壯藥材滇桂艾納香hplc指紋圖譜的建立方法
【專利摘要】本發明公開了一種壯藥材滇桂艾納香HPLC指紋圖譜的建立方法，采用高效液相色譜，以滇桂艾納香中的主要成分原兒茶酸和原兒茶醛為參照物，據此獲得了壯藥滇桂艾納香藥材共有模式的指紋圖譜。指紋圖譜共有色譜峰13個，它能充分反應滇桂艾納香藥材中的化學成分，信息量豐富，方法重現性良好，對控制藥材質量和鑒別藥材優劣提供了更有力的理論依據，提高了壯藥滇桂艾納香藥材的質量控制和真偽鑒別的水平，實現了快速、準確地鑒別滇桂艾納香的真偽優劣。
【專利說明】壯藥材滇桂艾納香HPLC指紋圖譜的建立方法
【技術領域】
[0001] 本發明屬于藥物分析中的中藥材指紋圖譜【技術領域】，尤其涉及一種壯藥材滇桂艾 納香HPLC指紋圖譜的建立方法。
【背景技術】
[0002] 滇桂艾納香為菊科艾納香屬植物Blumeariparia(Bl)DC的干燥全草，在廣西尤其 是在百色地區有較長的使用歷史。滇桂艾納香主產于廣西西南部（百色、德保、凌云）、廣 東南部、云南西南至東南部，具有活血、止血、利水的功效，用于經期提前、產后血崩、產后浮 月中，不孕癥，陰瘡。
[0003] 中藥指紋圖譜是指中藥材或中成藥經光譜或色譜等現代分析技術得到的中藥各 組分群體共有特征的圖譜或圖象。中藥指紋圖譜是一種綜合的、可量化的鑒定手段，它是建 立在中藥化學成分系統研宄的基礎上，主要用于評價中藥材以及中藥制劑半成品質量的真 實性、優良性和穩定性。從中藥全面質量控制的角度看，高效液相色譜（HPLC)指紋圖譜在 國際上容易獲得認可，包括美國、英國、法國、加拿大、德國、日本和印度在內的許多國家更 愿意接受HPLC指紋圖譜。
[0004] 近年來的生藥學、化學中記載的壯藥滇桂艾納香主要有性狀鑒別、顯微鑒別及理 化鑒別方法，其質量標準起草說明中也用到了薄層鑒別方法，但這些方法都存在提供的信 息量小，樣品化學成分體現不完全，可鑒別的成分數量較少等問題，因而不能很好地代表壯 藥滇桂艾納香的整體質量。LeelakittisinBenjakarn等（滇桂艾納香的高效液相色譜指 紋圖譜的鑒別方法的研宄，中國臨床新醫學，2014年，第5期）對滇桂艾納香指紋圖譜鑒別 研宄進行了有益嘗試，他采用原兒茶酸、綠原酸為參照物進行標定，共標定11個共有峰。
【發明內容】
[0005] 本發明要解決的技術問題是提供一種簡便、穩定、精密度高、重現性好的壯藥材滇 桂艾納香HPLC指紋圖譜的建立方法，以實現快速、準確地鑒別滇桂艾納香的真偽優劣。
[0006] 為解決上述技術問題，本發明采用以下技術方案：壯藥材滇桂艾納香HPLC指紋圖 譜的建立方法，包括以下步驟：
[0007] (1)制備對照品溶液：加甲醇配制成每1ml分別含原兒茶酸、原兒茶醛25yg的混 合對照品溶液；
[0008] (2)供試品溶液的制備：精密稱取壯藥滇桂艾納香藥材粗粉，加水浸泡后，煎煮3 次，每次1. 5h，濾過，合并濾液并濃縮至約40ml，用稀鹽酸調pH后，用乙醚萃取，合并乙醚液 蒸干后用甲醇溶解殘渣，濾過，即可；
[0009] (3)色譜條件：色譜柱以十八烷基鍵合硅膠為填料，采用梯度洗脫，流動相為甲醇 與冰醋酸組成的梯度洗脫液，紫外檢測：波長為200?300nm;
[0010] (4)測定：精密吸取供試品溶液注入高效液相色譜儀，照高效液相色譜法測定，得 到指紋圖譜。
[0011] 步驟（2)按以下操作進行：精密稱取滇桂艾納香藥材粗粉約2?8g，精密穩定，加 水煎煮3次，每次加水200ml煎煮1. 5h，其中第一次加水200ml，先浸泡10?40min后，煎 煮；濾過，合并3次煎煮的濾液并濃縮至約40ml，放冷，用稀鹽酸調pH= 2-3,用乙醚萃取 4次，合并乙醚液，蒸干，殘渣加甲醇適量溶解，并轉移至10ml的量瓶中，加甲醇至刻度，搖 勻，濾過，即可。
[0012] 步驟（2)按以下操作進行：精密稱取滇桂艾納香藥材粗粉約5g，精密穩定，加水煎 煮3次，每次加水200ml煎煮1. 5h，其中第一次加水200ml，先浸泡30min后，煎煮；濾過， 合并3次煎煮的濾液并濃縮至約40ml，放冷，用稀鹽酸調pH= 2-3,用乙醚萃取4次，每次 2〇1111、151111、151111、151111，合并乙醚液，蒸干，殘渣加甲醇適量溶解，并轉移至1〇1111的量瓶中， 加甲醇至刻度，搖勻，用0. 45ym微孔濾膜濾過，取續液即可。
[0013] 步驟（3)的色譜條件為：色譜柱以十八烷基鍵合硅膠為填料，采用梯度洗脫，流 動相為1 %的冰醋酸（色譜用）與甲醇組成的梯度洗脫液，柱溫25°C，紫外檢測：波長為 256nm，流速為1.Oml/min，分析時間為85min。
[0014] 梯度洗脫的程序設為時間梯度Omin- 4min-lOmin- 20min- 35min- 40min- 85m in;對應的梯度洗脫液按以下體積比由流動相A甲醇和流動相Bl%冰醋酸組成，流動相A的 體積百分數梯度10%-10%-18% - 23% - 25% - 40% - 40%，流動相B的體積百分數 梯度 90%- 90%- 82%- 77%- 75%- 60%- 60%。
[0015] 步驟（4)按以下操作進行：精密吸取供試品溶液10?20y1注入高效液相色譜 儀，照高效液相色譜法測定，得到指紋圖譜。
[0016] 指紋圖譜共有色譜峰有13個，其保留時間分別為5. 919min、14. 515min、 17.867min、21.74min、24. 579min、25. 785min、29. 338min、31. 880min、37. 903min、 49. 410min、51. 148min、53. 373min、60. 022min。
[0017] 為提高壯藥滇桂艾納香藥材的質量控制和真偽鑒別的水平，發明人采用高效液相 色譜，以滇桂艾納香中的主要成分原兒茶酸和原兒茶醛為參照物，研發了一種壯藥材滇桂 艾納香HPLC指紋圖譜的建立方法，據此獲得了壯藥滇桂艾納香藥材共有模式的指紋圖譜， 指紋圖譜共有色譜峰13個，它能充分反應滇桂艾納香藥材中的化學成分，信息量豐富，方 法重現性良好，對控制藥材質量和鑒別藥材優劣提供了更有力的理論依據。相對于現有技 術，本發明具有以下突出優勢：
[0018] (1)將不同產地和不同采集時間的壯藥滇桂艾納香藥材，在同一指紋圖譜條件下 分別建立指紋圖譜，然后將其進行融合，達到信息互補，增加指紋圖譜的信息量，從而提高 其指紋鑒定能力，以實現指紋圖譜的全面和整體評價。
[0019] (2)供試品制備方便，分析時間短，色譜條件容易實現。
[0020](3)方法簡便、穩定，精密度高、重現性好。
[0021] (4)適于對壯藥滇桂艾納香藥材真偽、產地和品質的鑒別和控制，彌補了現有質量 控制技術的不足，使滇桂艾納香藥材的質量控制更加完善和科學。
【專利附圖】
【附圖說明】
[0022] 圖1是對照品HPLC圖譜，圖中：1原兒茶酸，2原兒茶醛。
[0023] 圖2是壯藥滇桂艾納香藥材的HPLC指紋圖譜。
[0024]圖3是各批壯藥滇桂艾納香藥材的HPLC指紋圖譜整合疊加圖。
【具體實施方式】
[0025] 發明人將13批不同來源的滇桂艾納香藥材，在同一指紋圖譜條件下分別建立指 紋圖譜，然后將這些指紋圖譜進行融合，確定其共用指紋特征圖，增加指紋圖譜的信息量， 從而提高其指紋鑒定能力，以實現指紋圖譜的全面和整體評價。為了更一步闡述本發明的 研宄過程，以下通過實例來說明。
[0026] 實施例1
[0027] 1實驗材料和儀器
[0028] 1. 1藥材：產地及采收時間如表1。
[0029] 表1滇桂艾納香藥材的產地及采收時間
【權利要求】
1. 一種壯藥材滇桂艾納香HPLC指紋圖譜的建立方法，其特征在于包括以下步驟： (1) 制備對照品溶液：加甲醇配制成每lml分別含原兒茶酸、原兒茶醛25 y g的混合對 照品溶液； (2) 供試品溶液的制備：精密稱取壯藥滇桂艾納香藥材粗粉，加水浸泡后，煎煮3次，每 次1. 5h，濾過，合并濾液并濃縮至約40ml，用稀鹽酸調pH后，用乙醚萃取，合并乙醚液蒸干 后用甲醇溶解殘渣，濾過，即可； (3) 色譜條件：色譜柱以十八烷基鍵合硅膠為填料，采用梯度洗脫，流動相為甲醇與冰 醋酸組成的梯度洗脫液，紫外檢測：波長為200?300nm ; (4) 測定：精密吸取供試品溶液注入高效液相色譜儀，照高效液相色譜法測定，得到指 紋圖譜。
2. 根據權利要求1所述的壯藥材滇桂艾納香HPLC指紋圖譜的建立方法，其特征在于步 驟（2)按以下操作進行：精密稱取滇桂艾納香藥材粗粉約2?8g，精密穩定，加水煎煮3次， 每次加水200ml煎煮1. 5h，其中第一次加水200ml，先浸泡10?40min后，煎煮；濾過，合并 3次煎煮的濾液并濃縮至約40ml，放冷，用稀鹽酸調pH = 2-3,用乙醚萃取4次，合并乙醚 液，蒸干，殘渣加甲醇適量溶解，并轉移至l〇ml的量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，濾過，即可。
3. 根據權利要求2所述的壯藥材滇桂艾納香HPLC指紋圖譜的建立方法，其特征在于步 驟（2)按以下操作進行：精密稱取滇桂艾納香藥材粗粉約5g，精密穩定，加水煎煮3次，每 次加水200ml煎煮1. 5h，其中第一次加水200ml，先浸泡30min后，煎煮；濾過，合并3次煎 煮的濾液并濃縮至約40ml，放冷，用稀鹽酸調pH = 2-3,用乙醚萃取4次，每次20ml、15ml、 15ml、15ml，合并乙醚液，蒸干，殘渣加甲醇適量溶解，并轉移至10ml的量瓶中，加甲醇至刻 度，搖勻，用0. 45 y m微孔濾膜濾過，取續液即可。
4. 根據權利要求1所述的壯藥材滇桂艾納香HPLC指紋圖譜的建立方法，其特征在于 步驟（3)的色譜條件為：色譜柱以十八烷基鍵合硅膠為填料，采用梯度洗脫，流動相為1% 的冰醋酸（色譜用）與甲醇組成的梯度洗脫液，柱溫25°C，紫外檢測：波長為256nm，流速為 1. Oml/min，分析時間為 85min。
5. 根據權利要求4所述的壯藥材滇桂艾納香HPLC指紋圖譜的建立方法，其特征在 于：所述梯度洗脫的程序設為時間梯度Omin -4min - lOmin - 20min - 35min -40min -85m in;對應的梯度洗脫液按以下體積比由流動相A甲醇和流動相Bl%冰醋酸組成，流動相A的 體積百分數梯度10%-10%-18% - 23% - 25% - 40% - 40%，流動相B的體積百分數 梯度 90%- 90%- 82%- 77%- 75%- 60%- 60%。
6. 根據權利要求1所述的壯藥材滇桂艾納香HPLC指紋圖譜的建立方法，其特征在于步 驟（4)按以下操作進行：精密吸取供試品溶液10?20 y 1注入高效液相色譜儀，照高效液 相色譜法測定，得到指紋圖譜。
7. 根據權利要求1所述的壯藥材滇桂艾納香HPLC指紋圖譜的建立方法，其特征在于： 所述指紋圖譜共有色譜峰有13個，其保留時間分別為5. 919min、14. 515min、17. 867min、 21. 74min、24. 579min、25. 785min、29. 338min、31. 880min、37. 903min、49. 410min、 5L 148min、53. 373min、60. 022min〇
【文檔編號】G01N30/88GK104458993SQ201410767029
【公開日】2015年3月25日 申請日期:2014年12月11日 優先權日:2014年12月11日
【發明者】蔣冰清, 羅盛東, 陳良 申請人:廣西萬壽堂藥業有限公司