一種檢測食用油中3-氯-1,2-丙二醇酯含量的方法
【專利摘要】本發明涉及一種檢測食用油中3-氯-1,2-丙二醇(3-MCPD)酯含量的方法，該方法包括以下步驟：樣品預處理、酸催化酯交換、鹽析、萃取、凈化、衍生化和檢測。本發明采用穩定同位素內標，結合酸催化酯交換和七氟丁酰基咪唑衍生化應用單四級桿GC-MS間接定量分析3-MCPD酯，減少了預處理時間增加了分析效率，同時大大降低了有機溶劑的用量避免對環境污染的同時降低了分析的成本，經七氟丁酰基咪唑衍生后樣品質譜碎片信息豐富，且幾乎不對氣質聯用儀造成污染。
【專利說明】-種檢測食用油中3-氯-I，2-丙二醇目旨含量的方法
【技術領域】
[0001] 本發明涉及食品檢測方法，具體涉及一種檢測食用油中3-氯-1，2-丙二醇醋含量 的方法。
【背景技術】
[0002] 3-氯-1, 2-丙二醇（3-monochlorop;ropanol-l, 2-diol, 3-MCPD) W脂肪酸醋的形 式（W下稱3-Mcro醋）廣泛存在于油炸、賠烤等食品中，且其主要來源于加工過程中添加 的精煉食用油。
[0003] 3-氯-1，2-丙二醇醋（3-MCro醋）是3-氯丙醇與脂肪酸的醋化物，是油脂精煉 過程中引入的又一潛在危害因子，1983年西班牙首次在鹽酸精煉苯胺污染的菜巧油中檢 出3-Mcro醋，但是20余年未受到重視。隨著科技的發展和對食品安全的高度重視，近年 來3-Mcro醋越來越引起科學家及政府的重視。已有研究表明，3-Mcro醋在膜醋酶作用下 會釋放出3-MCPD，而3-MCPD是公認的食品污染物，具有潛在致癌性。有文獻報道，未加熱 和未精煉的油脂中，沒有或只有微量的3-Mcro醋，而幾乎所有精煉油中3-Mcro醋的含量為 0. 2-20mg/kg〇
[0004] 3-MCro醋在人體中會被降解為游離態的3-MCPD，繼而表現出游離態3-MCro所具 有的腎臟毒性、強致癌性及致突變性等危害。
[0005] 德國聯邦風險評估機構炬fR)假設3-Mcro醋在人體中會完全水解為游離態的 3-MCPD，再根據3-MCPD的限量進行評估，報告顯示；嬰兒配方乳品干基油脂中3-MCro含 量在1210-4169]i g/kg之間，已經超過了食品添加劑聯合專家委員會制定CJECFA)的 TDI(2yg/kg bw)的3.6-12.5倍，對高脂肪攝入群體而言，3-1〔口0的攝入量已超過了101 的5倍。
[0006] 常用的檢測食用油中3-MCPD醋的方法為間接測定法。
[0007] 其理論為；3-MCro醋有3類化合物，分別為snl-3-MCPD單醋、sn2-3-MCPD單醋和 3-Mcro雙醋，間接法不測定上述成分的含量，而是通過醋交換將油脂中存在的3-Mcro醋轉 化為游離態的3-MCPD，測定3-MCro的含量，即W 3-MCPD的含量表示3-MCro醋的總量。
[0008] 具體步驟為；①首先將油溶解于溶劑中，添加適量気代同位素內標；②在催化劑 作用下，油中存在的各種3-MCro醋與甲醇發生醋交換反應，轉化為3-MCPD ;③中和反應 物，鹽析，提取純化3-MCPD ;④將釋放的3-MCPD在衍生劑作用下衍生化；⑥用GC-MS檢測 3-MCPD的含量。
[0009] 間接法中催化劑主要為酸催化劑（硫酸）或堿催化劑（化0H、化0邸3)，具體為：
[0010] 堿催化間接法，優勢是醋交換反應時間短，但是若不嚴格控制關鍵操作點，可能產 生額外或消除一部分3-MCPD，從而造成過高或過低評估3-MCro醋總量，影響結果。采用堿 催化醋交換將3-MCro醋降解為3-MCPD，經過苯測酸衍生化后進行定量分析，堿催化醋交換 會降解3-MCPD，使得方法的準確度和靈敏度大大降低，且過量衍生的苯測酸的低聚物會污 染氣質聯用儀，增加了維護的負擔。
[0011] 酸催化間接法，其優勢是耐用性好，能提供可靠的3-Mcro醋總量的測量值，但常 規酸催化醋交換反應往往需要16h，比較耗時。相關酸催化劑組合為硫酸/甲醇。（W上關 于酸、堿催化間接法的評價見張蕊等在"食用油中3-氯-1，2-丙二醇醋測定方法的研究進 展"的論述，公開于《中國糧油學報》2012年12月第27卷第12期，122-127)，目前國際上 存在的酸催化醋交換前處理步驟非常繁瑣，且醋交換時間長達16h，嚴重影響了分析效率。
[0012] 因此，需要提供克服現有技術中常用方法分析效率低、靈敏度低、污染氣質聯用儀 等難題，在保證方法真實性的基礎上的一種方法。
【發明內容】
[0013] 本發明的目的是提供一種檢測食用油中3-氯-1，2-丙二醇醋的含量的方法。
[0014] 本發明提供的一種檢測食用油中3-氯-1，2-丙二醇醋含量的方法，該方法包括W 下步驟；樣品預處理、酸催化醋交換、鹽析、萃取、凈化、衍生化和檢測。
[0015] 所述樣品預處理包括W下步驟；將均質的食用油溶解，然后加入四氨巧喃，并加入 ds-3-氯-1，2-丙二醇蹤擱酸雙醋，潤旋混勻。
[0016] 優選地，所述樣品預處理包括W下步驟：將均質的食用油0. 1-0. 2g在30-5(TC下 溶解，然后加入Iml的四氨巧喃，并加入0. 187-0. 5 y g d廣3-氯-1，2-丙二醇蹤擱酸雙醋， 潤旋混勻。
[0017] 所述酸催化醋交換、鹽析、萃取包括W下步驟；混合物中加入0.5-lmL濃度為 0. 1% (v/v)硫酸-甲醇溶液，于40-55°C下恒溫、密閉反應0. 5-化，加入飽和碳酸氨軸溶液 中和抑為6-8,加入2mL 20% (v/v)硫酸軸水溶液，并用2mL正庚焼溶液萃取，棄去上層含 有脂肪酸甲醋的有機相，得到含有3-Mcro的水相。
[0018] 具體的，該方法包括W下步驟：
[001引 1)樣品預處理
[0020] 將均質的食用油0. 1-0. 2g在30-5(TC溶解，然后加入Iml四氨巧喃，并加入 0. 187-0. 5 y g的ds-3-氯-1，2-丙二醇蹤擱酸雙醋，潤旋混勻；
[0021] 2)酸催化醋交換、鹽析、萃取
[002引 向步驟1)得到的混合物中加入1血體積濃度為0. 1 %的硫酸-甲醇溶液，于 40-55C下恒溫、密閉反應0. 5-化，反應結束后，加入飽和碳酸氨軸溶液中和至抑為6-8,加 入2mL體積濃度為20 %硫酸軸水溶液，并用2mL正庚焼溶液萃取，棄去上層含有脂肪酸甲醋 的有機相，得到含有3-Mcro的水相；
[002引如凈化
[0024] 向步驟2)得到的水相中倒入3-6g娃藻±，靜置10分鐘并使其充分分散，再全部 倒入裝有3-6g娃藻±的聚丙帰固相萃取柱，先用30mL正己焼溶液淋洗，棄去淋洗液，用 30-90mL甲基叔了基離或己離洗脫，收集洗脫液，收集時間為15-40min，加入IOg無水硫酸 軸，用IOmL正己焼溶液洗涂無水硫酸軸，35-55C下旋轉蒸發濃縮至0. 5mU濃縮液用少量 正己焼溶液潤洗；
[00幼 4)衍生化
[0026] 將步驟3)得到的溶液于氮氣下濃縮至ImU用200 U L氣密針迅速加入走氣下醜基 咪哇40 y L，密閉下于7(TC下衍生化20min，冷卻，加入3血超純水，充分潤旋混勻使下層液 體澄清，下層水相棄除，上層有機相中加入少量無水硫酸軸干燥，靜置，即得樣品，備用；
[0027] W儀器分析
[0028] 將步驟4)的樣品通過氣相色譜質譜聯用儀進行分析檢測，儀器條件如下：
[002引氣相條件：
[0030] 色譜柱；DB-Sms毛細管柱（30mX0. 25mmX0. 25y m);進樣口溫度；25(TC。升溫程 序；6(TC保持 Imin，W 2°C /min 升至 9(TC，最后 W 45°C /min 的速度升至 29(TC，保持 lOmin。 載氣：高純氮。進樣方式：不分流進樣；進樣體積：1 U L ;
[0031] 質譜條件：
[0032] 四級桿質譜儀，電離模式：電子轟擊源EI，70eV;傳輸線溫度；25(TC ;離子源 溫度26(TC。溶劑延遲時間；7min ;掃描方式；選擇離子掃描，定量離子253或289或 453 (3-MCPD)，257 或 294 或 456 (ds-3-MCPD)，定性離子 253、289、453 (3-MCPD)，257、294、 456 (dg-a-MCPD)；
[003引 6)定量檢測。
[0034] 所述定量檢測方法包括W下步驟：采用校準曲線法，包括校準曲線的準備；W標 準溶液與內標溶液的濃度比為X軸，峰面積比為Y軸繪制曲線，計算線性回歸如下：
[0035] y 二 ax+b
[0036] 確保線性關系良好（R2 > 0. 99);
[0037] 用下公式計算油樣中3-MCro醋的濃度（mg/kg):
[003引 C - [ (As-mcpd/-^s-MCPD-ds) ~b]XISXl/aX 1/W
[003引 其中：
[0040] C =油樣中3-MCPD醋的濃度（W等同的游離態的3-MCPD表示，mg/kg油）
[00川 As-MC陽=3-MCPD衍生物的峰面積
[004引 IS =內標物的絕對用量（純度校正后，y g)
[004引 A3_MCPD-d5 = 3-MCPD-ds衍生物的峰面積
[0044] a =殺斗率
[004引 W =樣品重量（g)
[0046] b =截距。
[0047] 上述方法中：
[0048] 所述食用油為植物油，進一步優選為花生油、玉米油、棉子油、葵花巧油、大豆油、 花生油、菜巧油、橄攬油、米慷油、紅花油、芝麻油、挪子油、核桃油、蹤擱油、紫蘇油及各類食 用調和油等。
[0049] 所述食用油溶解時的溫度為30-5(TC，優選為40-5(TC。
[0050] 所述硫酸-甲醇溶液、硫酸軸水溶液的濃度均為體積比。
[0051] 本發明提供的檢測方法具有W下優點：
[0052] 1、與現有技術相比：
[005引1)現有方法已經有使用硫酸、甲醇作為催化劑進行前處理，只不過時間較本發明 時間長，本發明時間短，而縮短反應時間可能會導致3-Mcro醋醋交換不完全，但運用了與 3-MCro醋性質非常接近的d5-3-氯-1，2-丙二醇蹤擱酸雙醋內標后，該種穩定同位素稀釋 法能夠有效避免3-MCro醋交換不完全帶來的對結果的影響。經過實驗，反應0. 5-2化得到 的檢測結果之間無顯著性差異。
[0054] 2)對食用油處理方面；與現有技術相比，本發明提供的醋交換的條件更加溫和， 避免了游離態3-MCPD的損失，在凈化方面，相對于國標GB/T-5009. 191-2006對于游離態 3-MCPD的檢測，大大降低了有機溶劑、娃藻±的用量，一次性固相萃取柱的應用簡化了層析 柱的裝填步驟，同時避免了因層析柱清洗不當帶來的交叉污染。
[00巧]3)定量方法：與現有技術相比，本方法能夠實現樣品的批量處理，批量分析，樣品 純凈對儀器污染程度低。避免了苯測酸衍生法所帶來的頻繁的儀器維護。
[0056] 2、本發明提供的方法在預處理過程中采用酸法醋交換，避免了 3-MCro在堿性條 件下的損失，同時HFBI衍生產物擁有更大的分子量，提供了豐富的質譜信息和定量離子的 選擇。實驗表明，采用相對豐度最高的特征離子253(3-MCPD)和257化-3-MCPD)進行定量 時，目標峰與基質中的雜質峰分離良好，最低檢出限和最低定量限分別為20. 36 y g/kg(S/N =3)和67. 87 y g/kg (S/N = 10)，遠低于大多數現有方法。
[0057] 3、本發明采用穩定同位素內標，結合酸催化醋交換和走氣下醜基咪哇衍生化應用 單四級桿GC-MS間接定量分析3-MCro醋，減少了預處理時間增加了分析效率，同時大大降 低了有機溶劑的用量避免對環境污染的同時降低了分析的成本，經走氣下醜基咪哇衍生后 樣品質譜碎片信息豐富，且幾乎不對氣質聯用儀造成污染。
【具體實施方式】
[005引 W下實施例用于說明本發明，但不用來限制本發明的范圍。
[0059] 實施例1
[0060] 1、樣品預處理
[0061] 稱取0. IOOg均質后的花生油于帶蓋離也管中，4(TC微微加熱使脂全部溶解，加入 樣品ImL四氨巧喃溶液，并加入80 y L屯-3-氯-1，2-丙二醇蹤擱酸雙醋內標液（4. 675 y g/ 血，W游離態計），潤旋混勻。
[0062] 2、酸催化醋交換、鹽析、萃取
[006引向離也管中加入0. 5血0. 1 %硫酸-甲醇溶液，旋緊后置于4(TC下恒溫反應化， 待反應結束后，加入飽和碳酸氨軸溶液中和潤旋，使中和后抑為6. 7。向離也管中加入2mL 20% (v/v)硫酸軸水溶液，并用2mL正庚焼溶液萃取，棄去上層含有脂肪酸甲醋的有機相， 得到含有3-Mcro的水相。
[0064] 3、凈化
[0065] 向上述水相中倒入3g Hy化omatrix娃藻±，靜置10分鐘敲擊離也管使娃藻±充 分分散，全部倒入預先裝有3g娃藻±的聚丙帰固相萃取柱（柱底和填料上層各裝有一個 0. 2ym篩板），先用30mL正己焼溶劑淋洗，棄去淋洗液，再用30mL己離溶劑洗脫，用裝有 IOg無水硫酸軸的H角瓶收集洗脫液，收集時間為15min，收集完畢后將洗脫液轉入蒸觸燒 瓶中，并用IOmL正己焼溶液洗涂無水硫酸軸，一并轉入蒸觸燒瓶中，35C下旋轉蒸發濃縮 至0. 5mU濃縮液轉入IOmL具塞刻度試管中，并用少量正己焼溶液潤洗蒸觸燒瓶，將洗涂液 一并轉移至上述試管中。
[006引 4、衍生化
[0067] 將上述試管中的液體于氮氣下濃縮至ImU用200 U L氣密針迅速加入衍生化試劑 40y L，將蓋子蓋緊后于7(TC下衍生化20min。冷卻后向試管中加入3血超純水，充分潤旋 混勻使下層液體澄清。用己氏吸管吸出下層水相并棄除，上層有機相中加入少量無水硫酸 軸干燥，靜置10分鐘后轉入氣相進樣瓶中W備進樣分析。
[0068] 5、儀器分析
[0069] 將4中的樣品通過氣相色譜質譜聯用儀進行分析檢測，儀器條件如下：
[0070] 氣相條件：
[0(m] 色譜柱；DB-Sms毛細管柱（30mX0. 25mmX0. 25y m);進樣口溫度；25(TC。升溫程 序；6(TC保持 Imin，W 2°C /min 升至 9(TC，最后 W 45°C /min 的速度升至 29(TC，保持 lOmin。 載氣：高純氮。進樣方式：不分流進樣；進樣體積：1-2 U L。
[007引質譜條件：
[0073] 本方法所用質譜為四級桿質譜儀，電離模式：電子轟擊源巧I)，70eV;傳輸線溫 度；25(TC ;離子源溫度26(TC。溶劑延遲時間；7min ;掃描方式；選擇離子掃描，定量離子 253 (3-MCPD)，257 (ds-3-MCPD)，定性離子 253、289、453 (3-MCPD)，257、294、456 (ds-3-MCPD)
[0074] 定量方法采用校準曲線法，包括校準曲線的準備；W標準溶液與內標溶液的濃度 比為X軸，峰面積比為Y軸繪制曲線。計算線性回歸如下：
[00巧]y = ax+b
[0076] 用下公式計算油樣中3-MCPD醋的濃度（mg/kg):
[0077] C = [ (As-mcpd/As個-ds) - b] X ISX 1/aX 1/W
[0078] 其中：
[007引 C =油樣中3-MCPD醋的濃度（W等同的游離態的3-MCPD表示，mg/kg油）
[0080] As-MC陽=3-MCPD衍生物的峰面積
[0081 ] IS =內柄物的絕對用重（純度校正后，y g)
[008引 A3_MCPD-d5 = 3-MCPD-ds衍生物的峰面積
[0083] a =斜率
[0084] W =樣品重量（g)
[0085] b =截距
[0086] 得到線性公式 y = 0. 003X+0. 037, R2 = 0. 9990
[0087] 計算得到花生油樣品中3-MCro醋的含量為0. 301mg/kg
[0088] 實施例2 :
[0089] 1、樣品預處理
[0090] 稱取0. 150g均質后的紫蘇油于帶蓋離也管中，45C微微加熱使脂全部溶解。加入 樣品ImL四氨巧喃溶液，并加入80 y L d廣3-氯-1，2-丙二醇蹤擱酸雙醋內標液（4. 675 y g/ 血，W游離態計），潤旋混勻。
[0091] 2、酸催化醋交換、鹽析、萃取
[009引 向離也管中加入0. 5血0. 1 (v/v)硫酸-甲醇溶液，旋緊后置于45C下恒溫反應 比。待反應結束后，加入飽和碳酸氨軸溶液中和潤旋，使中和后抑為7. 6。向離也管中加入 2mL 20% (v/v)硫酸軸水溶液，并用2mL正庚焼溶液萃取，棄去上層含有脂肪酸甲醋的有機 相，得到含有3-MCPD的水相。
[0093] 3、凈化
[0094] 向上述水相中倒入4g Hy化omatrix娃藻±，靜置10分鐘敲擊離也管使娃藻±充 分分散，全部倒入預先裝有4g娃藻±的聚丙帰固相萃取柱（柱底和填料上層各裝有一個 0. 2 y m篩板），先用30mL正己焼溶液淋洗，棄去淋洗液，再用60mL甲基叔下基離洗脫，用裝 有IOg無水硫酸軸的H角瓶收集洗脫液，收集時間為40min，收集完畢后將洗脫液轉入蒸觸 燒瓶中，并用IOmL正己焼溶液洗涂無水硫酸軸，一并轉入蒸觸燒瓶中，5(TC下旋轉蒸發濃 縮至0. 5mU濃縮液轉入IOmL具塞刻度試管中，并用少量正己焼溶液潤洗蒸觸燒瓶，將洗涂 液一并轉移至上述試管中。
[0095] 衍生化、儀器分析步驟同實例1。
[0096] 計算得到玉米油樣品中3-MCro醋含量為；0. 071mg/kg
[0097] 實施例3 :
[0098] 1、樣品預處理
[0099] 稱取0. 200g均質后的玉米油于帶蓋離也管中，5(TC微微加熱使脂全部溶解。加入 樣品ImL四氨巧喃溶液，并加入80 y L d廣3-氯-1，2-丙二醇蹤擱酸雙醋內標液（4. 675 y g/ 血，W游離態計），潤旋混勻。
[0100] 2、酸催化醋交換、鹽析、萃取
[0101] 向離也管中加入0. 5血0. 1 (v/v)硫酸-甲醇溶液，旋緊后置于55C下恒溫反應 30min。待反應結束后，加入飽和碳酸氨軸溶液中和潤旋，使中和后抑為8. 0。向離也管中 加入2mL 20% (v/v)硫酸軸水溶液，并用2血正庚焼溶液萃取，棄去上層含有脂肪酸甲醋的 有機相，得到含有3-Mcro的水相。
[0102] 3、凈化
[0103] 向上述水相中倒入6g Hy化omatrix娃藻±，靜置10分鐘敲擊離也管使娃藻±充 分分散，全部倒入預先裝有6g娃藻±的聚丙帰固相萃取柱（柱底和填料上層各裝有一個 0. 2 y m篩板），先用30mL正己焼溶液淋洗，棄去淋洗液，再用90mL甲基叔下基離溶液洗脫， 用裝有IOg無水硫酸軸的H角瓶收集洗脫液，收集時間為40min，收集完畢后將洗脫液轉入 蒸觸燒瓶中，并用IOmL正己焼溶液洗涂無水硫酸軸，一并轉入蒸觸燒瓶中，55C下旋轉蒸 發濃縮至0. 5mU濃縮液轉入IOmL具塞刻度試管中，并用少量正己焼溶液潤洗蒸觸燒瓶，將 洗涂液一并轉移至上述試管中。
[0104] 衍生化、儀器分析、數據處理步驟同實例1。
[010引計算得到玉米油樣品中3-MCro醋含量為；0. 679mg/kg。
[0106] 實驗例：準確度和精密度的實驗
[0107] 準確度實驗；在低溫壓棒花生油（3-Mcro醋未檢出）基質中進行加標回收率實驗， 驗證方法的準確度。
[0108] 具體實驗方法為：在0. Ig冷棒花生油中進行加標回收率實驗，實驗共進行H個水 平，加入標準物質3-氯-1，2-丙二醇蹤擱酸雙醋的濃度502. 25 y g/kg、1004. 50 y g/kg、 2009. 00 y g/kg，再加入I. 87 y g的ds-3-氯-1，2-丙二醇蹤擱酸雙醋，潤旋混勻。
[0109] 其余同步驟（2)到化）。
[0110] 實驗得到的加標回收率及RSD如下表所示：
[0111]
【權利要求】
1. 一種檢測食用油中3-氯-1，2-丙二醇酯含量的方法，該方法包括以下步驟：樣品預 處理、酸催化酯交換、鹽析、萃取、凈化、衍生化和檢測，其特征在于，所述樣品預處理包括以 下步驟：將均質的食用油溶解，然后加入四氫呋喃，并加入d 5-3-氯-1，2-丙二醇棕櫚酸雙 酯，渦旋混勻。
2. 根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述樣品預處理包括以下步驟：將均質的 食用油〇. 1-0. 2g溶解，然后加入lmL的四氫呋喃，并加入0. 187-0. 5 μ g d5-3-氯-1，2-丙 二醇棕櫚酸雙酯，渦旋混勻。
3. 根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述酸催化酯交換、鹽析、萃取包括以下 步驟：混合物中加入0. 5-lmL濃度為0. 1 %硫酸-甲醇溶液，于40-55°C下恒溫、密閉反應 0. 5-2h，加入飽和碳酸氫鈉溶液中和pH為6-8,加入2mL濃度為20 %硫酸鈉水溶液，并用 2mL正庚烷溶液萃取，棄去上層含有脂肪酸甲酯的有機相，得到含有3-MCPD的水相。
4. 根據權利要求1所述的方法，其特征在于，該方法包括以下步驟： 1) 樣品預處理 將均質的食用油〇. 1-0. 2g在30-50 °C溶解，然后加入lmL四氫呋喃，并加入 0. 187-0. 5 μ g的d5-3-氯-1，2-丙二醇棕櫚酸雙酯，渦旋混勻； 2) 酸催化酯交換、鹽析、萃取 向步驟1)得到的混合物中加入lmL體積濃度為0. 1%的硫酸-甲醇溶液，于40-55°C 下恒溫、密閉反應0. 5-2h,反應結束后，加入飽和碳酸氫鈉溶液中和至pH為6-8,加入2mL 體積濃度為20%硫酸鈉水溶液，并用2mL正庚烷溶液萃取，棄去上層含有脂肪酸甲酯的有 機相，得到含有3-MCPD的水相； 3) 凈化 向步驟2)得到的水相中倒入3-6g硅藻土，靜置10分鐘并使其充分分散，再全部倒入 裝有3-6g娃藻土的聚丙烯固相萃取柱，先用30mL正己燒溶液淋洗，棄去淋洗液，用30-90mL 乙醚或甲基叔丁基醚洗脫，收集洗脫液，收集時間為15-40min，加入10g無水硫酸鈉，用 10mL正己烷溶液洗滌無水硫酸鈉，35-55 °C下旋轉蒸發濃縮至0. 5mL，濃縮液用少量正己烷 溶液潤洗； 4) 衍生化 將步驟3)得到的溶液于氮氣下濃縮至lmL，用200 μ L氣密針迅速加入七氟丁酰基咪 唑40 μ L，密閉下于70°C下衍生化20min，冷卻，加入3mL超純水，充分渦旋混勻使下層液體 澄清，下層水相棄除，上層有機相中加入少量無水硫酸鈉干燥，靜置，即得樣品，備用； 5) 儀器分析 將步驟4)的樣品通過氣相色譜質譜聯用儀進行分析檢測，儀器條件如下： 氣相條件： 色譜柱：DB-5ms毛細管柱（30mX0. 25mmX0. 25μπι);進樣口溫度：250°C ;升溫程序： 6〇°C保持lmin，以2°C /min升至90°C，最后以45°C /min的速度升至290°C，保持lOmin。載 氣：高純氦。進樣方式：不分流進樣；進樣體積：1 μ L ; 質譜條件： 四級桿質譜儀，電離模式：電子轟擊源EI，70eV;傳輸線溫度：250 °C ;離子源溫 度260°C ;溶劑延遲時間：7min ;掃描方式：選擇離子掃描，定量離子253或289或 453 (3-MCPD)，257 或 294 或 456 (d5-3-MCPD)，定性離子 253、289、453 (3-MCPD)，257、294、 456 (d5-3-MCPD)； 6)定量檢測。
5. 根據權利要求4所述的方法，其特征在于，所述定量檢測方法包括以下步驟：采用校 準曲線法，包括校準曲線的準備：以標準溶液與內標溶液的濃度比為X軸，峰面積比為Y軸 繪制曲線，計算線性回歸如下： y = ax+b 確保線性關系良好（R2> 0.99); 用下公式計算油樣中3-MCPD酯的濃度（mg/kg): c = [(A 3-MCPD /As-icpD-ds) -b]XISXl/aXl/ff 其中： c =油樣中3-MCPD酯的濃度（以等同的游離態的3-MCPD表示，mg/kg油） A? = 3-MCPD衍生物的峰面積 IS =內標物的絕對用量（純度校正后，μ g) A3-MCPD-d5 =3-MCPD-d5衍生物的峰面積 a =斜率 W =樣品重量（g) b =截距。
6. 根據權利要求1-5任一項所述的方法，其特征在于，所述食用油為植物油。
7. 根據權利要求6所述的方法，其特征在于，所述食用油為溶解溫度為30-50°C的食用 油。
8. 根據權利要求6所述的方法，其特征在于，所述食用油為花生油、玉米油、棉子油、葵 花籽油、大豆油、花生油、菜籽油、橄欖油、米糠油、紅花油、芝麻油、椰子油、核桃油、棕櫚油、 紫蘇油及各類食用調和油。
9. 根據權利要求5所述的方法，其特征在于，所述食用油溶解時的溫度為30-50°C。
【文檔編號】G01N30/88GK104237434SQ201410438232
【公開日】2014年12月24日 申請日期:2014年8月29日 優先權日:2014年8月29日
【發明者】王強, 石愛民, 焦博, 劉紅芝, 胡暉, 劉麗 申請人:中國農業科學院農產品加工研究所