說明】
[0014]圖1為發明的結構示意圖。
[0015]圖2為醋酸鈾染色液保存示意圖。
[0016]圖3為檸檬酸鉛染色液保存示意圖。
[0017]圖4為將載網粘于染色膠條上的示意圖。
[0018]圖5為對載網進行醋酸鈾染色示意圖。
[0019]圖6為分別應用本裝置染色步驟(A)、傳統染色步驟(B)所染色制備的腎小球基底膜電鏡超薄切片樣本。
【具體實施方式】
[0020]下面結合附圖和實施例對本發明及其應用作進一步的說明。
[0021]實施例1 一種電鏡超薄切片染液存儲及批量染色裝置
[0022]參見圖1，本實用新型染色裝置由染色管I，染色管蓋2，預置有固體NaOH的防污套管3,防污套管蓋4及染色膠條5組成,染色膠條5置于染色管I內，染色管I置于防污套管3內，染色管蓋2與染色管I活動連接,防污套管蓋4與防污套管3活動連,接整套染色裝置中有2個染色管I和染色管蓋2，分別裝載醋酸鈾染液和檸檬酸鉛染液。
[0023]1.非染色時，將醋酸鈾染液保存于一染色管I中，蓋緊染色管蓋2，參見圖2。將檸檬酸鉛染液保存于另一染色管I中，蓋緊染色管蓋2，置于預置有固體NaOH 6的防污套管3中，蓋好防污套管蓋4，參見圖3。
[0024]2.染色步驟如下:
[0025](I)參見圖4，將帶有超薄切片的載網7以雙面膠粘于染色膠條5中間段的兩側，確定不會脫落，如果中間段長度達60mm或以上則每根膠條可用于40個及以上的載網的同時染色，同時使用兩根染色膠條則可粘貼載網數達80個；
[0026](2)參見圖5，將帶有載網7的染色膠條5置于裝有醋酸鈾染液的染色管I中，(如有兩根染色膠條則將無雙面膠的面靠在一起，同時置于鈾存儲染色管中，)蓋好染色管蓋2，進行醋酸鈾染色，之后取出帶有載網的染色膠條以雙蒸水清洗；
[0027](3)參見圖1，將帶有載網7的染色膠條5置于裝有檸檬酸鉛染色液的存儲染色管I中，染色膠條和染色管均放于預置有固體NaOH 6的防污套管3中，蓋緊防污套管蓋4,但不蓋存儲染色管蓋2，進行檸檬酸鉛染色，之后取出帶有載網的染色膠條，以NaOH水溶液、雙蒸水依次清洗；
[0028]( 4 )干燥后取下載網上機鏡檢。
[0029]3.裝置中的醋酸鈾及檸檬酸鉛無需倒出，可直接保存并下次使用(可反復染色20次以上)。
[0030]實施例2
[0031]以本裝置實施例1染色步驟處理帶有超薄切片的載網，作為實驗組；以常規染色步驟處理帶有超薄切片的載網，作為對照組；比較兩組染色操作時間及所需試劑，如表I所示，使用本裝置對大批量載網染色時，大大節省了染色時間及試劑。
[0032]
表I __
載網數
__^批量染色法常規染色法
5片載網_30分鐘 30分鐘
40片載網 40分# — 75分鐘用吋 80片載網 50分^中 150分鐘站 _5 片 i_8mL 8ml ImL Iml
mmB —M
m B80 片扭網BmU Smi 16ml.16ml
m-m--^--
___ 400 片載網 8ml、8ml 80ml、80ml
[0033]1.染色過程中，實驗組無需清洗染色用具，染液可反復使用，大大節省實驗試劑耗材，同時減少對環境污染；
[0034]2.參見圖6，以100KV透射電子顯微鏡觀察檢測兩組樣品的染色效果，實驗組(A)和對照組(B)均對比度適中，結構清晰，均無污染，電鏡下腎小球基底膜電子致密物結構均清晰可見。
【權利要求】
1.一種電鏡超薄切片批量染色裝置，其特征在于，由染色管(1)，染色管蓋(2)，預置有固體NaOH的防污套管(3)，防污套管蓋(4)及染色膠條(5)組成，染色膠條(5)置于染色管(O內，染色管(I)置于防污套管(3)內，染色管蓋(2)與染色管(I)活動連接,防污套管蓋(4)與防污套管(3)活動連接。
2.根據權利要求1所述的一種電鏡超薄切片批量染色裝置，其特征在于，整套染色裝置中有2個染色管(I)和染色管蓋(2)，分別裝載醋酸鈾染液和檸檬酸鉛染液。
【文檔編號】G01N1/31GK203981474SQ201420368138
【公開日】2014年12月3日 申請日期:2014年7月6日 優先權日:2014年7月6日
【發明者】王貝貝, 王麗, 洪健 申請人:浙江大學