細胞團塊收集器及收集體液標本中細胞的方法
【專利摘要】一種細胞團塊收集器及收集體液標本中細胞的方法，收集器包括第一離心管，第一離心管內設有筒形的支撐管，支撐管內設有下端伸入第一離心管錐形部分內的第二離心管，第二離心管的錐形部分設有多個出液孔，使用時，第二離心管的錐形部分內放入濾紙，使濾紙與該錐形部分的內壁貼合。體液標本中加入福爾馬林，得沉淀物，離心，加入乙醇和蛋白螯合劑，混勻，加注到濾紙上，離心，在濾紙上形成細胞團塊，按現有方法包埋、脫水、透明和浸蠟后包埋，制成細胞塊石蠟切片，HE染色后，即可進行觀察。該收集器能把送檢標本固定后的組織進行全部包埋切片，連續切片，提高陽性檢出率，克服涂片中細胞重疊堆積、薄厚不均、結構不清的現象，提供更準確的信息。
【專利說明】細胞團塊收集器及收集體液標本中細胞的方法
【技術領域】
[0001] 本發明屬于基礎醫學研究【技術領域】，涉及一種收集體液標本中細胞的裝置，特別 涉及一種細胞團塊收集器；本發明還涉及一種用該收集器收集體液標本中細胞的方法。
【背景技術】
[0002] 傳統的脫落細胞檢查，就是取少量胸、腹水、尿液等體液標本進行標本涂片或離也 沉淀，取少量涂片，從中查找腫瘤細胞，具有方法簡單、經濟、且痛苦少等優點為臨床所應 用。但其缺點是：胸、腹水、尿液離也后，只取其少許沉淀物進行涂片，不能將樣本全部制成 涂片進行觀察，易造成漏診和誤診，同時細胞涂片較厚，觀察者缺乏經驗時，易誤診，特別是 易導致假陽性。
【發明內容】
[0003] 本發明的目的是提供一種細胞團塊收集器，能收集少量體液標本中的全部細胞， 不易造成漏診和誤診。
[0004] 本發明的另一個目的提供一種用上述收集器收集少量體液標本中細胞的方法。
[0005] 為實現上述目的，本發明所采用的技術方案是；一種細胞團塊收集器，包括第一離 也管，第一離也管內設有筒形的支撐管，支撐管內設有第二離也管，第二離也管上的錐形部 分穿過支撐管伸入第一離也管的錐形部分內，第二離也管錐形部分的側壁上設有多個出液 孔，使用時，將濾紙放入第二離也管的錐形部分內，并使濾紙與該錐形部分的內壁貼合。
[0006] 本發明所采用的另一個技術方案是：一種利用上述細胞團塊收集器收集體液標本 中細胞的方法，具體按W下步驟進行： 步驟1:按體積比1 ; 9,將福爾馬林加入體液標本中，使標本固定，自然沉降后，棄去上 清液，留沉淀物； 步驟2 ;將沉淀物注入離也管，離也，棄去上清液，取沉淀物1?2滴進行常規涂片，在 剩余的沉淀物中加入己醇，混勻后，加入1滴蛋白馨合劑，混勻，得息濁液； 步驟3 ;將息濁液加注到濾紙上，離也，息濁液中的清液透過濾紙，通過出液孔進入第 一離也管內，息濁液中的固體小顆粒滯留在濾紙上，形成細胞團塊； 步驟4 ;將細胞團塊按現有方法進行包埋、脫水、透明和浸蠟后包埋，制成細胞塊石蠟 切片，進行肥染色后，即可進行觀察。
[0007] 用本發明收集器收集脫落細胞制作石蠟包埋切片具有W下優點： 1)可W把送檢的胸、腹水、尿液等脫落細胞標本固定后的組織進行全部包埋切片，并且 可連續切片，減少漏診，提高了脫落細胞的陽性檢出率。
[0008] 2)克服了涂片中細胞重疊堆積、薄厚不均、結構不清的現象，提供更準確的信息。
[0009] 3)制作的石蠟包埋切片可長期保存，反復重切，并能做多種特殊染色或免疫組化， 對惡性腫瘤的分類有很大的幫助，減少誤診，為臨床治療提供了依據和方便。
[0010] 4)不受細胞學檢查防凍、防腐、時間長短的限制，可隨時留入帶有固定液的瓶內， 標本的留取量也可適當增多。
【專利附圖】
【附圖說明】
[0011] 圖1是本發明收集器的結構示意圖。
[0012] 用現有的細胞涂片方法對胸水脫落細胞進行檢測的顯微鏡圖（肥染色，40X10)， 見圖2和圖3。用本發明方法對該胸水脫落細胞進行檢測的顯微鏡圖（肥染色，IOX10)， 見圖4?圖7。
[0013] 用本發明方法對上述胸水脫落細胞進行檢測的顯微鏡圖（肥染色，IOX10)，見圖 8?圖11。用現有的細胞涂片方法對該胸水脫落細胞進行檢測的顯微鏡圖（肥染色)，見圖 12?圖15。
[0014] 圖1中；1.第一離也管，2.第二工作管，3.支撐管，4.出液孔。
【具體實施方式】
[0015] 下面結合附圖和【具體實施方式】對本發明進行詳細說明。
[0016] 如圖1所示，本發明收集器，包括第一離也管1，第一離也管1內設有筒形的支撐管 3,支撐管3的下端與第一離也管1的筒形管和錐形部分的結合部相接觸，支撐管3內設有 第二離也管2,第二離也管2上的錐形部分穿過支撐管3伸入第一離也管1的錐形部分內， 第二離也管2錐形部分的側壁上設有多個出液孔4。
[0017] 使用本發明收集器時，將濾紙放入第二離也管2的錐形部分內，并使濾紙與該錐 形部分的內壁貼合。
[0018] 本發明還提供了一種利用上述收集器收集少量體液標本中細胞的方法，具體按W 下步驟進行： 步驟1;按體積比1 ; 9,將質量分數35?40%的甲酵溶液20?80血加入200?800血 體液標本中，使標本固定，然后自然沉降30?60min，棄去上清液，留沉淀物； 將濾紙放入第二離也管2的錐形部分內，并使濾紙與該錐形部分的內壁貼合； 步驟2 ;將沉淀物30?50血注入離也管，W1500?2000r/min的轉速離也lOmin，棄 去上清液，取沉淀物1?2滴進行常規涂片，在剩余的沉淀物中加入ImL質量分數95%的己 醇，混勻后，加入1滴蛋白馨合劑，混勻，得息濁液； 該蛋白馨合劑為雞蛋清，用量1滴，約50y以其用量不能過多，否則影響細胞團塊中細 胞數量。通過己醇使蛋清變性、凝固成團塊狀。
[0019] 步驟3 ;將息濁液加注到第二離也管內的濾紙上，W1500?2000r/min的轉速離 也lOmin，息濁液中的清液透過濾紙，通過出液孔4進入第一離也管1內，息濁液中的固體小 顆粒滯留在濾紙上，形成細胞團塊； 步驟4 ;將細胞團塊按現有方法進行包埋、脫水、透明和浸蠟后包埋，制成厚度4ym的 細胞塊石蠟切片，進行肥染色后，即可進行觀察。
[0020] 本發明收集方法中使用的離也機和傳統細胞涂片所用離也機一致。
[0021 ] 本發明中，利用福爾馬林對標本及時固定，使體液中細胞蛋白質變性，保持細胞原 有形態，防止細胞進一步退變、核腫脹，避免在形態學上難W與腫瘤細胞鑒別。利用蛋白馨 合劑使散落、單個的細胞凝聚成團塊狀，便于包埋，切片；且該蛋白馨合劑在免疫組化染色 結果判斷中，無背景顯色。
[0022] 對75例標本進行對比觀察研究： 1、材料與方法 1. 1.材料；選取白銀市第一人民醫院2014年1月至09月送檢的胸水、腹水標本75例， 所有標本均利用細胞團塊收集器制作細胞團塊。
[0023] 1. 2.方法；送檢的標本，一般W200?800血適宜。將胸水、腹水標本測量體積， 并按照體積比1 ; 9將福爾馬林加入標本中，使標本W10%福爾馬林(純的甲酵溶液濃度 為35?40%，而臨床常用固定標本的固定液是10%福爾馬林，即1份甲酵溶液+9份蒸觸 水)固定。自然沉降30?60min，棄去上清液，留沉淀物30?50血，置入50血離也管中，W 200化/min離也lOmin。棄去上清液，取沉淀物1?2滴進行常規涂片，并在剩余沉淀物中 加入lmL95%的己醇，混勻沉淀物，加入1滴雞蛋清，混勻；將混合液全部置入細胞團塊收集 儀中，W2000r/min離也lOmin，直接取出細胞團塊，進行包埋，常規全自動標本脫水處理 機脫水、透明、浸蠟后包埋，制成4ym厚的細胞塊石蠟切片，進行肥染色，免疫組化檢 測CK、MC、Calretinin、TTF-l、Napsin、CEA、Ki-67免疫標記物的表達，細胞切片和常規的細 胞涂片對比觀察，進一步鑒別胸腹水的良惡性。
[0024] 1. 3.試劑；免疫組化染色過程單克隆抗體：CK、MC、Calretinin、TTF-1、Napsin、 CEA、Ki-67鼠抗人單克隆抗體及試劑盒UltrasensitiveSP購自福州邁新生物技術開發有 限公司按試劑盒說明書進行操作，PBS代替一抗作陰性對照。
[00巧]1. 4.結果；細胞學診斷標準按照《細胞病理學診斷圖譜及實驗技術》，曹躍華等主 編，北京科學技術出版社出版。所有涂片需2位有經驗的病理副主任醫師閱片；免疫組化染 色中，0(、1(：、〔3山6^11111、化口3111、〔64蛋白表達于細胞膜，1(1-67、17尸-1蛋白表達于細胞 核，均呈蹤黃色顆粒；陽性細胞>10%為陽性。
[0026] 1. 5.統計學處理；采用SPSS17. 0統計軟件進行統計分析，定性資料采用X2檢 驗。
[0027] 2、結果 2. 1.該實驗室對2009?2014年1?9月份同期胸、腹水標本癌細胞檢出率進行統計 研究，其結果如表1。
[0028] 表12009-2014年同期胸、腹水標本癌細胞檢出率％
【權利要求】
1. 一種細胞團塊收集器，其特征在于，包括第一離心管（1)，第一離心管（1)內設有筒 形的支撐管（3 )，支撐管（3 )內設有第二離心管（2 )，第二離心管（2 )上的錐形部分穿過支撐 管（3)伸入第一離心管（1)的錐形部分內，第二離心管（2)錐形部分的側壁上設有多個出液 孔（4)，使用時，將濾紙放入第二離心管（2)的錐形部分內，并使濾紙與該錐形部分的內壁 貼合。
2. 根據權利要求1所述的細胞團塊收集器，其特征在于，支撐管（3)的下端與第一離 心管（1)的筒形管和錐形部分的結合部相接觸。
3. -種利用權利要求1所述的細胞團塊收集器收集體液標本中細胞的方法，具體按 以下步驟進行： 步驟1:按體積比1 : 9,將福爾馬林加入體液標本中，使標本固定，自然沉降后，棄去上 清液，留沉淀物； 步驟2 :將沉淀物注入離心管，離心，棄去上清液，取沉淀物1?2滴進行常規涂片，在 剩余的沉淀物中加入乙醇，混勻后，加入1滴蛋白螯合劑，混勻，得懸濁液； 步驟3 :將懸濁液加注到濾紙上，離心，懸濁液中的清液透過濾紙，通過出液孔進入第 一離心管內，懸濁液中的固體小顆粒滯留在濾紙上，形成細胞團塊； 步驟4:將細胞團塊按現有方法進行包埋、脫水、透明和浸蠟后包埋，制成細胞塊石蠟 切片，進行染色后，即可進行觀察。
4. 根據權利要求3所述的收集體液標本中細胞的方法，其特征在于，所述步驟2中的 蛋白螯合劑為雞蛋清。
【文檔編號】G01N1/40GK104359746SQ201410661633
【公開日】2015年2月18日 申請日期:2014年11月19日 優先權日:2014年11月19日
【發明者】韓軍平, 孟曉燕, 王麗曾, 羅文瀟, 馬文霞 申請人:白銀市第一人民醫院