一種烏拉爾甘草皂苷a的含量測定方法
【專利摘要】本發明公開了一種烏拉爾甘草皂苷A的含量測定方法，包括（1）設置色譜條件；（2）對照品溶液的制備；（3）供試品溶液的制備；（4）精密吸取對照品溶液和供試品溶液各20μl，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，通過高效液相色譜法測量得到烏拉爾甘草皂苷A的含量。本發明采用高效液相色譜法（HPLC）來測定烏拉爾甘草皂苷A的含量，其具有專一性，能夠準確、簡便，快捷地測定烏拉爾甘草皂苷的含量。且采用梯度洗脫進行分析，有較好的分離效果，還能夠縮短分析時間。經過試驗表明，所測成分分離度，線性關系，重現性，精密度，穩定性，回收率均較好。
【專利說明】
一種烏拉爾甘草皂苷A的含量測定方法
【技術領域】
[0001]本發明涉及一種含量測定方法，尤其是涉及一種烏拉爾甘草皂苷A的含量測定方法，屬于化學成分檢測【技術領域】。
【背景技術】
[0002]甘草為豆科植物烏拉爾甘草Glycyrrhiza uralensis Fisch.、脹果甘草G.1nflata Bat.、光果甘草G.glabra L.的干燥根及根莖。其味甘,性平，歸心、肺、脾、胃經。具有補脾益氣、清熱解毒、祛痰止咳、緩急止痛、調和諸藥的功效。藥理研究表明，甘草具有抗氧化、抗病毒、抗抑郁、抗炎、抗腎炎以及保肝活性。甘草中三萜皂苷是其主要的活性物質基礎，主要由I分子的五環三萜苷元與2分子的葡萄糖醛酸構成。相關研究表明，這些主要的皂苷類成分具有保肝、抗癌、抗炎、抗病毒以及神經保護活性等作用。對甘草中皂苷類成分進行了分離得到14個化合物,分別鑒定為uralsaponin C (I )、uralsaponin D
[2]、licorice-saponinA3 (3)、uralsaponin F (4)>22 β -acetoxyl-glycyrrizin (5)、24-hydroxyl-licorice-saponin E2 (6)、 licorice-saponin E2 (7)、 licorice-saponinG2 (8)、22β-acetoxyl- glyrrhaldehyde (9)>3 β-0-[β-D-glucuronopyranosyl-(1 — 2)-β -D-glucuronopyranosyl]-glycyrretol (10)、araboglycyrrhizin (11)、licorice-saponin J2 (12)、甘草酸(glycyrrhizin, 13)、單葡糖醒酸基甘草次酸(glycyrrhetic acid monoglucuronide, 14)。其中化合物10即為烏拉爾甘草阜苷A。
[0003]現有專利和文獻資料中僅有烏拉爾甘草的鑒別和成分研究的報道，如《烏拉爾甘草中皂甙的研究》和《烏拉爾甘草皂苷類成分研究》以及申請號為201310231850.8的專利《一種烏拉爾甘草與脹果甘草種子的鑒定方法》，并無對烏拉爾甘草皂苷A的含量測定的方法。
【發明內容】
[0004]本發明所要解決的技術問題是，提供一種重現性、精密度、穩定性均有較大優勢的烏拉爾甘草皂苷A的含量測定方法。
[0005]為解決上述技術問題，本發明采用的技術方案為:
一種烏拉爾甘草皂苷A的含量測定方法，其特征在于，包括以下步驟:
Cl)設置色譜條件:室溫，相對濕度25?40% ;以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以乙腈為流動相A，以濃度為1%的冰醋酸溶液為流動相B，按下表中的規定進行梯度洗脫，流速:0.8?1.2ml/min,柱溫 25?40°C，檢測波長 250?257nm ；
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(2)對照品溶液的制備:精密稱取烏拉爾甘草皂苷A對照品，加濃度為50%-100%的乙醇溶解制成對照品溶液；
(3)供試品溶液的制備:稱取烏拉爾甘草粗提物，加濃度為50%-100%的乙醇，超聲溶解5?20分鐘，放冷，即得；
(4)測定法:精密吸取對照品溶液和供試品溶液各20μ 1，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，通過高效液相色譜法測量得到烏拉爾甘草皂苷A的含量。
[0006]進一步，步驟(I)中所述的室溫為20°C，相對濕度為35%，流速為lml/min ;柱溫為30°C，檢測波長為252nm。
[0007]步驟(I)中所述的梯度洗脫按下表規定進行:
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0-820 ^2580—75
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30- -403565
[0008]步驟(2)中所述的對照品溶液的濃度為0.1 "0.5mg/ml,優選為0.2mg/ml。
[0009]步驟(2)中所述的乙醇的濃度優選為80%。
[0010]步驟(3)中所述的供試品溶液的濃度為0.2?2mg/ml,優選為lmg/ml。
[0011]此外，步驟(3)中所述的超聲時間優選為lOmin。
[0012]本發明的有益效果為:本發明采用高效液相色譜法(HPLC)來測定烏拉爾甘草皂苷A的含量，其具有專一性，能夠準確、簡便，快捷地測定烏拉爾甘草皂苷的含量。且采用梯度洗脫進行分析，有較好的分離效果，還能夠縮短分析時間。經過試驗表明，所測成分分離度，線性關系，重現性，精密度，穩定性，回收率均較好。
【具體實施方式】
[0013]下面給出本發明的具體實施例，詳細描述本發明的技術特征。
[0014]下述實施例中檢測儀器:島津高效液相色譜儀，包括LC 1ATvp plus 二元泵，SPD1Avp plus紫外檢測器，LC-solut1n色譜工作站。乙腈為色譜純,水為超純水,其余試劑均為分析純。烏拉爾甘草粗提物由江蘇天晟藥業有限公司提供，烏拉爾甘草皂苷A對照品由江蘇天晟藥業有限公司研發中心提供，其中，烏拉爾甘草皂苷A經1H，13C鑒定，HPLC歸一化純度為98%。
[0015]實施例1
I色譜條件與系統適應性
色譜柱:C18色譜柱(Agilent TC-C18 (2) 4.6 X 250mm, 5 μ m);以乙腈為流動相A,以1%冰醋酸溶液為流動相B，按下表中的規定進行梯度洗脫，流速:lml/min,柱溫30°C，檢測波長252nm，
【權利要求】
1.一種烏拉爾甘草皂苷A的含量測定方法，其特征在于，包括以下步驟: Cl)設置色譜條件:室溫，相對濕度25~40% ;以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以乙腈為流動相A，以濃度為1%的冰醋酸溶液為流動相B，按下表中的規定進行梯度洗脫，流速:0.8~1.2ml/min,柱溫 25~40°C，檢測波長 250~257nm，
(2)對照品溶液的制備:精密稱取烏拉爾甘草皂苷A對照品，加濃度為50%-100%的乙醇溶解制成對照品溶液； (3)供試品溶液的制備:稱取烏拉爾甘草粗提物，加濃度為50%-100%的乙醇，超聲溶解5~20分鐘，放冷，即得； (4)測定法:精密吸取對照品溶液和供試品溶液各20μ 1，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，通過高效液相色譜法測量得到烏拉爾甘草皂苷A的含量。
2.根據權利要求1所述的一種烏拉爾甘草皂苷A的含量測定方法，其特征在于，步驟(I)中所述的室溫為20°C，相對濕度為35%，流速為lml/min ;柱溫為30°C，檢測波長為252nm。
3.根據權利要求1所述的一種烏拉爾甘草皂苷A的含量測定方法，其特征在于，步驟(O中所述的梯度洗脫按下表規定進行:
4.根據權利要求1所述的一種烏拉爾甘草皂苷A的含量測定方法，其特征在于，步驟(2)中所述的對照品溶液的濃度為0.1~0.5mg/ml。
5.根據權利要求1或4所述的一種烏拉爾甘草皂苷A的含量測定方法，其特征在于，步驟(2)中所述的對照品溶液的濃度為0.2mg/ml。
6.根據權利要求1所述的一種烏拉爾甘草皂苷A的含量測定方法，其特征在于，步驟(2)中所述的乙醇的濃度為80%。
7.根據權利要求1所述的一種烏拉爾甘草皂苷A的含量測定方法，其特征在于，步驟(3)中所述的供試品溶液的濃度為0.2?2mg/ml。
8.根據權利要求1或7所述的一種烏拉爾甘草皂苷A的含量測定方法，其特征在于，步驟(3)中所述的供試品溶液的濃度為lmg/ml。
9.根據權利要求1所述的一種烏拉爾甘草皂苷A的含量測定方法，其特征在于，步驟(3)中所述的超聲時間為lOmin。
【文檔編號】G01N30/02GK104198612SQ201410473844
【公開日】2014年12月10日 申請日期:2014年9月17日 優先權日:2014年9月17日
【發明者】易銘, 金顯友, 張宇, 季浩 申請人:江蘇天晟藥業有限公司