柑桔中痕量農藥殘留的表面增強拉曼光譜快速檢測方法
【專利摘要】本發明柑桔中痕量農藥殘留的表面增強拉曼光譜快速檢測方法，屬于農藥快速檢測【技術領域】。采用乙腈、無水硫酸鎂和氯化鈉按一定比例混合以盡可能地提取柑桔中的農藥成分，再由無水硫酸鎂、N-丙基乙二胺、C18和石墨化碳按一定比例混合后，去除萃取液中有機酸、色素、膠質和纖維素等熒光物質的影響，從而大大提高了表面增強拉曼光譜用于柑桔中農藥殘留的檢測精度，達到痕量農藥殘留快速檢測的目的，使該方法基本達到國家規定的檢測限要求。本發明的方法對柑桔中痕量農藥殘留進行檢測，待測樣品前處理簡單，檢測速度快，檢測成本低，方法的準確度和精確度高，能快速準確地定性定量分析柑桔樣品中的痕量農藥殘留，可用于現場大規模樣品檢測。
【專利說明】
【技術領域】
[0001] 本發明涉及柑桔中痕量農藥殘留的快速篩查方法領域，特別是涉及柑桔中痕量農 藥殘留的表面增強拉曼光譜快速篩查方法，屬于果蔬農藥快速檢測【技術領域】。 柑桔中痕量農藥殘留的表面增強拉曼光譜快速檢測方法
【背景技術】
[0002] 柑桔內含有豐富的黃酮類化合物、類胡蘿卜素、維生素等營養物質，具有提高機體 免疫力、抗氧化、抗衰老、降血糖等作用。柑桔是我國南方第一大水果，也是世界第一大水 果，在世界農業經濟中占據十分重要的位置。目前，農藥防治仍是最方便、最有效、最經濟的 柑桔病蟲草害防治方法，而農藥的不規范使用導致柑桔中存在嚴重的農藥超標現象。
[0003] 目前，柑桔中農藥殘留檢測方法主要有氣相色譜法、氣相色譜質譜聯用法、液相色 譜法、液相色譜質譜聯用法、酶聯免疫法、生物傳感器法等，前4種方法檢測時間長、檢測費 用高，酶聯免疫法、生物傳感器法具有操作簡便、快速等特點，但也存在一些缺陷，如酶抑制 法容易出現假陽性和假陰性結果，生物傳感器法也存在結果的穩定性差、精密度低和使用 壽命短等問題。
[0004] 拉曼光譜是一種分子散射光譜，攜帶的是分子結構信息，每一種物質都有其對應 的"指紋"信息，據此可對物質的結構和成分進行表征，已廣泛用于分子結構分析和分子 鑒別，具有檢測速度快、分辨率高、受水干擾小等優點。而拉曼散射強度很弱，靈敏度低， 有時會淹沒于分子的突光信號中。但采用表面增強拉曼散射（Surface Enhanced Raman Scattering，SERS)等增強技術使其檢測靈敏度能提高4-10個數量級，在單個分子探測、痕 量物質檢測方面具有較大的應用潛力。近年來，研究者們將表面增強拉曼光譜技術應用于 食品、農產品中農藥殘留檢測中。如申請號201110229459. 5、名稱為"一種蔬菜中甲胺磷的 表面增強拉曼光譜快速篩查方法"的專利申請，采用極性溶劑提取蔬菜中的甲胺磷農藥，以 銀溶膠為增強基底，繪制以甲胺磷濃度為橫坐標，特征峰峰高為縱坐標的標準曲線，建立了 蔬菜中甲胺膦農藥殘留的快速篩查方法。申請號201310428126. 4、名稱為"一種水果農藥 殘留的表面增強拉曼光譜檢測方法"的專利申請，采用丙酮為溶劑提取果皮中的農藥，利用 Fe304和C18吸附劑來吸附提取液中的農藥，采用丙酮、乙酸乙酯漂洗Fe 304和C18吸附劑后， 再用二氯甲烷從吸附劑Fe30 4和C18中洗滌出農藥，用于拉曼光譜檢測。李永玉（食品安全 質量檢測學報，2012年第6期，P672-675)公開了利用激光顯微拉曼光譜技術無損檢測蘋果 表面敵百蟲農藥殘留方法，該方法檢測限為4800mg/kg。劉文涵（光譜實驗室，2012年第4 期，P2059-2062)公開了利用激光拉曼光譜技術檢測蔬菜紅辣椒表面的甲基毒死蜱。劉燕 德（中國農機化學報，2014年第1期，P88-91)公開了利用共焦顯微拉曼光譜技術分析臍橙 表皮的樂果農藥殘留，建立了臍橙表皮樂果農藥殘留的預測模型。國家標準規定，農產品中 農藥殘留最低檢測限達到mg/kg級甚至達到μ g/kg級。表面增強拉曼光譜檢測技術理論 上能達到單分子檢測，但柑桔類等水果中含有大量有機酸、色素、膠質和纖維素等大分子物 質，這些物質容易產生熒光，且不同農產品基質成分不同，對農藥分子的SERS檢測產生的 干擾也不同；另外，農產品中使用的農藥種類較多，拉曼增強效應差異較大，導致SERS方法 檢測農產品中痕量農藥殘留的精密度和重現性較差。上述公開的方法使用表面增強拉曼光 譜技術能達到對水果中農藥分子信號增強的目的，但并未去除基質物質的影響，方法的檢 測限有待進一步提高，方法的準確性、穩定性較差，不能達到水果中痕量農藥殘留快速檢測 的目的。另外，上述公開的水果中農藥殘留檢測方法的精密度和重現性也未進一步驗證。
【發明內容】
[0005] 本發明的目的是為了克服桔柑類等水果中有機酸、色素、膠質等基質對水果中痕 量農藥殘留的表面增強拉曼光譜檢測的影響，提供一種柑桔類農產品中痕量農藥殘留的表 面增強拉曼光譜快速檢測方法，以提高柑桔類農產品中農藥殘留的檢測限。
[0006] 為達到上述目的，本發明柑桔中痕量農藥殘留的表面增強拉曼光譜快速檢測方 法，按照下述步驟進行：
[0007] (1)銀納米或金納米增強基底的制備：采用檸檬酸三鈉加熱還原法制備得到。
[0008] (2)建立各種農藥標準品的表面增強拉曼譜圖，并對其譜峰進行歸屬和解析。
[0009] (3)待測柑桔樣品經搗碎后，萃取出樣品溶液，萃取液為黃色。
[0010] (4)采用無水硫酸鎂、N-丙基乙二胺、C18和石墨化碳對上述萃取液進行凈化，去除 萃取液中有機酸、色素等熒光物質對拉曼檢測效果的影響。萃取液經凈化后，由黃色變成無 色。凈化后的溶液過0. 22 μ m有機濾膜。
[0011] (5)取步驟（4)的20 μ L待測過濾液、步驟（1)制備的500 μ L增強基底溶液和 100 μ L氯化鈉溶液（質量濃度為1 % )混合均勻，用于拉曼光譜檢測。
[0012] (6)以化學方法檢測柑桔中不含農藥殘留的柑桔為空白樣品，空白樣品經搗碎后， 由步驟（3)提取和步驟（4)凈化，配制以空白柑桔提取液為基質的不同濃度的農藥標準溶 液，過0. 22 μ m有機濾膜。取20 μ L待測過濾液、步驟⑴制備的500 μ L增強基底溶液和 100 μ L氯化鈉溶液（質量濃度為1 % )混合均勻，用于拉曼光譜檢測。
[0013] (7)將步驟（5)所得的待測試樣的SERS譜圖與步驟（2)所歸屬的農藥拉曼譜峰進 行對比，便可確定待測試樣中是否含有該種農藥，即達到對待測柑桔試樣中是否含有農藥 殘留定性判別的目的。
[0014] (8)將步驟（6)所測得的待測柑桔試樣的SERS譜圖與步驟（2)所歸屬的農藥拉曼 譜峰進行對比，選擇拉曼峰強度較高的農藥特征峰用于柑桔中農藥殘留的定量分析。以農 藥濃度為橫坐標，特征峰的峰強度為縱坐標繪制標準曲線，用于柑桔樣品中農藥殘留的定 量分析。
[0015] 其中步驟⑴銀納米或金納米增強基底的制備：銀納米增強基底采用檸檬酸三 鈉加熱還原法制備得到，按照下述步驟進行：將一定濃度的硝酸銀溶液（36mg硝酸銀溶于 200mL超純水）倒入燒瓶中，放在恒溫磁力攪拌器上，高溫迅速加熱到沸騰，在2分鐘內逐步 滴入濃度為1 %的檸檬酸三鈉溶液（60mg檸檬酸三鈉溶于6mL超純水），同時以200r/min 的轉速攪拌，此時溶液慢慢由透明變淡棕色，反應25min后得到灰綠色液體。待室溫冷卻 后，將上述適量銀膠溶液倒入離心管中，離心后倒掉少量上清液，再往離心管中加入適量超 純水，用超聲振蕩混勻，銀膠經多次提純后，避光保存。
[0016] 金納米增強基底采用檸檬酸三鈉加熱還原法制備得到，按照下述步驟進行：將一 定濃度的高氯金酸溶液（l〇mg高氯金酸溶于100mL超純水中）倒入三口燒瓶中，放在恒溫 磁力攪拌器上，溫度控制在120°C恒定加熱至沸騰后，迅速加入一定濃度的檸檬酸三鈉溶液 (20mg朽1檬酸三鈉溶于4mL超純水），同時以100r/min的轉速快速攪拌。制備的金溶膠顏 色為酒紅色。待溶液冷卻后，避光保存。
[0017] 其中步驟（2)建立各種農藥標準品的表面增強拉曼譜圖，并對其進行譜峰歸屬和 解析，按照下述步驟進行：稱取20mg農藥標準品，放于200mL的容量瓶中，用有機溶劑定容 到刻度，用超聲振蕩溶解，制成濃度為l〇〇mg/L的標準品母液。將母液稀釋成一定濃度的標 準溶液，取稀釋標準溶液20 μ L、步驟（1)制備的500 μ L增強基底溶液和100 μ L氯化鈉溶 液（質量濃度為1% )混合均勻，用于拉曼光譜檢測。參照相關文獻，對農藥分子的官能團 特征振動頻率進行譜峰歸屬和解析，得到各農藥分子的特征譜峰，這些特征譜峰作為柑桔 中該農藥殘留的定性定量判別依據。
[0018] 所述步驟（3)的萃取方法為：待測柑桔樣品經搗碎后，稱取10g搗碎樣品放于 50mL離心管中，向離心管中依次加入10mL乙腈、4g無水硫酸鎂和lg氯化鈉，搖勻后在渦旋 混合器上以400r/min的轉速渦旋混合2min，再將此離心管放入離心機中，以4200r/min的 轉速離心5min，此時上清液為黃色。
[0019] 所述步驟⑷的凈化方法為：在15mL離心管中，分別加入600mg無水硫酸鎂、60mg N-丙基乙二胺、60mg (318和2〇11^石墨化碳，取步驟⑶的4mL萃取液加入此離心管中，搖勻 后在400r/min的潤旋混合器上混合2min后，再將此離心管放入離心機以4200r/min的轉 速離心5min，得到無色上清液。
[0020] 本發明采用上述技術方案后得到以下技術效果：
[0021] 1、柑桔類等水果中含有大量有機酸、色素、膠質和纖維素等大分子物質，這些物質 容易產生熒光，對農藥的拉曼光譜影響非常大。本發明采用乙腈、無水硫酸鎂和氯化鈉按一 定比例混合以盡可能地提取柑桔中的農藥成分，再由無水硫酸鎂、N-丙基乙二胺、C 18和石 墨化碳按一定比例混合后，去除萃取液中有機酸、色素、膠質和纖維素等熒光物質的影響， 從而大大提高了表面增強拉曼光譜用于柑桔中農藥殘留的檢測精度，達到痕量農藥殘留快 速檢測的目的，使該方法基本達到國家規定的檢測限要求。
[0022] 2、采用本發明公開的柑桔中痕量農藥殘留表面增強拉曼光譜檢測方法對柑桔中 痕量農藥殘留進行檢測，待測樣品前處理簡單，檢測速度快，檢測成本低，方法的準確度和 精確度高，能快速準確地定性定量分析柑桔樣品中的痕量農藥殘留，可用于現場大規模樣 品檢測。
[0023] 3、本發明的結果與化學測定方法具有很好的一致性，有效避免了化學方法檢測柑 桔中農藥殘留所存在的缺陷，可為柑桔中痕量農藥殘留的智能化檢測提供技術支持。
【專利附圖】
【附圖說明】
[0024] 以下結合附圖和【具體實施方式】對本發明作進一步詳細說明。
[0025] 圖1是三唑磷農藥標準溶液的表面增強拉曼光譜圖；
[0026] 圖2是以臍橙果肉提取液為基質的不同濃度三唑磷溶液表面增強拉曼譜圖；
[0027] 圖3是采用無水硫酸鎂、N-丙基乙二胺、C18和石墨化碳對臍橙果肉萃取液凈化前 后的表面增強拉曼譜圖；
[0028] 圖4是建立的臍橙果肉中三唑磷農藥殘留定量分析的標準曲線圖，圖中橫坐標為 三唑磷濃度，縱坐標為以三唑磷特征譜峰1407CHT1處的峰強度與乙腈在2257CHT1特征峰強 度的比值；
[0029] 圖5是以臍橙果皮提取液為基質的不同濃度三唑磷溶液表面增強拉曼譜圖；
[0030] 圖6是采用無水硫酸鎂、N-丙基乙二胺、C18和石墨化碳對臍橙果皮萃取液凈化前 后的表面增強拉曼譜圖；
[0031] 圖7是建立的臍橙果皮中三唑磷農藥殘留定量分析的標準曲線圖，圖中橫坐標為 三唑磷濃度，縱坐標為977CHT 1處的峰強度；
[0032] 圖8是噻菌靈農藥標準溶液的表面增強拉曼光譜圖；
[0033] 圖9是以臍橙果肉提取液為基質的不同濃度的噻菌靈溶液表面增強拉曼譜圖；
[0034] 圖10是建立的噻菌靈標準溶液的定量分析標準曲線圖，圖中橫坐標為噻菌靈濃 度，縱坐標為lOlOcnT 1處的峰強度。
【具體實施方式】
[0035] 下面結合具體實施例對本發明做進一步詳細說明，但本發明并不僅僅局限于下述 實施例。
[0036] 實施例1 :臍橙果肉中三唑磷農藥殘留的表面增強拉曼光譜快速檢測
[0037] (1)制備銀納米增強基底：將一定濃度的硝酸銀溶液（36mg硝酸銀溶于200mL超 純水）倒入燒瓶中，放在恒溫磁力攪拌器上，高溫迅速加熱到沸騰，在2分鐘內逐步滴入濃 度為1 %的檸檬酸三鈉溶液（60mg檸檬酸三鈉溶于6mL超純水），同時以200r/min的轉速 攪拌，此時溶液慢慢由透明變淡棕色，反應25min后得到灰綠色液體。待室溫冷卻后，將上 述適量銀膠溶液倒入離心管中，離心后倒掉少量上清液，再往離心管中加入適量超純水，用 超聲振蕩混勻，銀膠經多次提純后，避光保存。
[0038] (2)選擇激發光源波長為785nm的拉曼光譜儀，功率為200mW，光譜掃描范圍 400?2000CHT 1，分辨率為4CHT1，積分時間為10s，積分2次求平均。稱取20mg三唑磷農藥 標準品，放于200mL的容量瓶中，用乙腈有機溶劑定容到刻度，用超聲振蕩溶解，制成濃度 為100mg/L的標準品母液，將母液稀釋成濃度為20mg/L三唑磷標準溶液。取稀釋濃度為 20mg/L三唑磷標準溶液20 μ L、步驟⑴制備的500 μ L增強基底溶液和100 μ L氯化鈉溶液 (質量濃度為1% )混合均勻，用于拉曼光譜檢測，得到三唑磷標準溶液的表面增強拉曼光 譜，如圖1所示。圖中611、977、1000、1330、1407和1595〇^ 1處拉曼信號明顯，其中1407〇^1 處強度最高，主要由三唑磷結構中三唑環上C-N伸縮振動引起，另外還伴隨有-CH3/CH2/CH 彎曲振動；977、1000和1330〇^1峰強次之，977〇^1為(^4和苯環的彎曲振動，1000〇^ 1由 苯環的呼吸振動引起，1330CHT1歸屬于C-N伸縮振動；611CHT1處的峰強較弱，主要由C-0-P 彎曲振動引起，伴有整個骨架的振動；1595CHT1歸屬于苯環上C = C伸縮振動。這些特征峰 可作為三唑磷農藥殘留的定性定量判別依據。
[0039] (3)待測臍橙果肉樣品經搗碎后，稱取10g搗碎果肉放于50mL離心管，向離心管中 依次加入10mL乙腈、4g無水硫酸鎂和lg氯化鈉，搖勻后在渦旋混合器上以400r/min的轉 速渦旋混合2min，再將此離心管放入離心機中，以4200r/min的轉速離心5min，此時上清液 為黃色。
[0040] (4)在15mL離心管中，分別加入600mg無水硫酸鎂、60mg N-丙基乙二胺、60mg C18 和20mg石墨化碳，取步驟⑶的4mL萃取液加入此離心管中，搖勻后以400r/min的轉速在 潤旋混合器上混合2min，再將此離心管放入離心機以4200r/min的轉速離心5min，得到無 色上清液。無色上清液過〇. 22 μ m有機濾膜，待用。
[0041] (5)選擇激發光源波長為785nm的拉曼光譜儀，功率為200mW，光譜掃描范圍 400?2000CHT 1，分辨率為4CHT1，積分時間為10s，積分2次求平均。取步驟（4)的20 μ L待 測過濾液、步驟（1)制備的500 μ L銀納米溶液和濃度為1 %的100 μ L氯化鈉溶液混合均 勻，用于拉曼光譜檢測，得到待測樣品的表面增強拉曼譜圖。圖2為不同濃度以臍橙果肉提 取液為基質的三唑磷溶液表面增強拉曼光譜。對比圖1和圖2,可看出待測樣品的表面增強 拉曼光譜中存在611、977、1000、1407和1595CHT 1處的5個三唑磷的拉曼特征峰，這5個特 征峰可作為臍橙果肉中三唑磷農藥殘留的判別依據。由圖2還可看出，當濃度為2mg/L時， 三唑磷的5處拉曼峰明顯，易識別；濃度為lmg/L時，611CHT 1處的拉曼特征峰已不易識別， 其他4處特征峰的峰強明顯降低，但依然能識別出；濃度為0. 6mg/L時，lOOOcnT1和1407CHT1 兩處特征峰可識別但峰強較低；濃度為0. 5mg/L時，1407CHT1處特征峰不易識別，但其依然 存在，峰強十分微弱；濃度為〇.4mg/L時，未出現三唑磷農藥的特征拉曼峰。由此表明，利用 表面增強拉曼光譜技術能檢測到臍橙果肉中三唑磷農藥的最低檢測濃度為0. 5mg/L。
[0042] (6)圖3是采用無水硫酸鎂、N-丙基乙二胺、C18和石墨化碳對臍檢果肉萃取液凈 化前后的表面增強拉曼光譜對比圖。圖中標注"空白"是空白臍橙果肉萃取液的表面增強 拉曼譜圖，標注"凈化前"是由空白臍橙果肉萃取液為基質制備的濃度為l〇〇mg/L的三唑磷 溶液表面增強拉曼譜圖，標注"凈化后"是由空白臍橙果肉萃取液為基質制備濃度為l〇〇mg/ L的三唑磷溶液經無水硫酸鎂、N-丙基乙二胺、C18和石墨化碳凈化后的表面增強拉曼譜圖。 從圖可看出，空白臍橙果肉萃取液和凈化前的以空白臍橙果肉提取液為基質的三唑磷溶液 的譜峰強度較低，存在明顯的熒光干攏，凈化前的以空白臍橙提取液為基質的三唑磷溶液 的拉曼譜峰在977、1000和1407CHT 1處存在較弱的三唑磷拉曼峰，而在以空白臍橙果肉提 取液為基質的三唑磷溶液經無水硫酸鎂、N-丙基乙二胺、C 18和石墨化碳凈化后的拉曼譜圖 中，熒光信號的干攏明顯減少，譜峰強度明顯增強，除了 977U000和1407CHT1處的三唑磷拉 曼峰強度明顯增強外，還出現了 611U595CHT1處的三唑磷拉曼峰。這說明使用無水硫酸鎂、 N-丙基乙二胺、C18和石墨化碳對萃取液凈化后，去除了臍橙果肉中大量有機酸、色素、膠質 和纖維素等突光物質，大大提聞了胳澄中農藥殘留的檢測精度。
[0043] (7)以化學方法檢測臍橙中不含三唑磷農藥殘留的臍橙為空白樣品，空白樣品果 肉經搗碎后，由步驟（3)提取和步驟（4)凈化后，配制以空白臍橙果肉提取液為基質的不同 濃度三唑磷溶液，過0. 22 μ m有機濾膜。選擇激發光源波長為785nm的拉曼光譜儀，功率為 200mW，光譜掃描范圍400?2000CHT1，分辨率為4CHT 1，積分時間為10s，積分2次求平均，得 到不同濃度以臍橙果肉提取液為基質的三唑磷溶液表面增強拉曼光譜。因光源輸出功率的 穩定性、檢測元件的暗電流以及樣品濃度不同等因素會引起拉曼散射指數不同，這些因素 會影響檢測結果的準確性。本發明選用2257CHT 1處乙腈C = N伸縮振動峰為內標峰來最大 可能地消除外界因素的影響，這是因為2257CHT1處拉曼峰較穩定且與三唑磷的特征峰不重 合，另外采用乙腈為內標物可避免因加入其它試劑對待測溶液產生干擾。
[0044] 在三唑磷的拉曼特征峰中，1407CHT1歸屬于三唑環上C-N伸縮振動，且沒有重疊峰 的影響，因此選用該特征峰作為定量分析譜峰。以三唑磷濃度為橫坐標，以三唑磷特征譜峰 1409CHT1處的峰強度與乙腈在2257CHT1的特征峰強度的比值為相對強度為縱坐標繪制標準 曲線，標準曲線如圖5所示，得到在線性范圍為0. 5?20mg/L標準曲線的函數關系為：y = 0. 3434x+2. 1008,相關系數R2 = 0.9919,線性關系良好，可用于臍橙果肉中三唑磷農藥殘留 的定量分析。
[0045] 向已知三唑磷含量的臍橙果肉樣品中添加不等量的三唑磷標準溶液，按實施例1 中步驟進行操作，每個樣品重復測定3次，同時測定加標回收率與相對標準偏差，結果見表 1。 加標平均回收率為81. 23%?97. 95%，相對標準偏差在0. 84%?3. 30%之間，說明本 發明公開的方法具有較高的準確度和精密度。
[0046] 表1三唑磷在臍橙果肉樣品中的添加回收率和相對標準偏差
[0047]
【權利要求】
1. 柑桔中痕量農藥殘留的表面增強拉曼光譜快速檢測方法，其特征在于按照下述步驟 進行： (1) 銀納米或金納米增強基底的制備：采用檸檬酸三鈉加熱還原法制備得到； (2) 建立各種農藥標準品的表面增強拉曼譜圖，并對其譜峰進行歸屬和解析； (3) 待測柑桔樣品經搗碎后，萃取出樣品溶液，萃取液為黃色； (4) 采用無水硫酸鎂、N-丙基乙二胺、C18和石墨化碳對上述萃取液進行凈化，去除萃取 液中有機酸、色素等熒光物質對拉曼檢測效果的影響；萃取液經凈化后，由黃色變成無色； 凈化后的溶液過〇. 22 μ m有機濾膜； (5) 取步驟（4)的20 μ L待測過濾液、步驟（1)制備的500 μ L增強基底溶液和100 μ L 氯化鈉溶液（質量濃度為1% )混合均勻，用于拉曼光譜檢測； (6) 以化學方法檢測柑桔中不含農藥殘留的柑桔為空白樣品，空白樣品經搗碎后，由步 驟（3)提取和步驟（4)凈化，配制以空白柑桔提取液為基質的不同濃度的農藥標準溶液，過 0. 22 μ m有機濾膜；取20 μ L待測過濾液、步驟⑴制備的500 μ L增強基底溶液和100 μ L 質量濃度為1 %氯化鈉溶液混合均勻，用于拉曼光譜檢測； (7) 將步驟（5)所得的待測試樣的SERS譜圖與步驟（2)所歸屬的農藥拉曼譜峰進行對 t匕，便可確定待測試樣中是否含有該種農藥，即達到對待測柑桔試樣中是否含有農藥殘留 定性判別的目的； (8) 將步驟（6)所測得的待測柑桔試樣的SERS譜圖與步驟（2)所歸屬的農藥拉曼譜峰 進行對比，選擇拉曼峰強度較高的農藥特征峰用于柑桔中農藥殘留的定量分析；以農藥濃 度為橫坐標，特征峰的峰強度為縱坐標繪制標準曲線，用于柑桔樣品中農藥殘留的定量分 析。
2. 根據權利要求1所述的柑桔中痕量農藥殘留的表面增強拉曼光譜快速檢測方法， 其特征在于其中步驟（1)銀納米或金納米增強基底的制備：銀納米增強基底采用檸檬酸三 鈉加熱還原法制備得到，按照下述步驟進行：將一定濃度的硝酸銀溶液（36mg硝酸銀溶于 200mL超純水）倒入燒瓶中，放在恒溫磁力攪拌器上，高溫迅速加熱到沸騰，在2分鐘內逐 步滴入濃度為1 %的檸檬酸三鈉溶液（60mg檸檬酸三鈉溶于6mL超純水），同時以200r/ min的轉速攪拌，此時溶液慢慢由透明變淡棕色，反應25min后得到灰綠色液體；待室溫冷 卻后，將上述適量銀膠溶液倒入離心管中，離心后倒掉少量上清液，再往離心管中加入適量 超純水，用超聲振蕩混勻，銀膠經多次提純后，避光保存； 金納米增強基底采用檸檬酸三鈉加熱還原法制備得到，按照下述步驟進行：將一定濃 度的高氯金酸溶液（l〇mg高氯金酸溶于100mL超純水中）倒入三口燒瓶中，放在恒溫磁 力攪拌器上，溫度控制在120°C恒定加熱至沸騰后，迅速加入一定濃度的檸檬酸三鈉溶液 (20mg朽 1檬酸三鈉溶于4mL超純水），同時以100r/min的轉速快速攪拌；制備的金溶膠顏色 為酒紅色；待溶液冷卻后，避光保存。
3. 根據權利要求1所述的柑桔中痕量農藥殘留的表面增強拉曼光譜快速檢測方法，其 特征在于其中步驟（2)建立各種農藥標準品的表面增強拉曼譜圖，并對其進行譜峰歸屬和 解析；按照下述步驟進行：稱取20mg農藥標準品，放于200mL的容量瓶中，用有機溶劑定容 到刻度，用超聲振蕩溶解，制成濃度為l〇〇mg/L的標準品母液；將母液稀釋成一定濃度的標 準溶液，取稀釋的標準溶液20 μ L、步驟（1)制備的500 μ L增強基底溶液和100 μ L質量濃 度為1%氯化鈉溶液混合均勻，用于拉曼光譜檢測，對農藥分子的官能團特征振動頻率進行 譜峰歸屬和解析，得到各農藥分子的特征譜峰，這些特征譜峰作為柑桔中該農藥殘留的定 性定量判別依據。
4. 根據權利要求1所述的柑桔中痕量農藥殘留的表面增強拉曼光譜快速檢測方法， 其特征在于所述步驟（3)的萃取方法為：待測柑桔樣品經搗碎后，稱取10g搗碎樣品放于 50mL離心管中，向離心管中依次加入10mL乙腈、4g無水硫酸鎂和lg氯化鈉，搖勻后在渦旋 混合器上以400r/min的轉速渦旋混合2min，再將此離心管放入離心機中，以4200r/min的 轉速離心5min，此時上清液為黃色。
5. 根據權利要求1所述的柑桔中痕量農藥殘留的表面增強拉曼光譜快速檢測方法，其 特征在于所述步驟（4)的凈化方法為：在15mL離心管中，分別加入600mg無水硫酸鎂、60mg N-丙基乙二胺、60mg (318和2〇11^石墨化碳，取步驟⑶的4mL萃取液加入此離心管中，搖勻 后在400r/min的潤旋混合器上混合2min后，再將此離心管放入離心機以4200r/min的轉 速離心5min，得到無色上清液。
【文檔編號】G01N1/28GK104101591SQ201410354024
【公開日】2014年10月15日 申請日期:2014年7月24日 優先權日:2014年7月24日
【發明者】陳金印, 劉木華, 吳瑞梅, 王曉彬, 李俊杰, 藺磊, 范苑 申請人:江西農業大學