紙張中溶劑綠7、2,4-二硝基苯酚和對羥基苯甲酸丙酯及其鈉鹽含量的測定方法
【專利摘要】本發明涉及一種紙張中溶劑綠7、2,4-二硝基苯酚和對羥基苯甲酸丙酯及其鈉鹽含量的測定方法，包括樣品溶液的制備，液相色譜分析及測定結果的計算等步驟。經優化之后的檢測方法具有檢測時間短、操作簡便、靈敏度高、回收率高及重復性好等優點，本發明方法的色譜條件使溶劑綠7、2,4-二硝基苯酚和對羥基苯甲酸丙酯的色譜峰與雜質色譜峰分離較好，并且具有較好的相關性，檢出限在0.23~0.40μg/g之間，平均回收率分別為96.4％、88.9％和96.2％，樣品測試結果的平均相對標準偏差分別為2.91%、2.06％和3.08％，說明本法的回收率較高，重復性較好。
【專利說明】紙張中溶劑綠7、2, 4-二硝基苯酚和對羥基苯甲酸丙酯及 其鈉鹽含量的測定方法
【技術領域】
[0001] 本發明涉及紙張中溶劑綠7、2, 4-二硝基苯酚和對羥基苯甲酸丙酯及其鈉鹽含量 的測定方法，屬于紙張材料的理化檢驗【技術領域】。
【背景技術】
[0002] 溶劑綠7,中文別名：8_羥基-1,3, 6-芘三磺酸三鈉；8-羥基芘-1,3, 6-三磺酸 三鈉鹽；英文名稱：Solvent Green 7。主要用于油漆、塑料制品等的著色，還可以用于突 光筆，工業鍋爐的示蹤劑等。屬于刺激性物質，對眼睛、呼吸道和皮膚有刺激作用。我國 GB7916-87《化妝品衛生標準》中規定了化妝品成分中暫用著色劑的種類、允許的使用范圍 及限制條件，其中就規定溶劑綠7為暫用著色劑。
[0003] 2, 4-二硝基苯酚（2, 4-Dinitrophenol，簡稱 DNP)，分子式 C6H4N205, CAS 號 51-28-5。常溫下為黃色固態結晶，具有香甜的發霉氣味。緩慢加熱時升華，并有揮發性。 DNP溶于乙酸乙酯、丙酮、氯仿、吡啶、四氯化碳、甲苯、乙醇、苯和堿的水溶液，微溶于冷水。 它的鈉鹽溶于水。吸入、吞入或接觸皮膚時有毒害，并有蓄積性危害。是一種細胞代謝毒素。 DNP能夠通過運送質子通過線粒體膜使氧化磷酸化解偶聯化，使得能量被大量消耗卻不被 用來制造 ATP。DNP目前主要用于科學研究和工業生產。有時被用來制造染料，合成其他有 機物，以及木材的防腐。同時還被用作顯影劑、炸藥和殺蟲劑的中間體。DNP被美國國家環 境保護局認為是一種較嚴重的環境污染物。它可以通過機動車廢氣、工業垃圾燃燒以及空 氣中氮氣和其他化學物質反應進入大氣。DNP主要在土壤中由微生物降解。
[0004] 對羥基苯甲酸丙酯又名尼泊金丙酯，對羥基安息香酸丙酯，常以其鈉鹽的形式存 在。無色小結晶或白色粉末。幾乎不溶于冷水。無臭、稍有澀味。由對羥基苯甲酸與正丙 醇在硫酸存在下酯化，然后經中和、水洗、甩干、精制為成品。主要用作食品、化妝品、飼料等 的防腐劑。與對羥基苯甲酸乙酯合用可提高防腐能力和溶解性。對霉菌、酵母與細菌有廣 泛的抗菌作用，其抗菌作用大于尼泊金乙酯。曾用于醬油、醬菜生產中的食品防腐劑。化妝 品防腐劑。屬酚類防腐劑。添加量0. 1%-1.0%。通常與尼泊金丁酯混合使用，具有良好的加 成性和協同性。吸入、攝入或經皮膚吸收對羥基苯甲酸丙酯及其鈉鹽對身體有害。對眼、粘 膜和上呼吸道和皮膚有刺激作用。
[0005] 目前我國暫無紙制品中溶劑綠7、2, 4-二硝基苯酚和對羥基苯甲酸丙酯及其鈉鹽 的國標檢測方法，關于單獨測定其它樣品中這三種物質的檢測方法也較為缺少，分別詳述 如下。
[0006] 文獻報道的C. I.溶劑綠7的分析方法主要有HPLC法。孫小穎等利用高效液相色 譜紫外法測定了化妝品中的9種水溶性著色劑，不同種類的化妝品采用不同的樣品前處理 方法提取后，用Diamonsil C18色譜柱分離，以乙腈-磷酸二氫鉀緩沖溶液（pH6)為流動相 進行梯度洗脫，檢測波長為240nm，15min內可對9種目標物同時進行檢測，且各化合物都達 到基線分離。經測定，該方法的平均回收率（n=9)為85. 33%?100. 2%，相對標準偏差（RSD) 為3. 68%?8. 20%，檢出限為0. 01?0. lmg/L。方法簡單、快速，能有效地提取、分離和測 定化妝品中9種水溶性著色劑。將該方法用于實際化妝品的檢測，結果令人滿意。
[0007] 2, 4-二硝基苯酚文獻報道的分析方法主要也是HPLC法。劉燕利用高效液相色譜 法建立了工業廢水中的2, 6-二硝基苯酚，2, 4-二硝基苯酚以及苦味酸同時測定的分析方 法，實驗證明該方法簡單快速、準確實用。
[0008] 對羥基苯甲酸丙酯及其鈉鹽是食品中常用的防腐劑成分之一。防腐劑的分析檢 測在國內外受到高度關注，相關的檢測方法也很多，其中得到廣泛應用的是高效液相色譜 法和氣相色譜法。趙孔祥等建立了乙腈超聲提取、高效液相色譜二極管陣列檢測快速測 定化妝品中的氫醌、水楊酸、苯酚、苯氧乙醇、對羥基苯甲酸甲酯、對羥基苯甲酸乙酯、對羥 基苯甲酸丙酯，對羥基苯甲酸丁酯、雙氯酚、三氯生10種限用物質含量的分析方法。對 提取方法、液相色譜條件和檢測條件進行了優化，10種限用物質標準溶液的線性范圍為 0. 01-0. lg/L，50、100、200mg/kg 3個加標水平的回收率為80%?113%，相對標準偏差 (RSD，n=7)為2. 2%-10. 0%，定量下限（L0Q)為10-50mg/kg。該方法簡便、高效、靈敏、準確， 可滿足現有化妝品中相關限用物質的檢測要求。劉奮等建立化妝品中常用防腐劑對羥基苯 甲酸酯類、苯甲酸、苯甲醇、卡松的測定方法。采用高效液相色譜法，以乙酸銨（0.02 mol/ L)-甲醇為流動相，采用梯度淋洗，同時測定化妝品中7種常用防腐劑。結果各防腐劑在 10?100μ g / mL范圍內呈良好線性關系（r) 0. 999)，平均回收率為91. 5%-95. 5%，相對 標準偏差為1.3%-2. 5%。該法簡便，快速，靈敏，準確，可用于化妝品中防腐劑的測定。氣相 色譜法也是用來檢測對羥基苯甲酸酯類的常用方法，其中李英等采用超聲抽提法對化妝品 中的苯甲醇、3甲基4異丙基苯酚、對羥基苯甲酸丁酯和2芐基4氯酚等18種防腐劑進行 了氣相色譜-質譜法（GC-MS)測定的研究。建立了一種簡單、快速、準確測定化妝品中各種 防腐劑的測定方法。進行了樣品提取溶劑和超聲提取時間選擇以及線性、回收率、精密度試 驗。結果表明，該方法能夠有效地提取化妝品（口紅和香波）中的18種防腐劑，并可對 其進行GC-MS分離和鑒定。18種防腐劑的平均回收率為91. 66%?100. 6%(n=7)，相對標準 偏差為 〇· 46% ?6· 23%(n=7)，最低檢測限為 0· 05 ?0· 5 mg/L。《GB/T 5009. 31-2003 食品 中對羥基苯甲酸酯類的測定》中規定試樣酸化后，對羥基苯甲酸酯類用乙醚提取濃縮后，用 具氫火焰離子化檢測器的氣相色譜儀進行分離測定，外標法定量。
【發明內容】
[0009] 本發明的目的旨在克服現有技術缺陷，提供紙張中溶劑綠7、2, 4-二硝基苯酚和 對羥基苯甲酸丙酯及其鈉鹽含量的測定方法，本發明在梳理種類龐雜檢測方法的基礎上， 考察了紙張的萃取條件，優化了色譜分離的條件，采用高效液相色譜紫外檢測器建立了紙 張中溶劑綠7、2, 4-二硝基苯酚和對羥基苯甲酸丙酯及其鈉鹽的檢測方法，為煙用紙張中 有害物質的測定提供相關技術支持。
[0010] 本發明的技術方案如下：本發明的紙張中溶劑綠7、2, 4-二硝基苯酚和對羥基苯 甲酸丙酯及其鈉鹽含量的測定方法，包括以下步驟： (1)標準溶液的配制：分別配制具有濃度梯度的溶劑綠7、2, 4-二硝基苯酚和對羥基苯 甲酸丙酯的標準工作溶液；具體配制方法如下：分別準確稱取l〇〇mg(精確至0. OOOlg)的 溶劑綠7、2, 4-二硝基苯酚和對羥基苯甲酸丙酯，用甲醇溶解，轉移至100mL容量瓶中，定容 至刻度并搖勻，作為一級母液；移取一級母液10 mL至100 mL容量瓶中，甲醇定容，作為二 級母液；分別準確移取100 uL、500 yL、1000 yL、2500 yL、5000 yL二級母液至10mL 容量瓶中，用甲醇定容至刻度，得到系列標準工作溶液，保存于2°C -6°C，現配現用。
[0011] (2)樣品溶液的制備：使用0. 5 m〇L/L的乙酸銨水溶液，并用乙酸調制pH=5,與甲 醇配制成體積比為1:1的溶液為萃取溶液；選取紙張樣品，裁剪成l-2cm2的碎片，稱取1 g 樣品碎片，精確至0.1 mg，將樣品碎片置于50 mL具塞三角瓶中，準確加入30 mL萃取溶液， 50 °C萃取lh,靜置放置室溫，用0. 45 μ m有機濾膜過濾于色譜小瓶中上樣分析； 所述紙張樣品為接裝紙、內襯紙、條與盒包裝紙中的任意一種，各紙張樣品的具體裁剪 方式如下：接裝紙的裁剪方式按照YC 171-2009的規定進行，即準確裁切長200 mm，寬40 mm的接裝紙樣品（應包含一個單邊）；內襯紙的裁剪方式按照YC 264-2008的規定進行，即 裁剪面積約170cm2 (即相當于普通卷煙軟盒包裝所采用的內襯紙面積);卷煙條與盒包裝紙 的裁剪方式按照YC/T 207-2006的規定進行，即對硬盒包裝紙，參照印刷壓痕準確裁取主 包裝面，面積為22. 0 cm X 5. 5 cm，對軟盒包裝紙，取一張軟盒包裝紙，面積為15. 5 cm X 10. 0 cm，對條包裝紙，在包裝正面中央區域，準確裁取22. 0 cm X 5. 5 cm的樣品。
[0012] (3)液相色譜分析：利用液相色譜儀分別對標準溶液和樣品溶液進行檢測分析； 色譜分析條件為色譜柱采用XBridge Amide液相色譜柱（4. 6 X 250mm，3. 5μηι粒徑)， 色譜柱溫度為30 °C，進樣量為5 μ L，流速為0.6 mL/min;檢測波長：溶劑綠7 :246 nm; 2,4-二硝基苯酚：362腹，對羥基苯甲酸丙酯：257腹，流動相4乙酸銨水溶液（？!1=5)，8為 甲醇，采用梯度洗脫程序，OminA 為 80%，0-5minA :80%-50%，5-10minA :50%-10%，10-13minA : 10%-80%，13-15minA :80%。以保留時間定性，峰面積外標法定量。
[0013] (4)紙張中溶劑綠7、2, 4-二硝基苯酚和對羥基苯甲酸丙酯及其鈉鹽含量的計算。 具體計算方法如下：首先以標準溶液所檢測出的目標物的色譜峰面積對其相應濃度進行回 歸分析，得到標準曲線；然后將樣品溶液檢出的目標物的色譜峰面積，代入標準曲線，即得 到樣品溶液中的溶劑綠7、2, 4-二硝基苯酚和對羥基苯甲酸丙酯及其鈉鹽的濃度，由此即 可計算出紙張中溶劑綠7、2, 4-二硝基苯酚和對羥基苯甲酸丙酯及其鈉鹽的含量。
[0014] 本發明的檢測方法對樣品的處理方法和色譜條件進行了優化，達到了以下效果： (1) 檢測時間短：采用本發明測定紙張中溶劑綠7、2, 4-二硝基苯酚和對羥基苯甲酸丙 酯及其鈉鹽含量周期僅需要15分鐘； (2) 本發明具有操作簡便、靈敏度高、回收率高及重復性好的優點：本發明方法的色譜 條件使紙張中溶劑綠7、2, 4-二硝基苯酚和對羥基苯甲酸丙酯色譜峰與雜質色譜峰分離較 好，并且具有較好的相關性，檢出限在0. 23、. 40 μ g/g之間，平均回收率分別為96. 4%、 88. 9%和96. 2%，樣品測試結果的平均相對標準偏差分別為2. 91%、2. 06%和3. 08%，說明 本法的回收率較高,重復性較好。
[0015]
【專利附圖】
【附圖說明】
[0016] 圖1為本發明的測定方法的流程圖； 圖2為紙張中溶劑綠7、2, 4-二硝基苯酚和對羥基苯甲酸丙酯的標準曲線線性方程及 線性回歸系數坐標圖； 圖3為標準溶液的色譜圖； 圖4為樣品溶液的色譜圖。
[0017]
【具體實施方式】
[0018] 本發明以下結合實施例（附圖）做進一步描述： 實施例1 本實施例對紙張中溶劑綠7、2, 4-二硝基苯酚和對羥基苯甲酸丙酯及其鈉鹽含量的測 定方法如下(所述檢測方法的流程圖如圖1所示） (1)標準溶液的配制：分別準確稱取100mg(精確至0. OOOlg)的溶劑綠7、2, 4-二硝基 苯酚和對羥基苯甲酸丙酯，用甲醇溶解，轉移至100mL容量瓶中，定容至刻度并搖勻，作為 一級母液；移取一級母液10 mL至100 mL容量瓶中，甲醇定容，作為二級母液；分別準確移 取100 yL、500 yL、1000 yL、2500 yL、5000 yL二級母液至10mL容量瓶中，用甲醇定 容至刻度，得到系列標準工作溶液，保存于2°C -6°C，現配現用。
[0019] (2)樣品溶液的制備：選用煙用接裝紙為試樣進行裁剪，以剪刀剪成（1-2) cm2的 碎片，混合均勻并置于天平上稱量，稱取lg樣品，精確至0.1 mg，將碎片置于50 mL具塞三 角瓶中，準確加入30 mL萃取溶液，50°C恒溫水浴60 min，用0. 45 μ m有機濾膜過濾于色譜 小瓶中通過高效液相色譜分析。
[0020] (3)色譜分析：所述的色譜分析條件為色譜柱采用XBridge Amide液相色譜柱 (4. 6 X 250mm，3. 5μπι粒徑)，色譜柱溫度為30 °C，進樣量為5 yL，流速為0. 6mL/min; 檢測波長：溶劑綠7 :246 nm ;2, 4-二硝基苯酚：362nm，對羥基苯甲酸丙酯：257nm，流動相： A乙酸銨水溶液（pH=5)，B為甲醇，采用梯度洗脫程序，OminA為80%，0-5minA :80%-50%， 5-10minA :50%-10%，10-13minA :10%-80%，13-15minA :80%。以保留時間定性，峰面積外標法 定量，總洗脫時間為15min。標準溶液的色譜分析結果如圖3所示；樣品溶液的色譜分析結 果如圖4所示； (4)紙張中溶劑綠7、2, 4-二硝基苯酚和對羥基苯甲酸丙酯及其鈉鹽含量的計算： 首先以標準溶液所檢測出的目標物的色譜峰面積對其相應濃度進行回歸分析，得到標 準曲線(如圖2所示）；與標準曲線相對應的回歸方程、相關系數等數據如表1所示。
[0021] 表1紙張中溶劑綠7、2, 4-二硝基苯酚和對羥基苯甲酸丙酯的標準曲線和檢出限
【權利要求】
1. 一種紙張中溶劑綠7、2, 4-二硝基苯酚和對羥基苯甲酸丙酯及其鈉鹽含量的測定方 法，其特征在于：包括以下步驟： (1) 標準溶液的配制：配制具有濃度梯度的溶劑綠7、2, 4-二硝基苯酚和對羥基苯甲酸 丙酯的混合標準工作溶液； (2) 樣品溶液的制備：使用0. 5 m〇L/L的乙酸銨水溶液，并用乙酸調制pH=5,與甲醇配 制成體積比為1:1的溶液為萃取溶液；選取紙張樣品，裁剪成l-2cm 2碎片，稱取1 g樣品碎 片，精確至0.1 mg，將樣品碎片置于50 mL具塞三角瓶中，準確加入30 mL萃取溶液，50 °C 萃取lh，靜置放置室溫，用0. 45 μ m有機濾膜過濾于色譜小瓶中上樣分析； (3) 液相色譜分析：利用液相色譜儀分別對標準溶液和樣品溶液進行檢測分析；色 譜分析條件為色譜柱采用XBridge Amide液相色譜柱，規格4. 6 X 250mm，3. 5 μ m粒徑， 色譜柱溫度為301：，進樣量為5 1^，流速為0.6 111171^11;檢測波長：溶劑綠7:246 11111; 2, 4-二硝基苯酚：362nm，對羥基苯甲酸丙酯：257nm，流動相：A乙酸銨水溶液（pH=5)，B為 甲醇，采用梯度洗脫程序，OminA 為 80%，0-5minA :80%-50%，5-10minA :50%-10%，10-13minA : 10%-80%，13-15minA :80%，以保留時間定性，峰面積外標法定量； (4) 紙張中溶劑綠7、2, 4-二硝基苯酚和對羥基苯甲酸丙酯及其鈉鹽含量的計算。
2. 根據權利要求1所述的紙張中溶劑綠7、2, 4-二硝基苯酚和對羥基苯甲酸丙酯及其 鈉鹽含量的測定方法，其特征在于：所述標準溶液的配制方法如下：分別準確稱取l〇〇mg的 溶劑綠7、2, 4-二硝基苯酚和對羥基苯甲酸丙酯，用甲醇溶解，轉移至100mL容量瓶中，定容 至刻度并搖勻，作為一級母液；移取一級母液10 mL至100 mL容量瓶中，甲醇定容，作為二 級母液；分別準確移取100 uL、500 yL、1000 yL、2500 yL、5000 yL二級母液至10mL 容量瓶中，用甲醇定容至刻度，得到系列濃度標準工作溶液。
3. 根據權利要求1所述的紙張中溶劑綠7、2, 4-二硝基苯酚和對羥基苯甲酸丙酯及其 鈉鹽含量的測定方法，其特征在于：所述紙張樣品為接裝紙、內襯紙、條與盒包裝紙中的任 意一種，各紙張樣品的具體裁剪方式如下：接裝紙的裁剪方式按照YC 171-2009的規定進 行，即準確裁切長200 mm，寬40 mm的接裝紙樣品，應包含一個單邊；內襯紙的裁剪方式按 照YC 264-2008的規定進行，即裁剪面積約170cm2即相當于普通卷煙軟盒包裝所采用的內 襯紙面積；條與盒包裝紙的裁剪方式按照YC/T 207-2006的規定進行，即對硬盒包裝紙，參 照印刷壓痕準確裁取主包裝面，面積為22.0 cm X 5. 5 cm，對軟盒包裝紙，取一張軟盒包 裝紙，面積為15. 5 cm X 10. 0 cm，對條包裝紙，在包裝正面中央區域，準確裁取22.0 cm X 5. 5 cm的樣品。
4. 根據權利要求1所述的紙張中溶劑綠7、2, 4-二硝基苯酚和對羥基苯甲酸丙酯及其 鈉鹽含量的測定方法，其特征在于：所述的紙張中溶劑綠7、2, 4-二硝基苯酚和對羥基苯甲 酸丙酯及其鈉鹽含量的計算方法如下：首先以標準溶液所檢測出的目標物的色譜峰面積對 其相應濃度進行回歸分析，得到標準曲線；然后將樣品溶液檢出的目標物的色譜峰面積，代 入標準曲線，即得到樣品溶液中溶劑綠7、2, 4-二硝基苯酚和對羥基苯甲酸丙酯及其鈉鹽 的濃度，由此即可計算出紙張中溶劑綠7、2, 4-二硝基苯酚和對羥基苯甲酸丙酯及其鈉鹽 的含量。
【文檔編號】G01N30/88GK104122362SQ201410380094
【公開日】2014年10月29日 申請日期:2014年7月31日 優先權日:2014年7月31日
【發明者】張洪非, 楊飛, 邊照陽, 唐綱嶺, 劉珊珊, 范子彥, 李中皓, 王穎, 張艷革 申請人:國家煙草質量監督檢驗中心