Hplc同時測定諾尼果汁中車葉草苷酸和去乙酰車葉草苷酸含量的方法
【專利摘要】本發明涉及一種HPLC同時測定諾尼果汁中車葉草苷酸和去乙酰車葉草苷酸含量的方法。具體技術方案是：分別制備標準品溶液和樣品溶液，用HPLC法進行梯度洗脫，同時測定諾尼果汁中車葉草苷酸和去乙酰車葉草苷酸含量。本發明方法簡便、可靠、迅速，靈敏度高，重現性好，可以將諾尼果汁中車葉草苷酸和去乙酰車葉草苷酸與干擾物質很好的分離，并同時測定其含量，對諾尼果汁功效性成分的研究具有重要意義。
【專利說明】HPLC同時測定諾尼果汁中車葉草苷酸和去乙酰車葉草苷 酸含量的方法
【技術領域】
[0001] 本發明涉及一種HPLC同時測定諾尼果汁中車葉草苷酸和去乙酰車葉草苷酸含量 的檢測方法。
【背景技術】
[0002] 諾尼（Noni)，學名海巴戟天(iforiflt/a ci(ri/b/ia Lina )，2010 年 5 月，中國衛生 部將諾尼果漿正式批準為新資源食品。諾尼果汁有廣泛的營養和藥用價值，具有抗腫瘤、抗 氧化、增強免疫力、降血脂和保護心血管等功能，對多種疾病有預防和治療作用。
[0003] 車葉草苷酸和去乙酰車葉草苷酸是環烯醚萜類物質，是諾尼果汁中重要的活性成 分，具有抗腫瘤、抗病毒、抗氧化、抗畸變等活性，與人體健康密切相關，逐漸成為研究熱點。 但目前尚無利用HPLC測定諾尼果汁中車葉草苷酸和去乙酰車葉草苷酸的方法，限制了諾 尼果汁功效性成分的研究。因此，亟需建立一種同時檢測諾尼果汁中車葉草苷酸和去乙酰 車葉草苷酸的高效液相色譜法。
【發明內容】
[0004] 為了解決上述技術問題，本發明提供了一種使用HPLC同時測定諾尼果汁中車葉 草苷酸和去乙酰車葉草苷酸含量的方法，為諾尼果汁的功效研究奠定了基礎。實現本發明 的具體技術方案是：用HPLC同時測定諾尼果汁中車葉草苷酸和去乙酰車葉草苷酸含量，其 特征是： 本發明中混合標準品溶液的制備方法為： 稱取車葉草苷酸對照品5 mg，去乙酰車葉草苷酸對照品25 mg，置于10 mL容量瓶中， 加水稀釋至刻度，搖勻，即得混合對照品儲備液，測定前經〇. 22 y m微孔濾膜過濾。
[0005] 本發明中樣品溶液的制備方法為： 取20 mL諾尼果汁10000 r/m離心5 min,吸取上清液10 mL于100 mL容量瓶中，力口 水稀釋至刻度，搖勻，測定前經0. 22 微孔濾膜過濾。
[0006] 本發明的色譜條件為： 色譜柱為 shim-pack VP-0DS-C18 (250 _X4. 6 mm，5 ilm) ;VWD-3000紫外檢測器；柱 溫為35 °C ;流動相A為0. 1 %磷酸水溶液，流動相B為乙腈；梯度洗脫條件為0-10 min，4 % B ;10-22,15 % B ;22-40 min，4 % B ;流速為 0? 5 mL / min ;檢測波長為 237 nm ;在上述 色譜條件下，取對照品溶液和標準品溶液分別進樣，記錄色譜圖。
[0007] 本發明中所說的諾尼果汁為純諾尼果汁或含諾尼成分的其它產品。
[0008] 本發明采用HPLC法，梯度洗脫，同時測得諾尼果汁中車葉草苷酸和去乙酰車葉草 苷酸含量。結果：車葉草苷酸在濃度為5-50 y g/mL范圍內具有良好線性關系，平均回收率 為99. 02 %，RSD為1.58 %;去乙酰車葉草苷酸在濃度為25-250 iig/mL范圍內具有良好線 性關系，平均回收率為102. 15 %，RSD為2. 40 %。本發明方法簡便、可靠、迅速，靈敏度高， 重現性好，為諾尼果汁的功效研究提供科學依據。
[0009] 四、【專利附圖】
【附圖說明】 圖1為本發明中車葉草苷酸和去乙酰車葉草苷酸混合標準品的色譜圖。
[0010] 圖2為本發明中諾尼果汁樣品溶液的色譜圖。
[0011] 五、【具體實施方式】 下面結合具體實例對本發明作進一步說明，但本發明并不限于以下實施例。
[0012] 實施例1 : 1、 儀器與材料 1.1儀器 Thermo UltiMate 3000型高效液相色譜儀（VWD-3000紫外檢測器，Chromeleon 7色譜 工作站，Thermo Fisher 公司），Shim-pack VP-0DS-C18 (250 mmX4.6 mm，5 U m)色譜柱； minispin 離心機（eppendorf 公司）。
[0013] 1. 2 材料 對照品車葉草苷酸購自成都普菲德生物技術有限公司，去乙酰車葉草苷酸購自北京盛 世康普化工技術研究院，乙腈、磷酸均為色譜純。西沙諾尼果汁由海南諾尼生物工程開發有 限公司生產，產品批次為 20120911、20130618、20131206 和 20140122。
[0014] 方法與結果 2. 1色譜條件的選擇 檢測器：Thermo VWD-3000;檢測波長：237nm;色譜柱：Shim-pack VP-ODS (250X4.6 mm，5 ii m);柱溫：35 °C ;流動相A為0. 1 %磷酸溶液，流動相B為乙腈，進行梯度洗脫，梯 度洗脫程序如表1所示，流速：〇. 5 mL / min，檢測波長為237 nm，柱溫最優為35°C。
[0015] 表1梯度洗脫程序
【權利要求】
1. 一種采用HPLC法檢測車葉草苷酸和去乙酰車葉草苷酸含量的方法，其特征是：按照 如下步驟對諾尼果汁中車葉草苷酸和去乙酰車葉草苷酸同時進行定性和定量分析： (1) 混合標準品溶液制備 稱取車葉草苷酸對照品5 mg，去乙酰車葉草苷酸對照品25 mg，置于10 mL容量瓶中， 加水稀釋至刻度，搖勻，即得混合對照品儲備液； (2) 樣品制備 取20 mL諾尼果汁10000 r/m離心5 min,吸取上清液10 mL于100 mL容量瓶中，力口 水稀釋至刻度，搖勻； (3) 高效液相色譜分離檢測條件 采用C18反相色譜柱，以流動相A磷酸水溶液；流動相B乙腈，采用梯度洗脫，采用紫 外檢測器檢測，柱溫為30 - 40°C，流速為0. 2-1. 2 mL / min ; (4) 樣品定性和定量分析 采用系列混合標準品溶液按照步驟（1)進行配制，按步驟（3)色譜條件進樣；以峰面積 y對質量濃度X進行線性回歸，得到車葉草苷酸和去乙酰車葉草苷酸標準品的回歸方程； 每個樣品按步驟（2)進行前處理后，按步驟（3)色譜條件分別進樣分析，樣品峰與標準品保 留時間比對定性，樣品峰面積代入相對應的標準曲線回歸方程定量。
2. 根據權利要求書1所述的方法其特征在于：所述步驟（3)色譜條件流動相由磷酸水 溶液(流動相A)-乙腈(流動相B)組成，其中流動相A濃度范圍為0. 05-0. 2 %，色譜溫度為 30 - 40°C，流速為0. 2-1.2 mL / min，梯度洗脫程序如下表所不：
〇
3. 根據權利要求書2所述的方法其特征在于：流動相A為磷酸水溶液最佳濃度為0. 1 %，最佳檢測波長為237 nm，最佳柱溫為35 °C，最佳流速為0. 5 mL / min。
4. 根據權利要求1所述的方法其特征在于，所說的制備標準品溶液和樣品溶液用0. 22 ym微孔濾膜過濾,進樣量為5 μ 1,記錄時間為40 min。
5. 根據權利要求1-4所述的方法，其特征在于，所說的諾尼果汁為純諾尼果汁或含諾 尼成分的其它產品。
【文檔編號】G01N30/88GK104374855SQ201410413733
【公開日】2015年2月25日 申請日期:2014年8月21日 優先權日:2014年8月21日
【發明者】程池, 陳建國, 張露, 李金霞, 洪啟恩, 譚望橋 申請人:中國食品發酵工業研究院, 海南諾尼生物工程開發有限公司