果蠅生物模型的構建和篩選的制作方法
【專利摘要】本發明公開了一種果蠅生物模型的構建和篩選，系統篩選方法包括如下步驟：S1、通過觀察果蠅紅眼基因決定的果蠅眼睛顏色的表型變化進行第一次篩選；S2、通過檢測果蠅幼蟲的眼盤上表達的綠色熒光蛋白基因的強弱變化進行在第一次篩選的基礎上進行第二次篩選。本發明構建了既能觀測染色質結構變化，又能觀測核受體介導基因轉錄調控水平變化的果蠅生物模型。
【專利說明】果蠅生物模型的構建和篩選
【技術領域】
[0001]本發明涉及生物領域，具體涉及一種果蠅生物模型的構建和篩選。
【背景技術】
[0002]目前有關生物體內染色質結構調控的研究，主要是用酵母或果蠅分子遺傳學分析系統進行的。在這個研究領域內，研究者們利用包含內在性染色質結構變化的分析系統，對已知因子的新功能及其在染色體上的局部定位進行了詳細的研究，并被世界一流雜志給予高度評價。近年來，又對組織特異性的組蛋白修飾酶及組蛋白置換機制有了更深一層的研究。但是，目前這些研究工作由于只能在捕捉內在性染色質結構變化的基礎上進行，因此很難對組蛋白的分子間相互作用在遺傳學上進行深入的分析。從根本上來說，高等真核生物有著復雜的染色質環境，研究推測多彩的染色質環境變化應具有高度的順次性。因此，在生物體內構建一種既能用肉眼觀察又能在分子水平上進行生物化學研究的分析系統是非常必要的。
【發明內容】
[0003]為解決上述問題，本發明提供了一種果蠅生物模型的構建和篩選，本發明構建了既能觀測染色質結構變化，又能觀測核受體介導基因轉錄調控水平變化的果蠅生物模型。
[0004]本發明通過如下技術方案實現:
[0005]果蠅生物模型的篩選，包括如下步驟:
[0006]S1、通過觀察果蠅紅眼基因(white)決定的果蠅眼睛顏色的表型變化進行第一次篩選，具體篩選過程是轉有AR報告基因和AR表達基因的果蠅與數千種帶有各種基因突變型的果蠅雜交后，在果蠅子代通過觀測AR介導的基因轉錄活性的變化為指標來篩選輔調節因子；
[0007]S2、通過檢測果蠅幼蟲的眼盤上表達的綠色熒光蛋白基因(GFP)的強弱變化，在第一次篩選的基礎上進行第二次篩選，具體篩選過程是轉有AR報告基因和AR表達基因的果蠅與數千種帶有各種基因突變型的果蠅雜交后，在果蠅子代通過觀測AR介導的基因轉錄活性的變化為指標，即檢測果蠅幼蟲的眼盤上表達的綠色熒光蛋白基因的強弱變化來進一步確認輔調節因子。
[0008]本發明構建了既能觀測染色質結構變化，又能觀測核受體介導基因轉錄調控水平變化的果蠅生物模型。
【具體實施方式】
[0009]為了使本發明的目的及優點更加清楚明白，以下結合實施例對本發明進行進一步詳細說明。應當理解，此處所描述的具體實施例僅僅用以解釋本發明，并不用于限定本發明。
[0010]本具體實施提供了一種果蠅生物模型的構建和篩選，篩選方法包括如下步驟:
[0011]S1、通過觀察果蠅紅眼基因(white)決定的果蠅眼睛顏色的表型變化進行第一次篩選，具體篩選過程是轉有AR報告基因和AR表達基因的果蠅與數千種帶有各種基因突變型的果蠅雜交后，在果蠅子代通過觀測AR介導的基因轉錄活性的變化為指標，即觀察果蠅紅眼基因決定的果蠅眼睛顏色的表型變化來篩選輔調節因子；
[0012]S2、通過檢測果蠅幼蟲的眼盤上表達的綠色熒光蛋白基因(GFP)的強弱變化，在第一次篩選的基礎上進行第二次篩選，具體篩選過程是轉有AR報告基因和AR表達基因的果蠅與數千種帶有各種基因突變型的果蠅雜交后，在果蠅子代通過觀測AR介導的基因轉錄活性的變化為指標，即檢測果蠅幼蟲的眼盤上表達的綠色熒光蛋白基因的強弱變化來進一步確認輔調節因子。
[0013]實施例1
[0014]以人類的雄激素受體(AR)作為核受體的代表，在果蠅體內構建了 AR介導的轉錄調控生物系統。因為明確染色質結構調節機能是研究轉錄調控機制所必須的，本項目構建的AR介導轉錄調控系統是一個既以染色質結構變化又以轉錄水平調節為指標的生物體內系統。斑點位置效應(PEV)是一種與異染色質和常染色質的狀態和轉錄頻度相關的分析系統，常用于分析染色質結構調節的研究。在果蠅體內的特殊條件下，P序列(P element)能夠隨意地插入果蠅染色體基因上。PEV分析系統是利用果蠅的這個特性，將5’端和3’端的P序列之間存在的果蠅紅眼基因序列(white)插入到果蠅異染色質基因附近，因受異染色質基因轉錄抑制的影響，果蠅的紅眼呈紅白相間的斑點樣分布。根據眼睛顏色的強弱變化來探討染色質結構狀態的調節。，首先把決定紅眼的基因插入AR應答序列(AR responseelement, ARE)的下游來構建AR的報告基因，把此報告基因轉入白眼果蠅體內制成轉報告基因果蠅。然后將此報告基因在P序列的幫助下隨機地插入染色體基因內，通過果蠅眼睛表型的顏色變化、斑點形成與否及基因讀序的方法來篩選和鑒定報告基因插入在染色質中的位置(異染色質、常染色質)從而構建PEV果蠅模型。另一個被插入AR應答序列下游的報告基因是綠色突光蛋白基因(Green Fluorescence Protein,GFP),可通過人工分離果蜆幼蟲的眼盤(eye disc)觀測眼盤特異性表達的GFP從而檢測AR介導的基因轉錄調節。若報告基因插入在常染色質上，在AR存在下，兩個報告基因(white、GFP)呈高表達，即眼睛表型的顏色呈紅色、眼盤特異性表達的熒光蛋白呈較強的顏色；若報告基因插入在異染色質附近部位，兩個報告基因的表達則被抑制和減弱。由此，本實施例新構建的AR介導的基因轉錄調控相依存的PEV生物模型系統(以下稱AR-PEV模型)能夠在生物個體水平上用肉眼觀測和把握染色質結構狀態。應用這個分析系統，預計能夠在遺傳學上明確分析參與調控染色質結構的輔調節因子。
[0015]綜上所述，本發明構建了既能觀測染色質結構變化，又能觀測核受體介導基因轉錄調控水平變化的果蠅生物模型。
[0016]以上所述僅是本發明的優選實施方式，應當指出，對于本【技術領域】的普通技術人員來說，在不脫離本發明原理的前提下，還可以作出若干改進和潤飾，這些改進和潤飾也應視為本發明。
【權利要求】
1.果蠅生物模型的構建和篩選，其特征在于構建了既能觀測染色質結構變化，又能觀測核受體介導基因轉錄調控水平變化的果蠅生物模型。包括如下篩選步驟: 51、通過觀察果蠅紅眼基因決定的果蠅眼睛顏色的表型變化進行第一次篩選: 52、通過檢測果蠅幼蟲的眼盤上表達的綠色熒光蛋白基因的強弱變化，在第一次篩選的基礎上進行第二次篩選。
2.根據權利要求1所述的果蠅生物模型的構建和篩選，其特征在于，所述步驟SI的具體操作為:將轉有AR報告基因和AR表達基因的果蠅與數千種帶有各種基因突變型的果蠅雜交后，在果蠅子代通過觀測AR介導的基因轉錄活性的變化為指標來篩選輔調節因子。
3.根據權利要求1所述的果蠅生物模型的構建和篩選，其特征在于，所述步驟S2的具體操作為:將轉有AR報告基因和AR表達基因的果蠅與數千種帶有各種基因突變型的果蠅雜交后，在果蠅子代通過觀測AR介導的基因轉錄活性的變化為指標，即檢測果蠅幼蟲的眼盤上表達的綠色熒光蛋白基因的強弱變化來進一步確認輔調節因子。
【文檔編號】G01N21/64GK104304185SQ201410509551
【公開日】2015年1月28日 申請日期:2014年9月18日 優先權日:2014年9月18日
【發明者】趙越, 王春玉, 林琳, 鄒仁龍, 王勝利, 孫洪邈, 孫士瑩, 吳怡 申請人:中國醫科大學