由穿山龍和刺五加為藥材的中藥復方制劑中6個化學成分的定量分析方法
【專利摘要】本發明公開了一種由穿山龍和刺五加為藥材的中藥復方制劑中6個化學成分的定量分析方法,包括如下步驟：(1)配制混合對照品溶液；(2)配制第一、第二種供試品溶液；(3)含量測定：分別取混合對照品溶液和第一、第二種供試品溶液在高效液相色譜檢測條件為：C18鍵合硅膠為填充劑的色譜柱，以乙腈-甲酸溶液為流動相進行梯度洗脫，檢測器為二極管陣列檢測器和蒸發光散射檢測器聯用進行高效液相色譜檢測，獲得混合對照品溶液和第一、第二種供試品溶液的高效液相色譜圖，以外標法測定供試品中薯蕷皂苷、偽原薯蕷皂苷、原薯蕷皂苷、綠原酸、紫丁香苷和異嗪皮啶的含量。本測定方法操作簡便快速，準確度高、重復性好，可以提高產品的質控水平。
【專利說明】由穿山龍和刺五加為藥材的中藥復方制劑中6個化學成分 的定量分析方法
【技術領域】
[0001] 本發明設及一種中藥復方制劑中6個化學成分的定量分析方法。
【背景技術】
[0002] 由穿山龍和刺五加為藥材的中藥復方制劑主要藥效成分包括馨葫皂巧（馨葫皂 巧元）、延齡草巧、甲基馨葫皂巧、原馨葫皂巧、偽原馨葫皂巧、紫了香巧（刺五加巧B)、刺五 加巧E、異嗦皮晚、搬皮素、綠原酸、紫了香樹脂巧等。眾所周知，中藥復方制劑均W多種有 效成分共同發揮藥效作用，現有的質控標準多W單一成分的含量為指標來評價中藥質量， 難W體現生產過程中多種有效成分的轉移情況，質量難于控制。馨葫皂巧、原馨葫皂巧和偽 原馨葫皂巧屬于醬體皂巧，其紫外吸收屬于末端吸收，紫外檢測條件下色譜峰基線波動很 大，溶劑峰對目標峰造成很大的干擾，由于中藥復方制劑的復雜性，采用二極管陣列檢測器 值AD)檢測方法無法使目標峰與雜質峰達到基線分離。而異嗦皮晚、紫了香巧和綠原酸由于 其結構不具有選擇性，采用蒸發光散射檢測器巧LSD)無法有效分離，且響應很小。
[0003] 目前將醬體皂巧類化合物與有機酸和黃酬類同時進行定量測定未見文獻報道。本 方法將雙波長DAD檢測和化SD檢測串聯使用，將由穿山龍和刺五加為藥材的中藥復方制劑 預處理制成待測樣品，待測樣品注入高效液相色譜儀進行檢測，獲得待測樣品的高效液相 色譜圖；根據待測樣品和各個對照品的高效液相色譜圖中相應吸收峰的峰面積，W外標法 計算待測樣品中馨葫皂巧、偽原馨葫皂巧、原馨葫皂巧、綠原酸、紫了香巧和異嗦皮晚的含 量。
【發明內容】
[0004] 本發明的目的是提供由穿山龍和刺五加為藥材的中藥復方制劑中6個化學成分 的定量分析方法。
[0005] 本發明的技術方案概述如下：
[0006] 由穿山龍和刺五加為藥材的中藥復方制劑中6個化學成分的定量分析方法，包括 如下步驟：
[0007] (1)配制混合對照品溶液；取馨葫皂巧、偽原馨葫皂巧、原馨葫皂巧、綠原酸、紫了 香巧和異嗦皮晚對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每ImL含145 y g馨葫皂巧、231 y g偽原 馨葫皂巧、245 y g原馨葫皂巧、81 y g綠原酸、57 y g紫了香巧和95 y g異嗦皮晚的混合對照 品溶液；
[000引 （2)配制第一種供試品溶液；取由穿山龍和刺五加為藥材的中藥復方制劑，研細， 過四號篩，取約1. Og，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入體積濃度為70%?90%的甲醇 水溶液10血，稱定重量，在功率120W、頻率40曲Z的條件下超聲處理50-60min，放冷至室溫， 再稱定重量，用體積濃度為70%?90%的的甲醇水溶液補足減失的重量，搖勻，濾過，取續 濾液，即得；
[0009] (3)含量測定；分別取步驟（1)獲得的混合對照品溶液和步驟（2)獲得的第一種 供試品溶液在高效液相色譜檢測條件為；Ci8鍵合娃膠為填充劑的色譜柱，W己膳和體積濃 度為0. 1%?0. 5%的甲酸水溶液為流動相進行梯度洗脫，檢測器為二極管陣列檢測器與 蒸發光散射檢測器聯用進行高效液相色譜檢測，獲得混合對照品溶液和第一種供試品溶液 的高效液相色譜圖，W外標法計算供試品中偽原馨葫皂巧、原馨葫皂巧、綠原酸、紫了香巧 和異嗦皮晚的含量；另取步驟（2)獲得的第一種供試品溶液，用體積濃度為70%?90%的 甲醇水溶液稀釋10倍，在高效液相色譜檢測條件為；Ci8鍵合娃膠為填充劑的色譜柱，W己 膳和體積濃度為0. 1%?0. 5%的甲酸水溶液為流動相進行梯度洗脫，檢測器為蒸發光散 射檢測器進行高效液相色譜檢測，獲得第二種供試品溶液的高效液相色譜圖，W外標法計 算供試品中馨葫皂巧的含量；所述己膳用A表示，所述體積濃度為0. 1%?0. 5%的甲酸水 溶液用B表示。
[0010] 所述制劑優選為膠囊劑、片劑或顆粒劑。
[0011] 所述甲醇水溶液的體積濃度優選為85 %。
[0012] 所述甲酸溶液的體積濃度優選為0. 1%。
[0013] .步驟（3)中梯度洗脫的條件優選為0-10min，12%-15%A ;10-20min，15%-25% A;20-30min，25 % -30 % A;30-50min，30 % -40 % A;50-55min，40 % -55 % A ;55-60min， 55% A ;60-64min，55% -60% A。
[0014] 步驟（3)中色譜柱的填充劑的粒徑優選為5 ym。
[0015] 步驟（3)中流動相的流速優選為1. OmL/min。
[0016] 步驟（3)中色譜柱的柱溫優選為26 °C。
[0017] 步驟（3)中二極管陣列檢測器的檢測波長優選為；紫了香巧254nm，異嗦皮晚和綠 原酸350nm。
[001引步驟做中蒸發光散射檢測器檢測條件優選為：載氣流速1.化/min、蒸氣溫度為 100°C、霧化溫度為40°C。
[0019] 本發明的方法同時測定由穿山龍和刺五加為藥材的中藥復方制劑中馨葫皂巧、偽 原馨葫皂巧、原馨葫皂巧含量、綠原酸、紫了香巧和異嗦皮晚六種成分含量，可W提高中藥 復方制劑的質量控制水平。該方法含量測定方法學驗證完全符合要求，本發明的方法操作 簡便快速，準確度高、重復性好，可W提高產品的質控水平，能節約檢測時間和檢測成本。
【專利附圖】
【附圖說明】
[0020] 圖1是馨葫皂巧對照品濃度對數與峰面積響應值對數線性關系圖；
[0021] 圖2是原馨葫皂巧對照品濃度對數與峰面積響應值對數線性關系圖；
[0022] 圖3是偽原馨葫皂巧對照品濃度對數與峰面積響應值對數線性關系圖；
[0023] 圖4是紫了香巧對照品濃度與峰面積響應值線性關系圖；
[0024] 圖5是綠原酸對照品濃度與峰面積響應值線性關系圖；
[0025] 圖6是異嗦皮晚對照品濃度與峰面積響應值線性關系圖；
[0026] 圖7是混合對照品溶液的HPLC色譜圖，峰a為紫了香巧，峰b為綠原酸，峰C為異 嗦皮晚，峰d為原馨葫皂巧，峰e為偽原馨葫皂巧，峰f為馨葫皂巧；
[0027] 圖8是方法學驗證中專屬性考察缺穿山龍陰性對照溶液色譜圖，峰a為紫了香巧， 峰b為綠原酸，峰c為異嗦皮晚；
[002引圖9是方法學驗證中專屬性考察缺刺五加陰性對照溶液色譜圖，峰d為原馨葫皂 巧，峰e為偽原馨葫皂巧，峰f為馨葫皂巧；
[0029] 圖10是供試品溶液的HPLC色譜圖，峰a為紫了香巧，峰b為綠原酸，峰C為異嗦 皮晚，峰d為原馨葫皂巧，峰e為偽原馨葫皂巧，峰f為馨葫皂巧；
【具體實施方式】
[0030] 由穿山龍和刺五加為藥材的中藥復方制劑，按質量比為1. 5:1的比例稱取穿山龍 和刺五加，其中的穿山龍是經水提醇沉后獲得的提取物，刺五加用75%己醇溶液回流提取 后獲得提取物，兩種提取物合并后濃縮干燥成干浸膏，按干浸膏與藥用輔料（磯酸氨巧、硬 脂酸儀等）的質量比為10:1的比例按常規技術制備成膠囊劑、片劑或顆粒劑。
[0031] 本發明選用Agilent 1260高效液相色譜儀、1260DAD檢測器、380-ELSD檢測器、 化em Station色譜工作站。上述儀器的具體型號僅是為了使本領域的技術人員能夠更好地 理解本發明，但并不對本發明作任何限制。
[0032] 下面結合具體實施例對本發明作進一步的說明。
[0033] 實施例1
[0034] 由穿山龍和刺五加為藥材的中藥復方膠囊劑中6個化學成分的定量分析方法，包 括如下步驟：
[0035] (1)配制混合對照品溶液；取馨葫皂巧、偽原馨葫皂巧、原馨葫皂巧、綠原酸、紫了 香巧和異嗦皮晚對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每ImL含145 y g馨葫皂巧、231 y g偽原 馨葫皂巧、245 y g原馨葫皂巧、81 y g綠原酸、57 y g紫了香巧和95 y g異嗦皮晚的混合對照 品溶液；
[0036] (2)配制第一種供試品溶液；取由穿山龍和刺五加為藥材的中藥復方膠囊劑，除 去膠囊殼，研細，過四號篩，取約l.Og，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入體積濃度為 85%的甲醇水溶液lOmL，稱定重量，在功率120W、頻率40曲Z的條件下超聲處理50min，放冷 至室溫，再稱定重量，用體積濃度為85%的甲醇水溶液補足減失的重量，搖勻，濾過，取續濾 液，即得；
[0037] 做含量測定；分別取步驟（1)獲得的混合對照品溶液和步驟似獲得的第一 種供試品溶液在高效液相色譜檢測條件為；Ci8鍵合娃膠為填充劑的色譜柱，填充劑的粒 徑為5 ym，色譜柱的柱溫為26°C，W己膳和體積濃度為0. 1 %的甲酸水溶液為流動相進 行梯度洗脫，己膳用A表示，體積濃度為0. 1 %的甲酸水溶液用B表示；梯度洗脫的條件 為 O-lOmin，12 % -15 % A ;10-20min，15 % -25 % A ;20-30min，25 % -30 % A ;30-50min， 30% -40% A ;50-55min，40% -55% A ;55-60min，55% A ;60-64min，55% -60% A ;流動相 的流速為1. OmL/min ;檢測器為二極管陣列檢測器與蒸發光散射檢測器聯用進行高效液相 色譜檢測，二極管陣列檢測器的檢測波長為：紫了香巧254nm，異嗦皮晚和綠原酸350nm，蒸 發光散射檢測器檢測條件為：載氣流速1.化/min、蒸氣溫度為100°C、霧化溫度為40°C，獲 得混合對照品溶液和第一種供試品溶液的高效液相色譜圖，W外標法計算供試品中偽原馨 葫皂巧、原馨葫皂巧、綠原酸、紫了香巧和異嗦皮晚的含量；另取步驟（2)獲得的第一種供 試品溶液，用體積濃度為85%的甲醇水溶液稀釋10倍得到第二種供試品溶液，在高效液相 色譜檢測條件為；Ci8鍵合娃膠為填充劑的色譜柱，填充劑的粒徑為5 y m，色譜柱的柱溫為 26°C，W己膳和體積濃度為0. 1 %甲酸水溶液為流動相進行梯度洗脫，己膳用A表示，體積 濃度為0. 1%的甲酸水溶液用B表示；梯度洗脫條件為O-lOmin，12% -15% A ;10-20min， 15 % -25 % A ;20-30min，25 % -30 % A ;30-50min，30 % -40 % A ;50-55min，40 % -55 % A ; 55-60min，55% A ;60-64min，55% -60% A ;流動相的流速為1. 0血/min ;檢測器為蒸發光散 射檢測器進行高效液相色譜檢測，蒸發光散射檢測器檢測條件為；載氣流速1.化/min、蒸 氣溫度為l〇〇°C、霧化溫度為40°C，獲得第二種供試品溶液的高效液相色譜圖，W外標法計 算供試品中馨葫皂巧的含量。
[003引實施例2
[0039] 由穿山龍和刺五加為藥材的中藥復方包糖衣片劑中6個化學成分的定量分析方 法，包括如下步驟：
[0040] (1)配制混合對照品溶液：同實施例1步驟（1);
[0041] (2)配制第一種供試品溶液；取由穿山龍和刺五加為藥材的中藥復方包糖衣片 劑，除去糖衣，研細，過四號篩，取約1. Og，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入體積濃度為 70%的甲醇水溶液lOmL，稱定重量，在功率120W、頻率40曲Z的條件下超聲處理55min，放冷 至室溫，再稱定重量，用體積濃度為70%的甲醇水溶液補足減失的重量，搖勻，濾過，取續濾 液，即得；
[0042] (3)含量測定；分別取步驟（1)獲得的混合對照品溶液和步驟（2)獲得的第一 種供試品溶液在高效液相色譜檢測條件為；Ci8鍵合娃膠為填充劑的色譜柱，填充劑的粒 徑為5 ym，色譜柱的柱溫為26°C，W己膳和體積濃度為0.3%的甲酸水溶液為流動相進 行梯度洗脫，己膳用A表示，體積濃度為0. 3 %的甲酸水溶液用B表示；梯度洗脫的條件 為 O-lOmin，12 % -15 % A ;10-20min，15 % -25 % A ;20-30min，25 % -30 % A ;30-50min， 30% -40% A ;50-55min，40% -55% A ;55-60min，55% A ;60-64min，55% -60% A ;流動相 的流速為1. OmL/min ;檢測器為二極管陣列檢測器與蒸發光散射檢測器聯用進行高效液相 色譜檢測，二極管陣列檢測器的檢測波長為：紫了香巧254nm，異嗦皮晚和綠原酸350nm，蒸 發光散射檢測器檢測條件為：載氣流速1.化/min、蒸氣溫度為100°C、霧化溫度為40°C，獲 得混合對照品溶液和第一種供試品溶液的高效液相色譜圖，W外標法計算供試品中偽原馨 葫皂巧、原馨葫皂巧、綠原酸、紫了香巧和異嗦皮晚的含量；另取步驟（2)獲得的第一種供 試品溶液，用體積濃度為70%的甲醇水溶液稀釋10倍，得到第二種供試品溶液，在高效液 相色譜檢測條件為；Ci8鍵合娃膠為填充劑的色譜柱，填充劑的粒徑為5 y m，色譜柱的柱溫 為26°C，W己膳和體積濃度為0. 3%甲酸水溶液為流動相進行梯度洗脫，己膳用A表示，體 積濃度為0. 3%的甲酸水溶液用B表示；梯度洗脫條件為O-lOmin，12% -15% A ; 10-20min， 15 % -25 % A ;20-30min，25 % -30 % A ;30-50min，30 % -40 % A ;50-55min，40 % -55 % A ; 55-60min，55% A ;60-64min，55% -60% A ;流動相的流速為1. 0血/min ;檢測器為蒸發光散 射檢測器進行高效液相色譜檢測，蒸發光散射檢測器檢測條件為；載氣流速1.化/min、蒸 氣溫度為l〇〇°C、霧化溫度為40°C，獲得第二種供試品溶液的高效液相色譜圖，W外標法計 算供試品中馨葫皂巧的含量。
[0043] 實施例3
[0044] 由穿山龍和刺五加為藥材的中藥復方顆粒劑中6個化學成分的定量分析方法，包 括如下步驟：
[0045] (1)配制混合對照品溶液：同實施例1步驟（1);
[0046] (2)配制第一種供試品溶液；取由穿山龍和刺五加為藥材的中藥復方制劑顆粒 劑，研細，過四號篩，取約1. Og，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入體積濃度為90%的甲 醇水溶液1〇111以稱定重量，在功率120W、頻率40曲Z的條件下超聲處理60min，放冷至室溫， 再稱定重量，用體積濃度為90%的甲醇水溶液補足減失的重量，搖勻，濾過，取續濾液，即 得；
[0047] (3)含量測定；分別取步驟（1)獲得的混合對照品溶液和步驟（2)獲得的第一 種供試品溶液在高效液相色譜檢測條件為；Ci8鍵合娃膠為填充劑的色譜柱，填充劑的粒 徑為5 ym，色譜柱的柱溫為26°C，W己膳和體積濃度為0.5%的甲酸水溶液為流動相進 行梯度洗脫，己膳用A表示，體積濃度為0. 5 %的甲酸水溶液用B表示；梯度洗脫的條件 為 O-lOmin，12 % -15 % A ;10-20min，15 % -25 % A ;20-30min，25 % -30 % A ;30-50min， 30% -40% A ;50-55min，40% -55% A ;55-60min，55% A ;60-64min，55% -60% A ;流動相 的流速為1. OmL/min ;檢測器為二極管陣列檢測器與蒸發光散射檢測器聯用進行高效液相 色譜檢測，二極管陣列檢測器的檢測波長為：紫了香巧254nm，異嗦皮晚和綠原酸350nm，蒸 發光散射檢測器檢測條件為：載氣流速1.化/min、蒸氣溫度為100°C、霧化溫度為40°C，獲 得混合對照品溶液和第一種供試品溶液的高效液相色譜圖，W外標法計算供試品中偽原馨 葫皂巧、原馨葫皂巧、綠原酸、紫了香巧和異嗦皮晚的含量；另取步驟（2)獲得的第一種供 試品溶液，用體積濃度為90 %的甲醇水溶液稀釋10倍，得到第二種供試品溶液，在高效液 相色譜檢測條件為；Ci8鍵合娃膠為填充劑的色譜柱，填充劑的粒徑為5 y m，色譜柱的柱溫 為26°C，W己膳和體積濃度為0. 5%甲酸水溶液為流動相進行梯度洗脫，己膳用A表示，體 積濃度為0. 5%的甲酸水溶液用B表示；梯度洗脫條件為O-lOmin，12% -15% A ; 10-20min， 15 % -25 % A ;20-30min，25 % -30 % A ;30-50min，30 % -40 % A ;50-55min，40 % -55 % A ; 55-60min，55% A ;60-64min，55% -60% A ;流動相的流速為1. 0血/min ;檢測器為蒸發光散 射檢測器進行高效液相色譜檢測，蒸發光散射檢測器檢測條件為；載氣流速1.化/min、蒸 氣溫度為l〇〇°C、霧化溫度為40°C，獲得第二種供試品溶液的高效液相色譜圖，W外標法計 算供試品中馨葫皂巧的含量。
[0048] 表1是S個不同樣品中的馨葫皂巧、偽原馨葫皂巧、原馨葫皂巧、綠原酸、紫了香 巧和異嗦皮晚的含量表；
[0049] 表 1 [00 加]
【權利要求】
1. 由穿山龍和刺五加為藥材的中藥復方制劑中6個化學成分的定量分析方法，其特征 是包括如下步驟： (1) 配制混合對照品溶液：取薯蕷皂苷、偽原薯蕷皂苷、原薯蕷皂苷、綠原酸、紫丁香苷 和異嗪皮啶對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每lmL含145 y g薯蕷皂苷、231 y g偽原薯蕷 阜苷、245 y g原薯菌阜苷、81 y g綠原酸、57 y g紫丁香苷和95 y g異嘆皮啶的混合對照品溶 液； (2) 配制第一種供試品溶液：取由穿山龍和刺五加為藥材的中藥復方制劑，研細，過四 號篩，取約1. Og，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入體積濃度為70%?90%的甲醇水溶 液10mL，稱定重量，在功率120W、頻率40kHz的條件下超聲處理50-60min，放冷至室溫，再 稱定重量，用體積濃度為70%?90%的的甲醇水溶液補足減失的重量，搖勻，濾過，取續濾 液，即得； (3) 含量測定：分別取步驟⑴獲得的混合對照品溶液和步驟⑵獲得的第一種供試 品溶液在高效液相色譜檢測條件為：C18鍵合硅膠為填充劑的色譜柱，以乙腈和體積濃度為 0. 1%?0. 5%的甲酸水溶液為流動相進行梯度洗脫，檢測器為二極管陣列檢測器與蒸發光 散射檢測器聯用進行高效液相色譜檢測，獲得混合對照品溶液和第一種供試品溶液的高效 液相色譜圖，以外標法計算供試品中偽原薯蕷皂苷、原薯蕷皂苷、綠原酸、紫丁香苷和異嗪 皮啶的含量；另取步驟（2)獲得的第一種供試品溶液，用體積濃度為70%?90%的甲醇水 溶液稀釋10倍，在高效液相色譜檢測條件為：C18鍵合硅膠為填充劑的色譜柱，以乙腈和體 積濃度為〇. 1%?〇. 5%的甲酸水溶液為流動相進行梯度洗脫，檢測器為蒸發光散射檢測 器進行高效液相色譜檢測，獲得第二種供試品溶液的高效液相色譜圖，以外標法計算供試 品中薯蕷皂苷的含量；所述乙腈用A表示，所述體積濃度為0. 1 %?0. 5%的甲酸水溶液用 B表示。
2. 根據權利要求1所述的方法，其特征是所述制劑為膠囊劑、片劑或顆粒劑。
3. 根據權利要求1所述的方法，其特征是所述甲醇水溶液的體積濃度為85%。
4. 根據權利要求1所述的方法，其特征是所述甲酸溶液的體積濃度為0. 1%。
5. 根據權利要求1所述的方法，其特征是步驟（3)中梯度洗脫的條件為0-10min， 12 % -15 % A ； 10-20min, 15 % -25 % A ；2〇-30min, 25 % -30 % A ；3〇-50min, 30 % -40 % A ； 50-55min,40% -55% A ；55-60min, 55% A ；6〇-64min, 55% -60% A〇
6. 根據權利要求1所述的方法，其特征是步驟（3)中色譜柱的填充劑的粒徑為5 ym。
7. 根據權利要求1所述的方法，其特征是步驟（3)中流動相的流速為1. OmL/min。
8. 根據權利要求1所述的方法，其特征是所述步驟（3)中色譜柱的柱溫為26°C。
9. 根據權利要求1所述的方法，其特征是所述步驟（3)中二極管陣列檢測器的檢測波 長為：紫丁香苷254nm，異嘆皮啶和綠原酸350nm。
10. 根據權利要求1所述的方法，其特征是所述步驟（3)中蒸發光散射檢測器檢測條 件為：載氣流速1. 8L/min、蒸氣溫度為100°C、霧化溫度為40°C。
【文檔編號】G01N30/02GK104502485SQ201410843130
【公開日】2015年4月8日 申請日期:2014年12月30日 優先權日:2014年12月30日
【發明者】蔣建蘭, 任為之, 孫秀婷, 王順仙 申請人:天津大學, 天津世紀天龍藥業有限公司