一種血清巖藻糖苷酶檢測試劑盒的制作方法
【專利摘要】本發明涉及一種血清巖藻糖苷酶檢測試劑盒,包括試劑1和2,試劑1:緩沖液pH4.0-4.550-500mmol/L表面活性劑1-50g/L抗干擾劑1-20g/L防腐劑0.1-100g/L;試劑2:緩沖液(pH7.0-7.5)50-500mmol/L葡萄糖2-60g/L己糖激酶1-20KU/L葡萄糖-6-磷酸脫氫酶1-20KU/L硫酸鎂0.3-5g/L底物0.2-5g/L穩定劑1-100mmol/L保護劑0.1-40g/L防腐劑0.1-100g/L。本發明解決了普遍存在的底物穩定性不好、抗干擾能力差、靈敏度較低問題。
【專利說明】一種血清巖藻糖苷酶檢測試劑盒
【技術領域】
[0001] 本發明屬于醫學檢驗測定【技術領域】,具體涉及一種血清巖藻糖苷酶檢測試劑盒。
【背景技術】
[0002] a -L巖藻糖苷酶(a -L-Fucosidase,AFU),是一種溶酶體酸性水解酶,廣泛分布 于人體內的各種組織、細胞和體液中,尤其以肝、腎等組織活性較高。AFU作為溶酶體酸性 水解酶,能水解含有巖藻糖的脂質、粘蛋白和粘多糖,AFU試劑正是利用這一特性對其活力 進行檢測。1977年,Bauer等在動物實驗中觀察到Morris鼠肝癌組織中AFU活力較正常肝 臟高7倍,且與腫瘤長期相關。1984年Deugnier等發現,肝細胞癌患者血清中AFU升高, 提出把AFU作為診斷肝癌的一種新的標志酶,并被后續研究證實肝癌與AFU活力的相關性。 近年來,隨著AFU檢測方法研究及其他腫瘤或非腫瘤性疾病的血清AFU水平變化的研究深 入,巖藻糖苷酶活力測定已經成為一個基本診斷指標,并與其他實驗室指標相結合,成為肝 癌、胃癌、胰腺癌、結腸癌、口腔癌、白血病、卵巢腫瘤等疾病診斷的重要指標,大大提高了相 關疾病診斷的準確率及預后效果的評價,體現出良好的臨床診斷價值。
[0003] AFU檢測試劑盒目前在國外已廣泛應用于癌癥診斷,尤其是原發性肝癌的早期篩 查。AFU與AFP,兩項指標聯合檢測,起到優勢互補作用,陽性檢出率可達到95%左右,有助 于原發性肝癌的診斷、病情變化判別及治療效果觀察,從而彌補了 AFP在原發性肝癌診斷 上的缺陷。AFU試劑除了作為原發性肝癌的標志物之一,近年來已逐漸作為重要或輔助結 合指標,應用于胃癌、胰腺癌、結腸癌、口腔癌、白血病、卵巢腫瘤等疾病的診斷檢測。由此可 見,AFU活性檢測今后將發展成為一個市場容量大、應用范圍廣的診斷指標。
[0004] 目前,測定AFU活力的方法主要有熒光法、終點比色法、速率法。
[0005] (1)熒光法:是利用巖藻糖苷化合物在巖藻糖苷酶水解后,釋放出可發射熒光的 4-甲基傘型酮,通過檢查熒光強度來分析酶活力。該方法的靈敏度高,既能用于血清,也適 用于活檢組織、細胞、腦脊液等量小的樣本。但是該方法對儀器要求高,不僅需要凝膠過濾 除去干擾物質,而且需要熒光分光光度計,不能用于自動化分析,難以進行普及推廣。
[0006] (2)終點比色法:是以PNP-AFU為底物,底物被酶分解后產生色團,該色團在堿性 條件下呈現黃色,利用分光光度法進行定量分析。本方法簡便、設備要求不高,但是由于酶 底物本身的抗干擾性差,不能解決血清黃疸和溶血、脂血等因素對測定結果的影響,且操作 繁瑣,所需反應時間長。而且AFU作為酶需要在酸性環境下進行酶促反應,而色團需在堿性 條件下呈色,所以也不適合自動化檢測,推廣難度大。
[0007] (3)速率法:以AFU在適宜反應條件下催化含呈色基團的特定底物水解,在一定波 長下可使吸光度增加,連續監測吸光度值的變化,可計算出樣本中AFU的活性。該方法操作 簡單,測定時間短,靈敏度及抗干擾性都有所提高,適用于各種半/全自動分析儀器,便于 臨床單位推廣應用。
[0008] 由于速率法具有便于臨床推廣應用的特點,近年來,AFU活力測試逐步在臨床醫學 方面得到普遍應用。然而,本方法所采用的底物普遍存在不穩定,靈敏度不夠高的缺陷。本 發明正是基于此問題,提供了一種高性能的血清巖藻糖苷酶檢測試劑盒的制備方法,并完 美解決了底物穩定性及其靈敏度問題。
【發明內容】
[0009] 本發明所要解決的技術問題是針對現有技術現狀,提供一種底物穩定、測定準確、 方便使用、穩定可靠且靈敏度高的血清巖藻糖苷酶檢測試劑盒。
[0010] 本發明解決上述技術問題所采用的技術方案為:一種血清巖藻糖苷酶檢測試劑 盒,其特征在于:該試劑盒由試劑1和試劑2組成,
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【權利要求】
1. 一種血清巖藻糖苷酶檢測試劑盒,其特征在于:該試劑盒由試劑1和試劑2組成,
2. 根據權利要求1所述的血清巖藻糖苷酶檢測試劑盒,其特征在于:所述的緩沖液為 三羥甲基氨基緩沖液、甘氨酸-NaOH緩沖液、檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖液、磷酸氫二鈉-檸檬 酸緩沖液、醋酸-醋酸鈉緩沖液、MES緩沖液、Good's緩沖液或硼酸緩沖液中的一種或幾種。
3. 根據權利要求1所述的血清巖藻糖苷酶檢測試劑盒,其特征在于:所述的表面活性 劑為非離子表面活性劑。
4. 根據權利要求3所述的血清巖藻糖苷酶檢測試劑盒,其特征在于:所述的非離子表 面活性劑為吐溫-20、曲拉通100、Brij35中的一種或幾種。
5. 根據權利要求1所述的血清巖藻糖苷酶檢測試劑盒,其特征在于:所述的防腐劑選 自G418、卡那霉素、疊氮鈉、Proclin300中的一種或幾種。
6. 根據權利要求1所述的血清巖藻糖苷酶檢測試劑盒,其特征在于:所述發熱抗干擾 劑為膽紅素氧化酶。
7. 根據權利要求1所述的血清巖藻糖苷酶檢測試劑盒,其特征在于:所述的底物選自 2-氯-對硝基苯酚-a-L-巖藻糖苷或M-G-CNP-AFU中的一種。
8. 根據權利要求1所述的血清巖藻糖苷酶檢測試劑盒,其特征在于:所述的穩定劑選 自還原型輔酶I或還原型輔酶II中的一種。
9. 根據權利要求1所述的血清巖藻糖苷酶檢測試劑盒,其特征在于:所述的保護劑選 自聚乙二醇、丙三醇、丙二醇、蔗糖、海藻糖、山梨醇、BSA中的一種或者幾種。
【文檔編號】G01N33/52GK104267178SQ201410543027
【公開日】2015年1月7日 申請日期:2014年10月15日 優先權日:2014年10月15日
【發明者】鄒炳德, 鄒繼華, 黎鵬, 賈江花 申請人:寧波美康生物科技股份有限公司