一種快速測定血清或血漿中甘膽酸含量的試劑盒的制作方法
【專利摘要】本發明涉及生物檢測領域，特別是涉及一種定量檢測甘膽酸（CG）的檢測試劑盒及其制備方法和用途。本發明提供一種定量檢測甘膽酸（CG）的檢測試劑盒，包括試紙卡，試紙卡包括底板、及位于底板表面的從加樣端開始依次排列的樣品墊、金標墊、硝酸纖維素膜和吸水墊，所述金標墊上包含甘膽酸（CG）抗體，所述硝酸纖維素膜上包被有檢測線和質控線，所述金標墊上的甘膽酸（CG）抗體采用熒光微球標記。本發明所提供的定量檢測甘膽酸（CG）的檢測試劑盒首次將甘膽酸（CG）通過熒光微球免疫層析技術進行檢測，兼具靈敏性和特異性，具有操作快速簡便、結果準確、經濟適用等優點。
【專利說明】一種快速測定血清或血漿中甘膽酸含量的試劑盒
【技術領域】
[0001] 本發明涉及生物檢測領域，特別是涉及一種快速測定血清或血漿中甘膽酸含量的 試劑盒及其制備方法和用途。
【背景技術】
[0002] 甘膽酸（CholyglyCine，CG)是膽酸與甘氨酸結合而成的結合型膽酸，在肝細胞 內，膽固醇經過及其復雜的酶促反應，轉變成初級膽汁酸。其中有膽酸（CA)和鵝去氧膽酸 (CD-CA)。膽酸的類固醇核上有三個羥基（C3、C7、C12)，側鏈末端的羥基以肽鍵與甘氨酸結 合。
[0003] CG由肝細胞合成，正常代謝途徑為腸肝循環，經毛細膽管、膽管排入膽囊，隨同膽 汁進入十二指腸，幫助食物消化。95%膽酸在回腸末端重吸收，經門靜脈再回肝臟，由肝細 胞攝取再利用。在血清中主要以蛋白結合形式存在，溢入體循環的總量小于1%。在正常情 況下，外周血中膽酸含量甚微，正常成人無論空腹或餐后，其血清CG濃度穩定在低水平。 當肝細胞受損時，肝細胞攝取CG能力下降，致使血中CG含量增高；膽汁郁滯時，肝臟排泄膽 酸發生障礙,而返流血液循環的CG含量增高，也使血CG含量增高。測定血清甘膽酸（CG) 是評價肝細胞功能及其肝膽系物質循環功能的敏感指標之一。
[0004] 臨床上急性肝炎、慢性活動性肝炎、原發性肝癌、肝硬化、慢遷肝、梗阻性肝病、 腸一肝循環障礙、膽石癥伴黃疸、膽管、膽囊排泄功能障礙患者血CG均明顯高于正常人。 [0005] 甘膽酸同時也是妊娠晚期血清中最主要的膽汁酸組分。正常妊娠時孕婦血清CG 水平隨孕周逐步增高，大量雌激素會引起肝細胞膜的改變，減少竇狀膜漿的流動性，從而出 現膽汁分泌減少，返流入血，出現妊娠期內膽汁淤積現象，CG水平升高。胎盤絨毛靜脈腔 內外均處于高濃度膽汁酸刺激之中，引起血管收縮，胎盤絨毛表面血管痙攣，氧合血流量減 少，導致胎兒缺氧，可出現各種并發癥，如胎兒宮內窘迫、早產等。
[0006] 目前已知的甘膽酸檢測方法有放射免疫法（RIA)、酶聯免疫吸附法（ELISA)、化學 發光法（CL)等。但這些方法均存在較多缺陷，如放射免疫法同位素試劑具有放射性污染及 有效期較短和操作不方便等弊端，酶聯免疫吸附法操作較為繁瑣，耗時較長，不適宜臨床上 使用。化學發光法盡管靈敏度較高，但需要專用的測定設備，費用較高不利于推廣。而膠乳 增強免疫比濁法操作簡便、可適用于全自動生化分析儀，檢測時間不到10分鐘適合臨床推 廣。但目前我國市場上的甘膽酸檢測試劑盒準確度、靈敏度、重復性仍然較差。
【發明內容】
[0007] 鑒于以上所述現有技術的缺點，本發明的目的在于提供一種快速測定血清或血漿 中甘膽酸（CG)含量的試劑盒，用于解決現有技術中的問題。
[0008] 為實現上述目的及其他相關目的，本發明提供一種快速測定血清或血漿中甘膽酸 (CG)含量的試劑盒，包括試紙卡，所述試紙卡包括底板、及位于底板表面的從加樣端開始依 次排列的樣品墊、金標墊、硝酸纖維素膜和吸水墊，所述金標墊上包含CG單克隆抗體，所述 硝酸纖維素膜上包被有檢測線和質控線，所述金標墊上的CG單克隆抗體采用熒光微球標 記。
[0009] 優選的，所述金標墊上的CG單克隆抗體采用180nm熒光微球標記，EX (nm) = 650/ Em (nm) = 670,具有信號受背景干擾小，檢測靈敏度高，結果重復性好的優點。
[0010] 優選的，所述底板為PVC底板。
[0011] 優選的，所述硝酸纖維素膜上，檢測線位于離加樣端較近一側，質控線位于離加樣 端較遠一側。
[0012] 優選的，所述檢測線上包被有CG單克隆抗體。所述金標墊上的CG單克隆抗體與 檢測線上的CG單克隆抗體可以是相同的抗體，也可以是不同的抗體。
[0013] 優選的，質控線上包被羊抗鼠抗體。
[0014] 優選的，所述樣品墊采用緩沖液處理，所述緩沖液選自PBS緩沖液、TriS-HCl緩沖 液、甘氨酸緩沖液、硼酸鹽緩沖液和檸檬酸-磷酸鹽緩沖液中的一種或多種的組合，緩沖液 的濃度為20-200mM。
[0015] 優選的，本發明所述的金標墊還經過預處理，預處理時所使用的預處理緩沖液選 自甘氨酸緩沖液、Tris-HCl緩沖液、硼酸鹽緩沖液的一種或多種的組合，緩沖液的濃度為 5_50mM〇
[0016] 優選的，所述緩沖液還包括反應增強劑，所述反應增強劑選自PEG4000、PEG6000、 PEG8000和PEG20000中的任意一種，所述反應增強劑的濃度為10?50g/L。
[0017] 優選的，所述緩沖溶液還包括表面活性劑，所述表面活性劑選自S-19 TWEEN 20、 S-20TWEEN 80、S-13 TRITON X-45、S-14 TRITON X-100、S-15 TRITON X305 中的任意一種 或多種的組合，所述表面活性劑的濃度為10?50g/L。
[0018] 優選的，為了使得試劑盒具有更佳的靈敏度和顯色效果，本發明所述的金標墊在 預處理時所使用的預處理緩沖液包括下列組分：水蘇糖、明礬、果糖二磷酸鈉、六偏磷酸鈉 和甘氨酸，且水蘇糖、明礬、果糖二磷酸鈉、六偏磷酸鈉、甘氨酸的總濃度為3. 5 - 7. 5g/L， 緩沖液的pH值為7. 2 - 7.6。
[0019] 優選的，各組分在緩沖液中的濃度為：
[0020]
【權利要求】
1. 一種定量檢測甘膽酸CG的檢測試劑盒，包括試紙卡，試紙卡包括底板、及位于底板 表面的從加樣端開始依次排列的樣品墊、金標墊、硝酸纖維素膜和吸水墊，所述金標墊上包 含CG抗體，所述硝酸纖維素膜上包被有檢測線和質控線，所述金標墊上的CG抗體采用熒光 微球標記。
2. 如權利要求1所述的定量檢測甘膽酸CG的檢測試劑盒，其特征在于，所述硝酸纖維 素膜上，檢測線位于離加樣端較近一側，質控線位于離加樣端較遠一側。
3. 如權利要求1所述的定量檢測甘膽酸CG的檢測試劑盒，其特征在于，所述檢測線上 包被有CG抗體。
4. 如權利要求1所述的定量檢測甘膽酸CG的檢測試劑盒，其特征在于，質控線上包被 羊抗鼠抗體。
5. 如權利要求1所述的定量檢測甘膽酸CG的檢測試劑盒，其特征在于，所述樣品墊采 用緩沖液處理，所述緩沖液選自PBS緩沖液、Tris-HCl緩沖液、甘氨酸緩沖液、硼酸鹽緩沖 液和檸檬酸-磷酸鹽緩沖液中的一種或多種的組合，緩沖液的濃度為20-200mM。
6. 如權利要求1所述的定量檢測甘膽酸CG的檢測試劑盒，其特征在于，所述金標墊采 用緩沖液處理，所述緩沖液選自甘氨酸緩沖液、Tri s-HCl緩沖液、硼酸鹽緩沖液的一種或多 種的組合，緩沖液的濃度為5-50mM。
7. 根據權利要求6所述的定量檢測甘膽酸CG的檢測試劑盒，其特征在于，所述緩沖液 中還包括反應增強劑，所述反應增強劑選自PEG4000、PEG6000、PEG8000和PEG20000中的任 意一種，所述反應增強劑的濃度為10?50g/L。
8. 如權利要求1所述的定量檢測甘膽酸CG的檢測試劑盒，其特征在于，還包括卡殼，所 述卡殼包括背卡和上蓋，所述背卡設有試紙卡卡槽，所述試紙卡嵌于所述試紙卡卡槽內，所 述上蓋設有測試窗和加樣孔，所述測試窗的位置與所述檢測線和質控線的位置相配合，所 述加樣孔的位置與所述樣品墊的位置相配合。
9. 如權利要求1所述的定量檢測脂甘膽酸CG的檢測試劑盒，其特征在于，所述檢測試 劑盒用于定量檢測血清或血漿中甘膽酸CG的含量。
10. 根據權利要求1?9任一權利要求所述的定量檢測脂甘膽酸CG的檢測試劑盒的制 備方法，具體包括如下步驟： 1) 用熒光微球標記的甘膽酸（CG)抗體溶液噴涂經預處理的金標墊，制得包含甘膽酸 (CG)抗體的金標墊； 2) 在硝酸纖維素膜的檢測線和質控線上分別噴涂甘膽酸（CG)抗體及羊抗鼠抗體，制 得包被后的硝酸纖維素膜； 3) 將樣品墊、步驟1)制備金標墊、步驟2)制備的硝酸纖維素膜、吸水墊依次粘貼在底 板上，切裁制得檢測試紙卡；最后將檢測試紙卡裝入卡殼制得檢測試劑盒。
【文檔編號】G01N33/577GK104360071SQ201410736270
【公開日】2015年2月18日 申請日期:2014年12月5日 優先權日:2014年12月5日
【發明者】陳亨宇 申請人:重慶乾德生物技術有限公司