一種胎兒纖維連接蛋白檢測試劑盒的制作方法
【專利摘要】本發明涉及生物檢測領域，特別是涉及一種定量檢測胎兒纖維連接蛋白fFN的檢測試劑盒及其制備方法和用途。本發明所提供的一種定量檢測胎兒纖維連接蛋白fFN的檢測試劑盒，包括試紙卡，試紙卡包括底板、及位于底板表面的從加樣端開始依次排列的樣品墊、金標墊、硝酸纖維素膜和吸水墊，所述金標墊上包含胎兒纖維連接蛋白fFN抗體，所述硝酸纖維素膜上包被有檢測線和質控線，所述金標墊上的胎兒纖維連接蛋白fFN抗體采用熒光微球標記。本發明所提供的定量檢測胎兒纖維連接蛋白fFN的檢測試劑盒首次將胎兒纖維連接蛋白fFN通過熒光微球免疫層析技術進行檢測，兼具靈敏性和特異性，具有操作快速簡便、結果準確、經濟適用等優點。
【專利說明】一種胎兒纖維連接蛋白檢測試劑盒
【技術領域】
[0001] 本發明涉及生物檢測領域，特別是涉及一種胎兒纖維連接蛋白檢測試劑盒及其制 備方法和用途。
【背景技術】
[0002] 胎兒纖維連接蛋白（fetal Fibroneetin，fFN)是一種糖蛋白，分子量約500KD，有 20種不同的分子形式。胎兒纖維連接蛋白（fFN)為子宮絨毛膜細胞外的基質成分，主要由 滋養層細胞產生，存在于絨毛膜與蛻膜之間，為一種對絨毛膜和蛻膜起連接和黏附作用的 糖蛋白，可于孕產婦的陰道后穹窿部位的分泌物中檢出。國內外均對fFN指標的臨床應用 及臨床意義進行了大量的研究，fFN相關同行評議文章超過300篇。一般認為fFN濃度與 早產及分娩相關性較強，檢測時間段為孕22-35周（早產）或孕足月（分娩）。因此，在孕 22-35周之間，宮頸陰道分泌物中fFN的水平與是否發生早產有很好的相關性，fFN檢測可 作為預測早產的一個重要客觀指標。
[0003] 胎兒纖維連接蛋白（fFN)檢測是美國FDA批準，用于有早產癥狀的孕婦和有高危 因素孕婦的早產風險性評估，用于22-30孕周無癥狀孕婦的常規篩查和24-35孕周有早產 癥狀孕婦檢查。fFN檢測是美國婦產科醫師協會（ACOG)推薦的常規用于早產診斷的項目。
[0004] 目前已知的胎兒纖維連接蛋白（fFN)檢測方法還存在較多缺陷，如操作較為繁 瑣，耗時較長，不適宜臨床上使用。前我國市場上的胎兒纖維連接蛋白（fFN)檢測試劑盒準 確度、靈敏度、重復性仍然較差。
【發明內容】
[0005] 鑒于以上所述現有技術的缺點，本發明的目的在于提供一種快速測定胎兒纖維連 接蛋白fFN含量的試劑盒，用于解決現有技術中的問題。
[0006] 為實現上述目的及其他相關目的，本發明提供一種快速測定胎兒纖維連接蛋白 fFN含量的試劑盒，包括試紙卡，所述試紙卡包括底板、及位于底板表面的從加樣端開始依 次排列的樣品墊、金標墊、硝酸纖維素膜和吸水墊，所述金標墊上包含胎兒纖維連接蛋白 fFN單克隆抗體，所述硝酸纖維素膜上包被有檢測線和質控線，所述金標墊上的胎兒纖維連 接蛋白fFN單克隆抗體采用熒光微球標記。
[0007] 優選的，所述金標墊上的胎兒纖維連接蛋白fFN單克隆抗體采用180nm突光微球 標記，EX(nm) = 650/Em(nm) = 670,具有信號受背景干擾小，檢測靈敏度高，結果重復性好 的優點。
[0008] 優選的，所述底板為PVC底板。
[0009] 優選的，所述硝酸纖維素膜上，檢測線位于離加樣端較近一側，質控線位于離加樣 端較遠一側。
[0010] 優選的，所述檢測線上包被有胎兒纖維連接蛋白fFN單克隆抗體。所述金標墊上 的胎兒纖維連接蛋白FFN單克隆抗體與檢測線上的胎兒纖維連接蛋白fFN單克隆抗體可以 是相同的抗體，也可以是不同的抗體。
[0011] 優選的，質控線上包被羊抗鼠抗體。
[0012] 優選的，所述樣品墊采用緩沖液處理，所述緩沖液選自PBS緩沖液、TriS-HCl緩沖 液、甘氨酸緩沖液、硼酸鹽緩沖液和檸檬酸-磷酸鹽緩沖液中的一種或多種的組合，緩沖液 的濃度為20-200mM。
[0013] 優選的，本發明所述的金標墊還經過預處理，預處理時所使用的預處理緩沖液選 自甘氨酸緩沖液、TriS-HCl緩沖液、硼酸鹽緩沖液的一種或多種的組合，緩沖液的濃度為 5_50mM〇
[0014] 優選的，所述緩沖液還包括反應增強劑，所述反應增強劑選自PEG4000、PEG6000、 PEG8000和PEG20000中的任意一種，所述反應增強劑的濃度為10?50g/L。
[0015] 優選的，所述緩沖溶液還包括表面活性劑，所述表面活性劑選自S-19 TWEEN 20、 S-20 TWEEN 80、S-13 TRITON X-45、S-14 TRITON X-100、S-15 TRITON X305 中的任意一種 或多種的組合，所述表面活性劑的濃度為10?50g/L。
[0016] 優選的，為了使得試劑盒具有更佳的靈敏度和顯色效果，本發明所述的金標墊在 預處理時所使用的預處理緩沖液包括下列組分：水蘇糖、明礬、果糖二磷酸鈉、六偏磷酸鈉 和甘氨酸，且水蘇糖、明礬、果糖二磷酸鈉、六偏磷酸鈉、甘氨酸的總濃度為3. 5 - 7. 5g/L， 緩沖液的pH值為7. 2 - 7.6。
[0017] 優選的，各組分在緩沖液中的濃度為：
[0018]
【權利要求】
1. 一種定量檢測胎兒纖維連接蛋白fFN的檢測試劑盒，包括試紙卡，試紙卡包括底板、 及位于底板表面的從加樣端開始依次排列的樣品墊、金標墊、硝酸纖維素膜和吸水墊，所述 金標墊上包含胎兒纖維連接蛋白fFN抗體，所述硝酸纖維素膜上包被有檢測線和質控線， 所述金標墊上的胎兒纖維連接蛋白fFN抗體采用熒光微球標記。
2. 如權利要求1所述的定量檢測胎兒纖維連接蛋白fFN的檢測試劑盒，其特征在于，所 述硝酸纖維素膜上，檢測線位于離加樣端較近一側，質控線位于離加樣端較遠一側。
3. 如權利要求1所述的定量檢測胎兒纖維連接蛋白fFN的檢測試劑盒，其特征在于，所 述檢測線上包被有胎兒纖維連接蛋白fFN抗體。
4. 如權利要求1所述的定量檢測胎兒纖維連接蛋白fFN的檢測試劑盒，其特征在于，質 控線上包被羊抗鼠抗體。
5. 如權利要求1所述的定量檢測胎兒纖維連接蛋白fFN的檢測試劑盒，其特征在 于，所述樣品墊采用緩沖液處理，所述緩沖液選自PBS緩沖液、Tris-HCl緩沖液、甘氨酸 緩沖液、硼酸鹽緩沖液和檸檬酸-磷酸鹽緩沖液中的一種或多種的組合，緩沖液的濃度為 20-200mM〇
6. 如權利要求1所述的定量檢測胎兒纖維連接蛋白fFN的檢測試劑盒，其特征在于，所 述金標墊采用緩沖液處理，所述緩沖液選自甘氨酸緩沖液、Tris-HCl緩沖液、硼酸鹽緩沖液 的一種或多種的組合，緩沖液的濃度為5-50mM。
7. 如權利要求6所述的定量檢測胎兒纖維連接蛋白fFN的檢測試劑盒，其特征在 于，所述緩沖液中還包括反應增強劑，所述反應增強劑選自PEG4000、PEG6000、PEG8000或 PEG20000中的任意一種，所述反應增強劑的濃度為10?50g/L。
8. 如權利要求1所述的定量檢測胎兒纖維連接蛋白fFN的檢測試劑盒，其特征在于，還 包括卡殼，所述卡殼包括背卡和上蓋，所述背卡設有試紙卡卡槽，所述試紙卡嵌于所述試紙 卡卡槽內，所述上蓋設有測試窗和加樣孔，所述測試窗的位置與所述檢測線和質控線的位 置相配合，所述加樣孔的位置與所述樣品墊的位置相配合。
9. 如權利要求1所述的定量檢測脂胎兒纖維連接蛋白fFN的檢測試劑盒，其特征在于， 所述檢測試劑盒用于定量檢測胎兒纖維連接蛋白fFN的含量。
10. 根據權利要求1?9任一權利要求所述的定量檢測脂胎兒纖維連接蛋白fFN的檢 測試劑盒的制備方法，具體包括如下步驟： 1) 用熒光微球標記的胎兒纖維連接蛋白fFN抗體溶液噴涂金標墊，制得包含胎兒纖維 連接蛋白fFN抗體的金標墊； 2) 在硝酸纖維素膜的檢測線和質控線上分別噴涂胎兒纖維連接蛋白fFN抗體及羊抗 鼠抗體，制得包被后的硝酸纖維素膜； 3) 將樣品墊、步驟1)制備的金標墊、步驟2)制備的硝酸纖維素膜、吸水墊依次粘貼在 底板上，切裁制得檢測試紙卡；最后將檢測試紙卡裝入卡殼制得檢測試劑盒。
【文檔編號】G01N33/68GK104391121SQ201410737851
【公開日】2015年3月4日 申請日期:2014年12月5日 優先權日:2014年12月5日
【發明者】吳瑜佳 申請人:重慶乾德生物技術有限公司