乳制品中dha和epa含量的檢測方法
【專利摘要】一種乳制品中DHA和EPA含量的檢測方法，屬于食品添加劑及其檢測方法領域。所述乳制品中DHA和EPA含量的檢測方法，包括以下步驟：將DHA和EPA標準曲線進行制備，然后將乳制品進行預處理，加入磁力拌子，加入氫氧化鉀甲醇溶液，開啟磁力攪拌器，并加熱使反應液保持60℃，攪拌回流后冷卻至室溫，從冷凝管上加入三氟化硼甲醇，加熱攪拌回流后冷卻，從冷凝管上部加入正己烷繼續加熱回流，冷至室溫移去冷凝管，加入飽和氯化鈉水溶液，搖動。分出正己烷溶液于試管，進氣相色譜儀進行定量計算。本發明所述檢測方法，從乳制品中提取出脂肪經氫氧化鉀、三氟化硼/甲醇皂化和酯化后進行有效分離，并進行定量，利用本方法不僅分離完全而且定量準確。
【專利說明】乳制品中DHA和EPA含量的檢測方法
【技術領域】
[0001]本發明涉及一種乳制品中DHA和EPA含量的檢測方法，屬于食品添加劑及其檢測方法領域。
【背景技術】
[0002]研究表明，富含于深海魚油中的脂肪酸DHA (順式-4，7，10，13，16，19-二十二碳六烯酸)和EPA (順式-5，8，11，14，17-二十碳五烯酸)具有調節免疫，增強記憶，改善神經傳導的功能和預防中風、心肌梗塞和動脈硬化的作用，并且是嬰幼兒大腦發育所必須的物質。因此，在市場上能發現很多乳制品包括嬰幼兒奶粉中都不同程度地添加了 DHA和EPA。但由于添加量少，不易檢測等特點，致使目前市場上的眾多產品對添加了 DHA和EPA的量參差不齊。
[0003]因此研究一種準確度高、重復性高、操作簡便、檢測極限低適用于乳制品中DHA和EPA含量的檢測方法很有必要。
【發明內容】
[0004]本發明旨在提供一種準確度高、重復性高、操作簡便、檢測極限低適用于乳制品中DHA和EPA含量的檢測方法。
[0005]所述的乳制品中DHA和EPA含量的檢測方法，包括以下步驟:
先進行DHA和EPA標準曲線進行制備與繪制，然后將乳制品進行預處理，再加入磁力拌子，加入4mL0.5mol/L氫氧化鉀甲醇溶液，上部連接回流冷凝管，并固定于磁力攪拌器上，開啟磁力攪拌器，并加熱使反應液保持60°C，攪拌回流約15min，冷卻至室溫，從冷凝管上部加入4mL三氟化硼甲醇溶液，加熱、攪拌，回流約5min，冷卻，從冷凝管上部加入5mL正己烷繼續加熱回流5min，冷至室溫，移去冷凝管，加入少量飽和氯化鈉水溶液，搖動數分鐘。分出上層正己烷溶液于試管中，取I μ L進氣相色譜儀，使用內標法進行定量計算。
[0006]優選的，本發明所述的乳制品預處理方法為:稱取5g奶粉于10mL具塞量筒中，力口25mL水，搖動分散均勻，加入2mL25%氨水，混勻后放入65°C水浴鍋中加熱15min后取出冷卻，轉移至250mL分液漏斗中，移取1ml乙醇倒入分液漏斗，劇烈震搖lmin，移取25mL乙醚倒入分液漏斗，劇烈震搖lmin，然后移取25mL石油醚倒入分液漏斗，并劇烈震搖lmin，靜置使之分層，有機層轉入150mL圓底燒瓶中，水層再分別用1ml乙醇，25mL乙醚和25mL石油醚萃取一次，合并有機層于圓底燒瓶中，移取2mL內標溶液于150mL圓底燒瓶中，最后在80°C水浴鍋中蒸去溶劑。
[0007]更優選的，本發明所述的內標溶液為三苯乙烯溶液，配制方法為稱取0.2g三苯乙烯，用正己烷溶解后轉移至10mL容量瓶中，并定容。
[0008]進一步優選的，本發明所述的色譜條件為色譜柱:HP-23 30mX0.53mmX0.50 μ m ；色譜柱溫度:起始溫度70°C，保持lmin，然后以20°C /min的速率升至180°C，并繼續以30C /min的速率升至220°C，最后在220°C保持1min ;進樣口溫度:250°C ；FID檢測器溫度:260°C ;柱流量:2ml/min ;柱流量+尾吹流量=50ml/min ;進樣方式:分流，分流比為10:1 ；載氣:N2 ;燃燒氣 H2:40ml/min ;助燃氣 Air:400ml/min。
[0009]本發明所述的檢測方法，(I)DHA標準曲線的制備:以Ae/A@為橫坐標X，以n^/m# (11^、11^均以1^為單位)為縱坐標Y，繪制標準曲線得出線性回歸方程為Y=0.00784+1.19498X，R=0.99972。結果表明:在實驗濃度范圍內m標/m內與A標/A內呈良好的線性關系。(2)EPA標準曲線的制備:以A；g/A內為橫坐標X,以111標/11^ (m標、m內均以mg為單位)為縱坐標Y，繪制標準曲線得出線性回歸方程為Y=0.00272+1.19104X，R=0.99983。結果表明:在實驗濃度范圍內mg/n^與Α#/Α@呈良好的線性關系。
[0010]本發明所述的檢測方法，乳制品中DHA和EPA含量的計算公式為:
X=(m樣/m內)Xm內X 100/(100Xm) (% )，其中，m樣/m內由A標/A內通過標準曲線方程算得，m為樣品質量(g), 2ml內標溶液中三苯乙烯的量(mg)
本發明所述的檢測方法中，從乳制品中提取出的脂肪經氫氧化鉀、三氟化硼/甲醇皂化和酯化后用氣相色譜脂肪酸專用柱進行有效分離，并用氫火焰化檢測器檢測和使用內標法進行定量，利用本方法不僅分離完全，而且定量準確。
【具體實施方式】
[0011]實施例一:
(I)內標溶液配制:稱取0.2g三苯乙烯，用正己烷溶解后轉移至10mL容量瓶中，并定容。
[0012](2)標準溶液配制:配制DHA標準溶液的濃度為lmg/mL，EPA標準溶液的濃度為
0.5mg/mL。
[0013](3)DHA標準曲線的制備:分別從DHA標準溶液中移取0.5mL，lmL，2mL，3mL，4mL于150mL圓底燒瓶中，加入2mL內標溶液并在80°C水浴鍋中蒸去溶劑。從冷凝管上部加入4mL三氟化硼甲醇溶液，加熱、攪拌，回流約5min，冷卻，從冷凝管上部加入5mL正己烷繼續加熱回流5min，冷至室溫，移去冷凝管，加入少量飽和氯化鈉水溶液，搖動數分鐘。分出上層正己燒溶液于試管中，取I μ L進氣相色譜儀。以A標/A內為橫坐標X,以m標/mrt (m標、m內均以mg為單位)為縱坐標Y，繪制標準曲線得出線性回歸方程為Y=0.00784+1.19498X，R=0.99972。結果表明:在實驗濃度范圍內mg/n^與Α#/Α@呈良好的線性關系。
[0014](4)EPA標準曲線的制備:分別從EPA標準溶液中移取0.5mL, lmL, 2mL, 3mL, 4mL于150mL圓底燒瓶中，加入2mL內標溶液并在80°C水浴鍋中蒸去溶劑。從冷凝管上部加入4mL三氟化硼甲醇溶液，加熱、攪拌，回流約5min，冷卻，從冷凝管上部加入5mL正己烷繼續加熱回流5min，冷至室溫，移去冷凝管，加入少量飽和氯化鈉水溶液，搖動數分鐘。分出上層正己燒溶液于試管中，取I μ L進氣相色譜儀。以A標/A內為橫坐標X,以m標/mrt (m標、m內均以mg為單位)為縱坐標Y，繪制標準曲線得出線性回歸方程為Y=0.00272+1.19104X，R=0.99983。結果表明:在實驗濃度范圍內mg/n^與Α#/Α@呈良好的線性關系。
[0015](5)樣品預處理:稱取5g奶粉于10mL具塞量筒中，加25mL水，搖動分散均勻，力口入2mL25%氨水，混勻后放入65°C水浴鍋中加熱15min后取出冷卻，轉移至250mL分液漏斗中，移取1ml乙醇倒入分液漏斗，劇烈震搖lmin，移取25mL乙醚倒入分液漏斗，劇烈震搖lmin，然后移取25mL石油醚倒入分液漏斗，并劇烈震搖lmin，靜置使之分層，有機層轉入150mL圓底燒瓶中，水層再分別用1ml乙醇，25mL乙醚和25mL石油醚萃取一次，合并有機層于圓底燒瓶中，移取2mL內標溶液于150mL圓底燒瓶中，最后在80°C水浴鍋中蒸去溶劑。
[0016](6)計算:乳制品中DHA和EPA含量的計算公式為:
X=(m樣/m內)Xm內X 100/(100Xm) (% )，其中，m樣/m內由A標/A內通過標準曲線方程算得，m為樣品質量(g), m內為2ml內標溶液中三苯乙烯的量(mg)。
[0017]實施例二:精密度試驗、重復性試驗和回收率試驗
(I)精密度試驗:樣品處理后連續進樣三次，結果表明DHA和EPA定量結果的變異系數均小于1.5%。
[0018](2)重復性試驗:取同一批乳飲料，精確稱取3份試樣，按所述的檢測方法進樣分析，結果表明，對同一批樣品多次取樣分析，DHA和EPA的定量結果的變異系數RSD均小于
2.0%，因此，所述的檢測方法具有良好的重現性。
[0019](3)回收率試驗:采用加標回收法，在已知DHA和EPA含量的樣品中加入Iml1.0mg/ml DHA溶液和Iml0.5mg/ml EPA溶液及2mL內標溶液，然后按所述的檢測方法進樣分析，結果表明DHA平均回收率為98.50.101.50%，EPA平均回收率為97.34-100.92%。因此，所述的檢測方法完全滿足分析要求。
【權利要求】
1.乳制品中DHA和EPA含量的檢測方法，包括以下步驟: 先進行DHA和EPA標準曲線進行制備與繪制，然后將乳制品進行預處理，再加入磁力拌子，加入4mL0.5mol/L氫氧化鉀甲醇溶液，上部連接回流冷凝管，并固定于磁力攪拌器上，開啟磁力攪拌器，并加熱使反應液保持60°C，攪拌回流約15min，冷卻至室溫，從冷凝管上部加入4mL三氟化硼甲醇溶液，加熱、攪拌，回流約5min，冷卻，從冷凝管上部加入5mL正己烷繼續加熱回流5min，冷至室溫，移去冷凝管,加入少量飽和氯化鈉水溶液,搖動數分鐘； 分出上層正己烷溶液于試管中，取I μ L進氣相色譜儀，使用內標法進行定量計算。
2.如權利要求1所述的乳制品中DHA和EPA含量的檢測方法，其特征在于所述的乳制品預處理方法為:稱取5g奶粉于10mL具塞量筒中，加25mL水，搖動分散均勻，加入2mL25 %氨水，混勻后放入65 V水浴鍋中加熱15min后取出冷卻，轉移至250mL分液漏斗中，移取1ml乙醇倒入分液漏斗，劇烈震搖lmin，移取25mL乙醚倒入分液漏斗，劇烈震搖Imin,然后移取25mL石油醚倒入分液漏斗，并劇烈震搖lmin，靜置使之分層，有機層轉入150mL圓底燒瓶中，水層再分別用1ml乙醇，25mL乙醚和25mL石油醚萃取一次，合并有機層于圓底燒瓶中，移取2mL內標溶液于150mL圓底燒瓶中，最后在80°C水浴鍋中蒸去溶劑。
3.如權利要求1或2所述的乳制品中DHA和EPA含量的檢測方法，其特征在于所述的內標溶液為三苯乙烯溶液，配制方法為稱取0.2g三苯乙烯，用正己烷溶解后轉移至10mL容量瓶中，并定容。
4.如權利要求1或2或3所述的乳制品中DHA和EPA含量的檢測方法，其特征在于所述的色譜條件為色譜柱:HP-23 30mX0.53mmX0.50 μ m ;色譜柱溫度:起始溫度70°C，保持lmin，然后以20°C /min的速率升至180°C，并繼續以3°C /min的速率升至220°C，最后在220°C保持1min ;進樣口溫度:250°C ；FID檢測器溫度:260°C ;柱流量:2ml/min ;柱流量+尾吹流量=50ml/min ;進樣方式:分流，分流比為10:1 ;載氣:N2 ;燃燒氣H2:40ml/min ;助燃氣 Air:400ml/min。
【文檔編號】G01N30/02GK104330487SQ201410573946
【公開日】2015年2月4日 申請日期:2014年10月24日 優先權日:2014年10月24日
【發明者】李勇, 劉文斌 申請人:西安米億生物科技有限公司