一種甘膽酸檢測試劑盒及其制備方法
【專利摘要】本發明公開了一種甘膽酸檢測試劑盒及其制備方法。本發明試劑盒盒體內包括試劑R1、試劑R2和校準品，所述試劑R1的組分包括：生物緩沖液1、保護劑1、反應增強劑1、表面活性劑1、防腐劑1、穩定劑1；試劑R2的組分包括：生物緩沖液2、抗甘膽酸抗體的膠乳顆粒、保護劑2、反應增強劑2、表面活性劑2、防腐劑2、穩定劑2；校準品的組分包括：緩沖液3、保護劑3、防腐劑3、甘膽酸標準品。本發明采用雙試劑模式不僅可以有效避免非特異性反應的干擾，同時可以最大限度的減少來自樣本本身濁度的干擾，保證了測定結果的準確可靠，具有重復性好、精確度高、穩定性好、檢測靈敏度高、線性測試范圍寬、抗干擾性強等優點。
【專利說明】一種甘膽酸檢測試劑盒及其制備方法
【技術領域】
[0001] 本發明涉及生物檢測領域，特別是涉及一種甘膽酸檢測試劑盒及其制備方法和用 途。
【背景技術】
[0002] 甘膽酸（CholyglyCine，CG)是膽酸與甘氨酸結合而成的結合型膽酸，在肝細胞 內，膽固醇經過及其復雜的酶促反應，轉變成初級膽汁酸。其中有膽酸（CA)和鵝去氧膽酸 (CD-CA)。膽酸的類固醇核上有三個羥基化3、07工12)，側鏈末端的羥基以肽鍵與甘氨酸結 合。
[0003] CG由肝細胞合成，正常代謝途徑為腸肝循環，經毛細膽管、膽管排入膽囊，隨同膽 汁進入十二指腸，幫助食物消化。95%膽酸在回腸末端重吸收，經門靜脈再回肝臟，由肝細 胞攝取再利用。在血清中主要以蛋白結合形式存在，溢入體循環的總量小于1%。在正常情 況下，外周血中膽酸含量甚微，正常成人無論空腹或餐后，其血清CG濃度穩定在低水平。 當肝細胞受損時，肝細胞攝取CG能力下降，致使血中CG含量增高；膽汁郁滯時，肝臟排泄膽 酸發生障礙，而返流血液循環的CG含量增高，也使血CG含量增高。測定血清甘膽酸（CG) 是評價肝細胞功能及其肝膽系物質循環功能的敏感指標之一。
[0004] 臨床上急性肝炎、慢性活動性肝炎、原發性肝癌、肝硬化、慢遷肝、梗阻性肝病、 腸一肝循環障礙、膽石癥伴黃疸、膽管、膽囊排泄功能障礙患者血CG均明顯高于正常人。 [0005] 甘膽酸同時也是妊娠晚期血清中最主要的膽汁酸組分。正常妊娠時孕婦血清CG 水平隨孕周逐步增高，大量雌激素會引起肝細胞膜的改變，減少竇狀膜漿的流動性，從而出 現膽汁分泌減少，返流入血，出現妊娠期內膽汁淤積現象，CG水平升高。胎盤絨毛靜脈腔 內外均處于高濃度膽汁酸刺激之中，引起血管收縮，胎盤絨毛表面血管痙攣，氧合血流量減 少，導致胎兒缺氧，可出現各種并發癥，如胎兒宮內窘迫、早產等。
[0006] 目前已知的甘膽酸檢測方法有放射免疫法（RIA)、酶聯免疫吸附法（ELISA)、化學 發光法（CL)等。但這些方法均存在較多缺陷，如放射免疫法同位素試劑具有放射性污染及 有效期較短和操作不方便等弊端，酶聯免疫吸附法操作較為繁瑣，耗時較長，不適宜臨床上 使用。化學發光法盡管靈敏度較高，但需要專用的測定設備，費用較高不利于推廣。而膠乳 增強免疫比濁法操作簡便、可適用于全自動生化分析儀，檢測時間不到10分鐘適合臨床推 廣。但目前我國市場上的甘膽酸檢測試劑盒準確度、靈敏度、重復性仍然較差。
【發明內容】
[0007] 鑒于以上所述現有技術的缺點，本發明的目的在于提供一種檢測時間短，穩定性 好、重復性好、精確度高、檢測靈敏度高、線性測試范圍寬、抗干擾性強的甘膽酸檢測試劑 盒，用于解決現有技術中的問題。
[0008] 為實現上述目的及其他相關目的，本發明的第一方面提供一種甘膽酸檢測試劑 盒，包括彼此獨立的試劑R1、試劑R2和校準品，所述試劑R1的組分包括：生物緩沖液1、保 護劑1、反應增強劑1、表面活性劑1、防腐劑1、穩定劑1 ;試劑R2的組分包括：生物緩沖液 2、抗甘膽酸抗體的膠乳顆粒、保護劑2、反應增強劑2、表面活性劑2、防腐劑2、穩定劑2 ;校 準品的組分包括：生物緩沖液3、保護劑3、防腐劑3、甘膽酸標準品、穩定劑3。
[0009] 優選的，所述試劑R1中，所述生物緩沖液1選自氨基丁三醇緩沖液、磷酸鹽緩沖 液、Tris-HCL緩沖液、甘氨酸緩沖液、硼酸鹽緩沖液、三羥甲基氨基甲烷緩沖液中的一種或 多種的組合；所述試劑R2中，所述生物緩沖液2選自氨基丁三醇緩沖液、磷酸鹽緩沖液、 Tris-HCL緩沖液、甘氨酸緩沖液、硼酸鹽緩沖液、三羥甲基氨基甲烷緩沖液中的一種或多種 的組合；校準品中，所述生物緩沖液3選自氨基丁三醇緩沖液、磷酸鹽緩沖液、Tris-HCL緩 沖液、甘氨酸緩沖液、硼酸鹽緩沖液、三羥甲基氨基甲烷緩沖液中的一種或多種的組合。
[0010] 更優選的，所述試劑R1中，生物緩沖液1的濃度為20?200mmol/L，PH6. 5-7. 5 ; 所述試劑R2中，生物緩沖液2的濃度為20?200mmol/L，PH6. 5-7. 5 ;校準品中，生物緩沖 液 3 的濃度為 20 ?200mmol/L，PH6. 5-7. 5。
[0011] 本發明中，各生物緩沖液的主要作用是保證試劑中各組分PH值保持在一定范圍 內，保證各組分性能穩定，最終保證整個試劑盒的性能穩定，測試結果穩定可靠。
[0012] 優選的，為了使得試劑盒具有更佳的靈敏度和顯色效果，本發明對所述試劑R1中 的生物緩沖液1進行了改進，所述試劑R1中的生物緩沖液1包括下列組分：水蘇糖、明礬、 果糖二磷酸鈉、六偏磷酸鈉和甘氨酸，且水蘇糖、明礬、果糖二磷酸鈉、六偏磷酸鈉、甘氨酸 的總濃度為3. 5 - 7. 5g/L，生物緩沖液1的pH值為7. 2 - 7. 6。
[0013] 優選的，各組分在生物緩沖液1中的濃度為：
[0014]
【權利要求】
1. 一種甘膽酸檢測試劑盒，包括彼此獨立的試劑R1、試劑R2和校準品，所述試劑R1的 組分包括：生物緩沖液1、保護劑1、反應增強劑1、表面活性劑1、防腐劑1、穩定劑1 ;試劑 R2的組分包括：生物緩沖液2、抗甘膽酸抗體的膠乳顆粒、保護劑2、反應增強劑2、表面活性 劑2、防腐劑2、穩定劑2 ;校準品的組分包括：生物緩沖液3、保護劑3、防腐劑3、甘膽酸標準 品、穩定劑3。
2. 根據權利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑R1中，所述生物緩沖液1選 自氨基丁三醇緩沖液、磷酸鹽緩沖液、Tris-HCL緩沖液、甘氨酸緩沖液、硼酸鹽緩沖液、三羥 甲基氨基甲烷緩沖液中的一種或多種的組合；所述試劑R2中，所述生物緩沖液2選自氨基 丁三醇緩沖液、磷酸鹽緩沖液、Tris-HCL緩沖液、甘氨酸緩沖液、硼酸鹽緩沖液、三羥甲基 氨基甲烷緩沖液中的一種或多種的組合；校準品中，所述生物緩沖液3選自氨基丁三醇緩 沖液、磷酸鹽緩沖液、Tris-HCL緩沖液、甘氨酸緩沖液、硼酸鹽緩沖液、三羥甲基氨基甲烷 緩沖液中的一種或多種的組合；所述試劑R1中，生物緩沖液1的濃度為20?200mmol/L， PH6. 5-7. 5 ;所述試劑R2中，生物緩沖液2的濃度為20?200mmol/L，PH6. 5-7. 5 ;校準品 中，生物緩沖液3的濃度為20?200mmol/L，PH6. 5-7. 5。
3. 根據權利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑R1中，所述表面活性劑1選 自椰子油脂肪酸二乙醇酰胺、Tween-20、Tween-30、Tween-80、Triton X-100中的一種或 多種的組合；所述試劑R2中，所述表面活性劑2選自椰子油脂肪酸二乙醇酰胺、Tween-20、 Tween-30、Tween-80、Triton X-100中的一種或多種的組合；所述試劑R1中，表面活性劑1 的濃度為3?50mmol/L ;所述試劑R2中，表面活性劑2的濃度為3?50mmol/L。
4. 根據權利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑R1中，所述反應增強劑1選自 PEG4000、PEG6000、PEG8000、PEG20000中的一種或多種的組合；所述試劑R2中，所述反應 增強劑2選自PEG4000、PEG6000、PEG8000、PEG20000中的一種或多種的組合；所述試劑R1 中，反應增強劑1的濃度為〇. 1?5. Og/L ;所述試劑R2中，反應增強劑2的濃度為0. 1? 5. 0g/L〇
5. 根據權利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑R1中，所述防腐劑1選自疊氮 鈉、硫柳汞、ProClin200、ProClin300中的一種或多種的組合；所述試劑R2中，所述防腐劑 2選自疊氮鈉、硫柳汞、Pix)Clin200、ProClin300中的一種或多種的組合；所述校準品中，所 述防腐劑3選自疊氮鈉、硫柳萊、ProClin200、ProClin300中的一種或多種的組合；所述試 劑R1中，防腐劑1的濃度為〇. 3?3. 0g/L ;所述試劑R2中，防腐劑2的濃度為0. 3?3. 0g/ L ;校準品中，防腐劑3的濃度為0. 3?3. 0g/L。
6. 根據權利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑R1中，所述保護劑1選自牛血 清白蛋白BSA、卵清蛋白OVA和明膠中的一種或多種的組合；所述試劑R2中，所述保護劑2 選自牛血清白蛋白BSA、卵清蛋白OVA和明膠中的一種或多種的組合；校準品中，所述保護 劑3選自牛血清白蛋白BSA、卵清蛋白OVA或明膠中的一種或多種的組合；所述試劑R1中， 保護劑1的濃度為1?l〇g/L ;所述試劑R2中，保護劑2的濃度為1?10g/L ;校準品中，保 護劑3的濃度為1?8g/L。
7. 根據權利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑R1中，所述穩定劑1選自無機 鹽、金屬絡合物、抗氧化劑中的一種或多種的組合；所述試劑R2中，所述穩定劑2選自無機 鹽、金屬絡合物、抗氧化劑中的一種或多種的組合；校準品中，所述穩定劑3選自無機鹽、金 屬絡合物、抗氧化劑中的一種或多種的組合。
8. 根據權利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述膠乳顆粒為致敏聚苯乙烯膠乳顆 粒，表面官能團為氨基、羧基、酰肼、醛基或環氧基。
9. 根據權利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑R1中，所述生物緩沖液1包括 下列組分：水蘇糖、明礬、果糖二磷酸鈉、六偏磷酸鈉和甘氨酸，且水蘇糖、明礬、果糖二磷酸 鈉、六偏磷酸鈉、甘氨酸的總濃度為3. 5 - 7. 5g/L，生物緩沖液1的pH值為7. 2 - 7. 6。
10. 根據權利要求1?9任一權利要求所述的試劑盒的制備方法和使用方法，其特征在 于，具體包括如下步驟： (a) 按照比例分別配置試劑R1、試劑R2,按照需要的甘膽酸參考校準品濃度將相應的 甘膽酸標準品分別加入校準品中，制備得到含有不同濃度甘膽酸標準品的一組校準品，并 繪制標準曲線； (b) 將待測樣本與試劑R1和R2按一定比例混合，使其充分反應； (c) 用全自動生化分析儀測定反應后的吸光度差值。 (d) 根據校準曲線得到樣本中甘膽酸的含量。
【文檔編號】G01N33/546GK104459113SQ201410736234
【公開日】2015年3月25日 申請日期:2014年12月5日 優先權日:2014年12月5日
【發明者】李元麗 申請人:重慶中元生物技術有限公司