一種氣相色譜-串聯質譜檢測甲磺酸甲酯的方法
【專利摘要】本發明公開了一種氣相色譜-串聯質譜檢測甲磺酸甲酯的方法，其特征在于包括如下步驟：(1)取待測品置于容量瓶中，加入乙腈定容到10-25ml，渦旋混合1-5min,超聲提取10-15min，過0.22μm濾膜，進樣對樣品中甲磺酸甲酯進行測定；(2)檢測條件：采用氣相色譜-串聯質譜聯用儀GC-MS/MS作為檢測儀器對甲磺酸甲酯進行測定。在步驟(1)中，取待測品為0.05-0.50g，精確到0.1mg，置于空容量瓶中，加入乙腈定容到10-25ml，渦旋混合1-5min，超聲提取10-15min。本發明通過使用GC-MS/MS能夠簡單、快捷高效的對藥品原料、化學試劑以及食品MMS進行定性和定量的檢測。
【專利說明】一種氣相色譜-串聯質譜檢測甲磺酸甲酯的方法
【技術領域】
[0001] 本發明涉及甲磺酸甲酯MMS的檢測方法，具體涉及一種氣相色譜-串聯質譜檢測 甲磺酸甲酯的方法。
【背景技術】
[0002] 進入21世紀以來，隨著科學技術的進步和經濟的飛速發展，人類社會的生活也變 得越來越便利；與此同時人們在生活中遇到的挑戰和存在的隱患也越來越多。快速的生活 節奏使得人們更容易受到病魔的侵害；藥物治療是一種快速方便的治療方式，也是目前最 為常見的治療方式。因此，醫藥行業是整個社會最為重要領域之一；但受限于技術能力和原 料質量等方面的原因，藥物試劑中很可能會含有有害物質，這也是醫藥行業面臨的挑戰。因 而藥物試劑的檢測分析，對于藥物的安全性和商業價值具有非常重要的現實意義。
[0003] 儀器檢測作為現代化學、藥物以及食品檢測分析主要手段，能夠通過測量物質的 一些物理和物理化學性質、參數及其變化來確定物質的組成、成分含量及化學結構。儀器檢 測分析具有試樣用量少，分析速度快，易于操作；檢測靈敏度高，重現性好，誤差小；復雜基 質易于分離等優點。隨著儀器分析學科和科學技術的進步，檢測分析所使用儀器的種類也 越來越多，其中使用最為廣泛質譜檢測器。質譜是使試樣中各組分在離子源中發生電離，生 成不同荷質比的帶正電荷的離子，經加速電場的作用，形成離子束，進入質量分析器。質譜 一般與色譜聯用，即色譜-質譜聯用；根據色譜流動相的不同，色譜_質譜聯用又可以分為 液相色譜-質譜聯用LC-MS和氣相色譜-質譜聯用GC-MS ;其中氣相色譜具有分離選擇性 好、柱效高、速度快等優點。本發明中所使用的氣相色譜-串聯質譜聯用儀GC-MS/MS，是使 用串聯質譜儀作為MMS的檢測器，它是由三級質譜串聯而成，能夠有效的對目標離子進行 分離/修飾，從而進一步的提高信噪比，降低檢出限。由于GC-MS/MS的分離選擇性能更好， 現已廣泛的應用于藥物、化學、化工以及食品科學等領域。
[0004] 甲磺酸甲酯麗S是一種基因毒害物質，引起DNA損傷的烷化劑。它能使嘌呤堿基 環上的氮原子和氧原子發生甲基化，導致DNA雙鏈斷裂點突變，有潛在損傷端粒DNA結構和 致細胞凋亡作用。劉永萍等以卵巢癌細胞CA0V3為靶細胞，用MMS對其進行毒性實驗，結果 表明MMS對腫瘤細胞有凋亡誘導作用；鄭履康等以小鼠精細胞為靶細胞，用MMS分別在小鼠 體內和體外進行基因毒性實驗，結果表明麗S體內及體外處理小鼠精子后，精子染色體畸 變率明顯升高，當MMS體內處理濃度達到100mg/kg時，精子染色體畸變率高達94. 4 %，精子 染色體雖然受到嚴重損傷，有的達粉碎程度。通過以上兩個案例的分析我們可以知道，甲磺 酸甲酯對生物體內基因具有很大的毒害性。
[0005] 目前對磺酸酯類基因毒性雜質的檢測方法主要有液相色譜-質譜法、液相色 譜-串聯質譜法、衍生化頂空氣相色譜法、衍生化頂空氣相色譜-質譜法、氣相色譜-質譜 法等，其中液相色譜-質譜法和液相色譜-串聯質譜法因為其載樣量大，靈敏度高，專屬性 強，重現性好被廣泛用于難揮發磺酸酯類雜質的檢測，如苯磺酸甲酯、苯磺酸乙酯等。但是 其在應用于小分子量易揮發的磺酸酯類雜質時存在基質干擾大，檢測線高等缺陷。衍生化 頂空氣相色譜法和衍生化頂空氣相色譜-質譜法是目前使用最廣泛的磺酸酯類雜質的檢 測方法。該方法準確度高，重現性好，可有效避免樣品中難揮發物質對檢測的影響，但是前 處理較復雜，檢出限較高。氣相色譜法和氣相色譜-質譜法，因為操作簡單，重現性好，但是 該方法，基質干擾較強，檢測線高，很難達到檢測要求。
[0006] 目前，缺乏一種檢測靈敏度高，方法簡單易于操作的一種氣相色譜-串聯質譜檢 測甲磺酸甲酯的方法。
【發明內容】
[0007] 本發明的第一個目的是提供一種檢測靈敏度高，方法簡單易于操作的一種氣相色 譜-串聯質譜檢測甲磺酸甲酯的方法。
[0008] 本發明的技術方案為：本發明提供了一種氣相色譜_串聯質譜檢測甲磺酸甲酯的 方法，包括如下步驟：
[0009] (1)加入乙腈定容到10_25ml，渦旋混合l-5min，超聲提取10-15min，過0? 22 ii m 濾膜，進樣對樣品中甲磺酸甲酯進行測定；
[0010] (2)檢測條件：采用氣相色譜-串聯質譜聯用儀GC-MS/MS作為檢測儀器對甲磺酸 甲酯進行測定。
[0011] 進一步地，在步驟（1)中，取待測品為0.05-0. 50g，精確到0. lmg，置于空容量瓶 中，加入乙腈定容到10-25ml，渦旋混合l-5min，超聲提取10-15min。
[0012] 進一步地，在步驟（2)中，氣相色譜-串聯質譜聯用儀的數據采集方式為多反應監 測MRM，選擇質荷比M/Z = 79 - 65作為定量離子對；M/Z = 80 - 65、M/Z = 79 - 48、M/Z =80 - 48、M/Z = 79 - 48作為定性離子對；溶劑切除時間3. 5min。
[0013] 更進一步地，在步驟（2)中，氣相色譜-串聯質譜聯用儀的色譜柱是以（35% -苯 基）_甲基聚硅氧烷為固定液的毛細管色譜柱：DB-35MS柱長30m，柱徑0. 25mm，膜厚 0. 25 u m〇
[0014] 進一步地，在步驟（2)中，氣相色譜-串聯質譜聯用儀的進樣口溫度為150-300°c， 進樣方式為不分流，載氣為氦氣，柱流速為I. 50ml/min。
[0015] 進一步地，在步驟（2)中，氣相色譜-串聯質譜聯用儀的升溫程序為初始溫度 85°C，維持時間為3. 5min，以20°C /min的速率升溫至200°C。
[0016] 更進一步地，在步驟（2)中，氣相色譜-串聯質譜聯用儀的質譜條件為EI離子源， 電壓為70eV，離子源溫度為230°C ;傳輸線溫度為220°C。
[0017] 有益效果：本發明的檢測方法具有靈敏度高、簡單、快速等優點。在本發明中通過 使用GC-MS/MS能夠簡單、快捷、高效的對藥品原料、化學試劑以及食品麗S進行定性和定 量的檢測；能夠有效的提高甲磺酸甲酯的檢測靈敏度且檢測方法簡單易于操作，有效的避 免了基質干擾，使麗S分離效果好，降低了麗S的檢測限，最低檢出限為6ng/ml ;定量限為 12ng/ml在12ng/ml-300ng/ml表現出良好的線性，線性相關系數為0? 999。
【專利附圖】
【附圖說明】
[0018] 圖1是本發明的甲磺酸甲酯標準品的總離子流色譜圖；
[0019] 圖2是本發明的甲磺酸甲酯標準品的定量離子色譜圖；
[0020] 圖3是本發明的甲磺酸甲酯標準品的定性離子色譜圖；
[0021] 圖4是本發明的甲磺酸甲酯標準品的質譜圖；
[0022] 圖5是本發明的空白溶劑的總離子流色譜圖；
[0023] 圖6是本發明的空白溶劑的定量離子色譜圖；
[0024] 圖7是本發明的空白溶劑的定性離子色譜圖；
[0025] 圖8是本發明的空白溶劑的質譜圖；
[0026] 圖9是本發明的空白樣品提取液的總離子流色譜圖；
[0027] 圖10是本發明的空白樣品提取液的定量離子色譜圖；
[0028] 圖11是本發明的空白樣品提取液的定性離子色譜圖；
[0029] 圖12是本發明的空白樣品提取液的質譜圖；
[0030] 圖13是本發明的樣品加標的總離子流色譜圖；
[0031] 圖14是本發明的樣品加標的定量離子色譜圖；
[0032] 圖15是本發明的樣品加標的定性離子色譜圖；
[0033] 圖16是本發明的樣品加標的質譜圖；
[0034] 圖17是本發明的線性實驗的標準曲線圖；
[0035] 圖18是本發明的6ng/ml甲磺酸甲酯標準品的總離子流色譜圖；
[0036] 圖19是本發明的6ng/ml甲磺酸甲酯標準品的定量離子色譜圖；
[0037] 圖20是本發明的6ng/ml甲磺酸甲酯標準品的定性離子色譜圖；
[0038] 圖21是本發明的6ng/ml甲磺酸甲酯標準品的質譜圖。
【具體實施方式】
[0039] 本發明結合附圖和具體實施例作進一步說明。應該理解，這些實施例僅用于說明 目的，而不用于限制本發明范圍。
[0040] 實施例1
[0041] 本發明的一種氣相色譜-串聯質譜檢測甲磺酸甲酯的方法，包括如下步驟：
[0042] (1)加入乙腈定容到10ml，潤旋混合Imin,超聲提取IOmin,過0? 22 ii m濾膜，進樣 對樣品中甲磺酸甲酯進行測定；
[0043] (2)檢測條件：采用氣相色譜-串聯質譜聯用儀GC-MS/MS作為檢測儀器對甲磺酸 甲酯進行測定。
[0044] 在步驟（1)中，取待測品為0? 05g，精確到0? lmg，置于空容量瓶中，加入乙腈定容 至Ij IOml,潤旋混合Imin,超聲提取lOmin。
[0045] 在步驟（2)中，氣相色譜-串聯質譜聯用儀的數據采集方式為多反應監測MRM，選 擇質荷比 M/Z = 79 - 65 作為定量離子對；M/Z = 80 - 65、M/Z = 79 - 48、M/Z = 80 - 48、 M/Z = 79 - 48作為定性離子對；溶劑切除時間3. 5min。氣相色譜-串聯質譜聯用儀的色 譜柱是以（35% -苯基）-甲基聚硅氧烷為固定液的毛細管色譜柱：DB-35MS柱長30m，柱徑 0. 25mm，膜厚0. 25iim。氣相色譜-串聯質譜聯用儀的進樣口溫度為150-300°C，進樣方式 為不分流，載氣為氦氣，柱流速為I. 50ml/min。氣相色譜-串聯質譜聯用儀的升溫程序為初 始溫度85°C，維持時間為3. 5min，以20°C /min的速率升溫至200°C。氣相色譜-串聯質譜 聯用儀的質譜條件為EI離子源，電壓為70eV，離子源溫度為230°C ;傳輸線溫度為220°C。
[0046] 以下測試樣品由南京恩泰醫藥科技有限公司提供。
[0047] 空白試驗和專屬性實驗：
[0048] 如圖1至圖4所示，稱取10_15mg甲磺酸甲酯標準品于IOml容量瓶中，用乙腈定 容至刻度，稀釋1000倍后，取Iml標準品溶液進樣分析，甲磺酸甲酯標準品色譜圖。如圖5 至圖8所示，為乙腈溶劑的色譜圖。取Iml乙腈溶劑進樣分析。
[0049] 如圖9至圖12所示，分別稱取0. 200g甲苯磺酸依度沙班固體粉末9份于IOml容 量瓶中（精確到Img),加適量乙腈,潤旋混合Imin,超聲lOmin。用乙腈定容至刻度，潤旋 混勻，取Iml過濾進樣分析。根據保留時間，離子豐度比定性，根據峰面積采用外標法定量。 得到的數據見下表1，表1為九次平行測定實驗數據：
[0050] 表 1
[0051]
【權利要求】
1. 一種氣相色譜-串聯質譜檢測甲磺酸甲酯的方法，其特征在于包括如下步驟： (1) 取待測品置于容量瓶中，加入乙腈定容到l〇_25ml，渦旋混合l-5min，超聲提取 10-15min，過0. 22 y m濾膜，進樣對樣品中甲磺酸甲酯進行測定； (2) 檢測條件：采用氣相色譜-串聯質譜聯用儀GC-MS/MS作為檢測儀器對甲磺酸甲酯 進行測定。
2. 根據權利要求1所述的氣相色譜-串聯質譜檢測甲磺酸甲酯的方法，其特征在于：在步驟（1)中，取待測品為0.05-0. 50g，精確到0. lmg，置于空容量瓶中，加入乙腈定容到 10-25ml，渦旋混合l-5min，超聲提取10-15min。
3. 根據權利要求1所述的氣相色譜-串聯質譜檢測甲磺酸甲酯的方法，其特征在于：在步驟⑵中，氣相色譜-串聯質譜聯用儀的數據采集方式為多反應監測MRM，選擇質荷比 M/Z = 79 - 65 作為定量離子對；M/Z = 80 - 65、M/Z = 79 - 48、M/Z = 80 - 48、M/Z = 79 - 48作為定性離子對；溶劑切除時間3. 5min。
4. 根據權利要求3所述的氣相色譜-串聯質譜檢測甲磺酸甲酯的方法，其特征在于：在步驟（2)中，氣相色譜-串聯質譜聯用儀的色譜柱是以（35% -苯基）-甲基聚硅氧烷為 固定液的毛細管色譜柱：DB-35MS柱長30m，柱徑0? 25mm，膜厚0? 25 ii m。
5. 根據權利要求4所述的氣相色譜-串聯質譜檢測甲磺酸甲酯的方法，其特征在于：在步驟（2)中，氣相色譜-串聯質譜聯用儀的進樣口溫度為150-300°C，進樣方式為不分流， 載氣為氦氣，柱流速為1.50ml/min。
6. 根據權利要求5所述的氣相色譜-串聯質譜檢測甲磺酸甲酯的方法，其特征在 于：在步驟（2)中，氣相色譜-串聯質譜聯用儀的升溫程序為初始溫度85°C，維持時間為 3. 5min，以20°C /min的速率升溫至200°C。
7. 根據權利要求6所述的氣相色譜-串聯質譜檢測甲磺酸甲酯的方法，其特征在于：在步驟（2)中，氣相色譜-串聯質譜聯用儀的質譜條件為EI離子源，電壓為70eV，離子源溫 度為230°C ;傳輸線溫度為220°C。
【文檔編號】G01N30/88GK104359998SQ201410567714
【公開日】2015年2月18日 申請日期:2014年10月22日 優先權日:2014年10月22日
【發明者】徐錦忠, 袁博, 倪葉猛, 肖石基, 王祝超 申請人:江蘇中譜檢測有限公司