一種低聚肽含量快速檢測的方法
【專利摘要】本發明涉及低聚肽技術加工領域，具體的是一種低聚肽含量快速檢測的方法，其特征是利用三氯乙酸對不同分子量大小的多肽鏈的沉淀效果的差異，對低聚肽生產過程中肽的水解程度及低聚肽含量進行快速檢測，從而可以有效的獲得低聚肽。本發明所述方法快捷簡便，檢測過程易于控制，大大縮短了檢測時間，減少了環境污染，降低了檢測成本。可用于低聚肽產品生產控制，適宜于工業化生產中控控制。
【專利說明】一種低聚肽含量快速檢測的方法
[0001]
【技術領域】
[0002] 本發明涉及低聚肽加工【技術領域】，特別涉及一種在低聚肽酶解生產過程中，進行 低聚肽含量快速檢測、控制水解程度的方法。
[0003]
【背景技術】
[0004] 氨基酸是蛋白質的基本構成單位。不同種類的氨基酸，按照特定的順序，構成結構 不同、功能各異的蛋白質。一般認為蛋白質是由51個以上的氨基酸構成。而在生命體中， 還有由2?50個氨基酸構成的物質，科學界將其稱為"肽"。肽是介于氨基酸和蛋白質之 間的物質。氨基酸的分子最小，蛋白質最大，兩個或以上的氨基酸脫水縮合形成若干個肽鍵 從而組成一個肽，多個肽進行多級折疊就組成一個蛋白質分子。通常，將由2?10個氨基 酸構成的稱為低聚肽，將由11?50個氨基酸組成的稱為多肽。在物質構成上，肽與蛋白質 具有同質性，卻具有不同氨基酸和蛋白質的獨特的生理功能，尤其是低聚肽，它具有分子量 小、水溶性好、熱穩定性好、酸穩定性好、直接吸收性、安全性強等特性。可以應用于具有營 養療效的食品及低致敏性食品、保健食品、運動食品、高蛋白食品、焙烤食品、糖果、糕點、冷 飲等。
[0005] 目前低聚肽生產，主要采用蛋白酶水解蛋白方式，定向切割長鏈蛋白質或多肽，直 至形成2?10個氨基酸構成的低聚肽方式生產。但是蛋白酶水解程度不易控制，水解程度 過淺則導致酶解液中殘存大量大分子多肽，如水解程度過深則又會產生大量游離氨基酸。 需后續采用超濾、納濾等方式對酶解液處理，獲得特定分子量的低聚肽，生產周期長，且影 響產品收率及品質。而使用常規的凝膠色譜等方式進行分子量檢測耗時長，無法同步監視 水解程度、在線監控。可見急需一種能夠實時、快速、準確的的方法來測定生產過程中低聚 肽的含量。
【發明內容】
[0006] 本發明的目的在于提供一種低聚肽含量快速檢測的方法，同步控制蛋白液水解程 度，在線監視酶解效果。有效生產低聚肽產品，無需進行后續超濾、納濾操作，縮短了工藝流 程、提高了產品收率，解決了現有檢測方法周期長、影響產品品質等問題。
[0007] 為達到上述目的，本發明采用的技術方案是：一種低聚肽含量的快速檢測方法，其 步驟包括： 一、 酶解液預處理：酶解液過濾后，加三氯乙酸沉淀后離心，得到澄清上清液； 二、 透光率檢測：離心上清液用分光光度計檢測透光率。
[0008] 優選的，步驟一所述的一種低聚肽含量快速檢測的方法，其特征在于步驟（1)所述 的酶解液為正在進行水解的、未滅酶的酶解液，酶解液使用3M中速濾紙過濾得澄清濾液。 過程中使用固形物含量檢測儀檢測酶解液中固形物含量，調節溶液固形物含量在5-15%范 圍內。所用三氯乙酸濃度30%，至溶液中三氯乙酸濃度為10-20%，混勻，處理液常溫條件下， 4000rpm離心lOmin，得到澄清上清液。
[0009] 優選的，步驟二所述的一種低聚肽含量快速檢測的方法，其特征在于步驟（2)所述 的透光率檢測波長為500nm，使用步驟一獲得的未加三氯乙酸處理的澄清過濾液作為參比。 如進行離心后的樣品管底或壁上無肉眼可見沉淀，且使用分光光度計檢測透光率達到85% 以上,則可判定原酶解液清液中的低聚肽含量超過蛋白總量的90%。
[0010] 本發明的有益效果是：使用本發明方法檢測酶解液中的低聚肽含量，具有快捷、簡 單且準確的優點，可用于生產中間環節控制，有效縮短檢測周期，提高生產效率。
【具體實施方式】
[0011] 實施例1 將正在進行水解的酶解液使用3M中速濾紙過濾得澄清濾液。使用固形物含量檢測儀 檢測酶解液中的固形物含量，調節溶液固形物含量為5%。在澄清過濾液中加入30%三氯乙 酸溶液至三氯乙酸終濃度10%，混勻，裝入透明尖底離心管內，常溫、轉數4000 rpm條件下 離心lOmin ;上清液在500 nm條件下進行透光率檢測。
[0012] 實施例2 將正在進行水解的酶解液使用3M中速濾紙過濾得澄清濾液。使用固形物含量檢測儀 檢測酶解液中的固形物含量，調節溶液固形物含量為10%。在澄清過濾液中加入30%三氯乙 酸溶液至三氯乙酸終濃度15%，混勻，裝入透明尖底離心管內，常溫、轉數4000 rpm條件下 離心lOmin,上清液在500 nm條件下進行透光率檢測。
[0013] 實施例3 將正在進行水解的酶解液使用3M中速濾紙過濾得澄清濾液。使用固形物含量檢測儀 檢測酶解液中的固形物含量，調節溶液固形物含量為15%。在澄清過濾液中加入30%三氯乙 酸溶液至三氯乙酸終濃度20%，混勻，裝入透明尖底離心管內，常溫、轉數4000 rpm條件下 離心lOmin ;上清液在500 nm條件下進行透光率檢測。
[0014] 以上所述，僅為本發明的【具體實施方式】，并不局限于此，任何熟悉本【技術領域】的技 術人員在本發明揭露的技術范圍內，可輕易想到變化或替換，都應涵蓋在本發明的保護范 圍之內。
【權利要求】
1. 一種低聚肽含量快速檢測的方法，包括以下步驟： (1) 酶解液預處理，酶解液過濾后，加三氯乙酸沉淀離心； (2) 透光率檢測，離心上清液用分光光度計檢測透光率。
2. 根據權利要求1所述的一種低聚肽含量快速檢測的方法，其特征在于步驟（1)所述 的酶解液為正在進行水解的、未滅酶的酶解液，酶解液使用3M中速濾紙過濾得澄清濾液， 過程中使用固形物含量檢測儀檢測酶解液中固形物含量，調節溶液固形物含量在5-15%范 圍內，所用三氯乙酸濃度30%，至溶液中三氯乙酸濃度為10-20%，混勻，處理液常溫條件下， 4000rpm離心lOmin，得到澄清上清液。
3. 根據權利要求1所述的一種低聚肽含量快速檢測的方法，其特征在于步驟（2)所述 的透光率檢測波長為500nm，使用步驟一獲得的未加三氯乙酸處理的澄清過濾液作為參比， 如進行離心后的樣品管底或壁上無肉眼可見沉淀，且使用分光光度計檢測透光率達到85% 以上,則可判定原酶解液清液中的低聚肽含量超過蛋白總量的90%。
【文檔編號】G01N21/31GK104215590SQ201410410849
【公開日】2014年12月17日 申請日期:2014年8月20日 優先權日:2014年8月20日
【發明者】楊慶利, 金海明, 曹榮軍, 周忠云 申請人:青島貝爾特生物科技有限公司