一種水凝膠電極的制備方法與應(yīng)用的制作方法

一種水凝膠電極的制備方法與應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】一種水凝膠電極的制備方法與應(yīng)用，涉及水凝膠電極。制備方法：用石墨粉為原料，加入硝酸鈉、硫酸、高錳酸鉀，混合后反應(yīng)，直至形成粘稠的混合物，然后第一次加入純水，繼續(xù)反應(yīng)，再第二次加入純水將反應(yīng)終止，再加入過氧化氫溶液用以除去未反應(yīng)的高錳酸鉀，經(jīng)洗滌，離心，干燥，即得氧化石墨固體，氧化石墨固體經(jīng)超聲得到分散均勻的氧化石墨烯水溶液；將氧化石墨烯水溶液與魚精DNA混合，再加入離心管中加熱，待凝膠穩(wěn)定形成后，將銅絲插入離心管底部小孔固定，即得到氧化石墨烯和魚精DNA復(fù)合的水凝膠電極?？捎糜谥苽溲趸┖汪~精DNA復(fù)合材料水凝膠生物傳感器?？稍跈z測卵巢癌線粒體DNA突變中應(yīng)用。
【專利說明】
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及水凝膠電極，尤其是涉及可用于電化學(xué)檢測卵巢癌線粒體DNA突變的 一種水凝膠電極的制備方法與應(yīng)用。 一種水凝膠電極的制備方法與應(yīng)用

【背景技術(shù)】
[0002] 作為嚴(yán)重威脅婦女健康的惡性腫瘤之一，卵巢癌發(fā)病隱匿，缺乏有效的篩查手段， 臨床上開展的多種檢測難以切實(shí)提高卵巢癌的早期診斷率。 [η]線粒體DNA的高突變率以 及在癌細(xì)胞中的高拷貝數(shù)使其成為腫瘤非侵入性診斷的有效分子標(biāo)記。 [4_5]常規(guī)的突變分 析方法比如超聲診斷、計(jì)算機(jī)體層掃描（CT)和磁共振（MRI)等多具有成本高昂、過程復(fù)雜 等缺點(diǎn)，相比之下，電化學(xué)方法因其具有簡單、便攜、低成本、高靈敏、快速、無需標(biāo)記等特點(diǎn) 受到人們的廣泛關(guān)注。電極的構(gòu)建和修飾是電化學(xué)檢測的關(guān)鍵步驟。石墨烯具有優(yōu)異的 導(dǎo)電性和超高的比表面積，石墨烯的片層結(jié)構(gòu)能夠提供更大的比表面積用于其他分子的吸 附，并且能夠通過作用結(jié)合多種生物分子。因此，石墨烯一經(jīng)發(fā)現(xiàn)，便很快被用于電 化學(xué)生物傳感器的構(gòu)建和優(yōu)化。 [6<然而，目前文獻(xiàn)中報道的基于石墨烯電化學(xué)生物傳感器 不僅構(gòu)造較為復(fù)雜，而且表面固定的生物活性分子因長期儲存而失活，難以真正走向臨床 應(yīng)用。
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【發(fā)明內(nèi)容】

[0012] 本發(fā)明的目的在于提供一種基于氧化石墨烯和魚精DNA的一種水凝膠電極的制 備方法。
[0013] 本發(fā)明的第二目的在于提供氧化石墨烯和魚精DNA復(fù)合材料水凝膠生物傳感器 的制備方法。
[0014] 本發(fā)明的第三目的在于提供所述水凝膠電極在檢測卵巢癌線粒體DNA突變中的 應(yīng)用。
[0015] 所述水凝膠電極的制備方法，包括以下步驟：
[0016] 1)用石墨粉為原料，加入硝酸鈉、硫酸、高錳酸鉀，混合后反應(yīng)，直至形成粘稠的混 合物，然后第一次加入純水，繼續(xù)反應(yīng)，再第二次加入純水將反應(yīng)終止，再加入過氧化氫溶 液用以除去未反應(yīng)的高錳酸鉀，經(jīng)洗滌，離心，干燥，即得氧化石墨固體，氧化石墨固體經(jīng)超 聲得到分散均勻的氧化石墨烯水溶液；
[0017] 在步驟1)中，所述石墨粉、硝酸鈉、硫酸、高錳酸鉀的配比可為 2g : lg : 16ml : 6g，其中，石墨粉、硝酸鈉、高猛酸鉀以質(zhì)量計(jì)算，硫酸以體積計(jì)算；所述 硫酸可采用市售濃硫酸；所述反應(yīng)的條件可為在35°C下反應(yīng)30min ;第一次加入純水的量 可為92ml，所述繼續(xù)反應(yīng)的條件可為在95°C繼續(xù)反應(yīng)5h ;所述第二次加入純水的量可為 400ml ;所述過氧化氫溶液可采用6ml質(zhì)量分?jǐn)?shù)為30%的過氧化氫溶液。
[0018] 2)將步驟1)得到的氧化石墨烯水溶液與魚精DNA混合，得混合溶液，將混合溶液 加入用保鮮膜包裹的底部打孔的離心管中，加熱，待凝膠穩(wěn)定形成后，將銅絲插入離心管底 部小孔固定，即得到氧化石墨烯和魚精DNA復(fù)合的水凝膠電極。
[0019] 在步驟2)中，所述加熱的時間可為lOmin。
[0020] 所制備的氧化石墨烯和魚精DNA復(fù)合的水凝膠電極可用于制備氧化石墨烯和魚 精DNA復(fù)合材料水凝膠生物傳感器，所述氧化石墨烯和魚精DNA復(fù)合材料水凝膠生物傳感 器的制備方法如下：
[0021] 將氧化石墨烯和魚精DNA復(fù)合的水凝膠電極經(jīng)過聚乙烯亞胺（PEI)修飾，再通過 靜電作用固定探針DNA，即得氧化石墨烯和魚精DNA復(fù)合材料水凝膠生物傳感器。
[0022] 所述水凝膠電極可在檢測卵巢癌線粒體DNA突變中應(yīng)用。
[0023] 所述基于氧化石墨烯/魚精DNA水凝膠電極的電化學(xué)阻抗法與傳統(tǒng)的檢測卵巢癌 線粒體DNA突變相比有以下優(yōu)勢：
[0024] 1、所述氧化石墨烯/DNA水凝膠電極制備方法簡單，成本低，可以宏量制備。
[0025] 2、所制備的氧化石墨烯/DNA水凝膠電極具有性質(zhì)均一、穩(wěn)定、可再生、形狀大小 可調(diào)等特點(diǎn)。
[0026] 3、氧化石墨烯/DNA水凝膠含有大量的水分和魚精DNA分子，后者與卵巢癌線粒體 DNA具有類似的分子結(jié)構(gòu)，因此這種凝膠應(yīng)該具有較高的生物相容性和仿生特性，能夠提高 DNA在水凝膠表面的雜化效率。
[0027] 4、氧化石墨烯/DNA凝膠電極檢測卵巢癌線粒體DNA突變靈敏度特別高，對靶序列 進(jìn)行高靈敏性和選擇性的檢測，檢測下限達(dá)到i.〇xi〇_ 21m。對突變熱點(diǎn)的卵巢癌患者線粒 體DNA擴(kuò)增片段的檢測，檢測下限可達(dá)到5. 69 X 1(Γ13Μ。
[0028] 5、由于水凝膠獨(dú)特的高水含量、生物相容性和仿生特性，采用水凝膠修飾電極可 降低電極的峰間噪聲水平，克服目前生物傳感器在生物兼容性和電極-生物分子間相互作 用方面的局限性，可提高DNA在電極表面的雜化效率。氧化石墨烯和魚精DNA水凝膠含有 大量的水分和魚精DNA分子，后者與卵巢癌線粒體DNA具有類似的分子結(jié)構(gòu)，因此這種凝膠 應(yīng)該具有較高的生物相容性和仿生特性，因此我們以氧化石墨烯和魚精DNA水凝膠直接作 為電極，在綜合利用氧化石墨烯和水凝膠各自獨(dú)特而優(yōu)越的電化學(xué)與生物活性的同時，擺 脫常規(guī)電化學(xué)傳感器對標(biāo)準(zhǔn)電極的依賴，以期構(gòu)建一種能夠高度靈敏、特異性識別卵巢癌 線粒體DNA突變的低成本新型電化學(xué)傳感器。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0029] 圖1是氧化石墨烯/DNA水凝膠制備過程的光學(xué)照片。
[0030] 圖2是冷凍干燥后的氧化石墨烯/DNA水凝膠內(nèi)部結(jié)構(gòu)的掃描電鏡照片。
[0031] 圖3為所構(gòu)建的電化學(xué)測量體系具體結(jié)構(gòu)示意圖。在圖3中，G0表示氧化石墨烯。
[0032] 圖4是所制備的氧化石墨烯/DNA水凝膠電極在經(jīng)PEI修飾前后的Nyquist曲線 圖。其中曲線a是未經(jīng)修飾的氧化石墨烯/DNA水凝膠電極的Nyquist曲線圖，曲線b是經(jīng) PEI修飾的氧化石墨烯/DNA水凝膠電極的Nyquist曲線圖。
[0033] 圖5是借助電化學(xué)模擬軟件利用Randles&Ershlern式進(jìn)行等效電路擬合的原理 圖。圖中Rs表示電解質(zhì)溶液的電阻；C表示電解質(zhì)溶液與電極界面區(qū)間產(chǎn)生的雙電層電容； Zw表示W(wǎng)arburg阻抗，亦即擴(kuò)散阻抗；Ret表示電極與溶液接觸面發(fā)生氧化還原反應(yīng)時產(chǎn)生 的電荷轉(zhuǎn)移阻抗。
[0034] 圖6為PEI和寡核苷酸探針修飾后的氧化石墨烯/DNA水凝膠電極與不同濃度互 補(bǔ)靶序列溶液雜交后的電化學(xué)阻抗譜。
[0035] 圖7為氧化石墨烯/DNA水凝膠電極雜交前后的阻抗變化（Λ R)與靶序列濃度間 的關(guān)系圖。
[0036] 圖8為ΡΕΙ和寡核苷酸探針修飾后的氧化石墨烯/DNA水凝膠電極分別與1(Γ18Μ互 補(bǔ)序列以及1(Γ 9Μ單堿基錯配和完全非互補(bǔ)靶序列雜交前后的電化學(xué)阻抗譜。
[0037] 圖9是圖8電化學(xué)阻抗譜處理后的AR對不同靶序列的柱狀圖。
[0038] 圖10是氧化石墨烯/DNA水凝膠電極用于檢測不同濃度卵巢癌患者線粒體DNA的 電化學(xué)阻抗譜圖。
[0039] 圖11是氧化石墨烯/DNA水凝膠電極雜交前后的阻抗變化（Λ R)與靶序列濃度間 的關(guān)系圖。
[0040] 圖12為氧化石墨烯/DNA水凝膠電極對卵巢癌患者線粒體DNA擴(kuò)增片段 (1. ΟΧ 10_ηΜ)與正常人線粒體DNA擴(kuò)增片段（1. ΟΧ 10_9Μ)的選擇性檢測圖。

【具體實(shí)施方式】
[0041] 下面通過實(shí)施例結(jié)合附圖對本發(fā)明作進(jìn)一步說明。
[0042] 實(shí)施例1
[0043] 準(zhǔn)確稱取2g天然石墨粉和lg硝酸鈉加入圓底燒瓶，在冰浴的條件下與46mL濃硫 酸混合均勻；再將6g高錳酸鉀逐次緩慢地加入到上述混合液，保持混合液溫度低于20°C攪 拌反應(yīng)2h，然后將混合液轉(zhuǎn)移至35±5°C的油浴中繼續(xù)反應(yīng)30min，此時反應(yīng)體系為棕褐色 粘稠狀液體；然后向混合液中逐次緩慢地加入92mL去離子水，并將溫度升至95±5°C繼續(xù) 反應(yīng)3h，混合液由棕褐色變成亮黃色，最后加入400mL純水終止反應(yīng)，同時加入6mL質(zhì)量分 數(shù)為30 %的H202溶液中和未反應(yīng)的高錳酸鉀。待上述溶液冷卻至室溫后進(jìn)行抽濾，依次用 100mL鹽酸水溶液（1 : 10)和大量純水反復(fù)洗滌濾餅，除去殘留的金屬離子和鹽酸。再將 濾餅重新分散在純水中，以2000rpm低速離心lOmin除去未被氧化的石墨沉淀；將除去沉淀 的上層混合液超聲8h使其完全分散，然后以4000rpm低速離心20min除去未剝離的氧化石 墨，再以8000rpm高速離心20min，收集沉淀；將沉淀重新分散在純水中透析一周，除去殘留 的鹽，最后得到分散均勻的氧化石墨烯水溶液。
[0044] 實(shí)施例2
[0045] 準(zhǔn)確吸取等體積的氧化石墨烯水溶液（6mg/mL)和魚精DNA水溶液（10mg/mL)于 燒杯中均勻混合；取一只潔凈的2mL離心管，在其底部打出直徑1_左右的小孔后，用保鮮 膜緊緊包裹住底部備用；用微量移液器吸取適量氧化石墨烯和魚精DNA的混合溶液，垂直 緩慢地加入離心管中，保證管內(nèi)液面盡可能水平，且管壁潔凈無殘留液滴；啟動加熱混勻 儀，預(yù)熱至95°C ;將裝有氧化石墨烯和魚精DNA混合溶液的離心管小心地移至混勻儀的加 熱孔內(nèi)，加熱lOmin后取出，此時混合溶液凝固形成氧化石墨烯/DNA水凝膠。將水凝膠于 4°C條件下密封保存。氧化石墨烯和氧化石墨烯/DNA水凝膠的光學(xué)照片以及掃描電鏡照片 如圖1和2所示；使用前除去底部的保鮮膜，剪取4. 5cm左右直徑為1mm的銅絲，在砂紙上 輕輕打磨除去表面的氧化層后輕輕插入離心管底部的小孔內(nèi)約0. 5cm，將銅絲用膠固定后 即制得氧化石墨烯/DNA水凝膠電極。
[0046] 從圖1中可以觀察到，氧化石墨烯與魚精DNA的等體積混合溶液在加熱前為均一 穩(wěn)定、可自由流動的液體；將此混合溶液于95°C下加熱lOmin后發(fā)生凝膠化，獲得氧化石墨 烯/DNA水凝膠。如圖1所示，水凝膠呈黑褐色，且均一無分層，室溫下長時間放置亦不會發(fā) 生溶膠和分層現(xiàn)象，表明制得的水凝膠性質(zhì)穩(wěn)定。
[0047] 從圖2中可以清晰地看到，所制備的水凝膠具有明顯的三維多孔結(jié)構(gòu)。空洞彼此 連通，孔徑尺寸范圍為亞微米到微米，孔壁由非常薄的氧化石墨烯片層堆疊而成，從而印證 了氧化石墨烯自組裝的發(fā)生是由其與DNA分子間強(qiáng)烈的非共價作用引發(fā)的。
[0048] 實(shí)施例3
[0049] 吸取適量1 %的聚乙烯亞胺（PEI)溶液加入氧化石墨烯/DNA水凝膠電極中水凝 膠的上方，靜置30min后，棄去電極中PEI溶液，水清，即得到PEI修飾的氧化石墨烯/DNA 水凝膠電極。將寡核苷酸探針溶液加入PEI修飾的氧化石墨烯/DNA水凝膠電極中水凝膠 的上方，于4°C條件下孵育30min后，棄去電極中寡核苷酸探針溶液，依次用PBS和超純水 清洗，即得到固定有寡核苷酸探針的PEI修飾氧化石墨烯/DNA水凝膠電極。另取未經(jīng)PEI 修飾的氧化石墨烯/DNA水凝膠電極，以相同方法和條件進(jìn)行孵育，即得到固定有寡核苷酸 探針的氧化石墨烯/DNA水凝膠電極。氧化石墨烯/DNA水凝膠電極作為工作電極，選用直 徑0. 5mm的鉬絲電極和直徑4mm的Ag/AgCl (3M KC1)電極分別作為對電極和參比電極，構(gòu) 成典型三電極體系。將氧化石墨烯/DNA水凝膠電極中水凝膠上方空余的離心管作為電化 學(xué)池，并向其中加入電解質(zhì)溶液。插入對電極和參比電極后進(jìn)行檢測?；谘趸? DNA水凝膠電極的電化學(xué)測量體系見圖3。所制備的氧化石墨烯/DNA水凝膠電極在經(jīng)PEI 修飾前后的Nyqui st曲線圖見圖4。其中曲線a是未經(jīng)修飾的氧化石墨烯/DNA水凝膠電 極的Nyquist曲線圖，曲線b是經(jīng)PEI修飾的氧化石墨烯/DNA水凝膠電極的Nyquist曲線 圖。其阻抗譜在高頻范圍均表現(xiàn)為半圓弧，說明電極與溶液界面存在電子轉(zhuǎn)移受限情況；在 低頻范圍均表現(xiàn)為直線，說明電解質(zhì)溶液內(nèi)存在擴(kuò)散受限情況。當(dāng)向體系中加入PEI時，大 量帶正電的PEI分子依靠強(qiáng)烈的靜電作用吸附到表面帶負(fù)電的氧化石墨烯上，在一定程度 上阻止了溶液中電子在電極表面和內(nèi)部與氧化石墨烯之間的轉(zhuǎn)移，從而導(dǎo)致整個氧化石墨 烯/DNA水凝膠電極阻抗的進(jìn)一步增大。
[0050] 實(shí)施例4
[0051] 向每管寡核苷酸探針樣品中加入125 μ L滅菌后的超純水后于渦旋振蕩器上劇 烈震蕩混勻，即得到100 μ Μ的寡核苷酸探針貯存液，記為16223Ρ，向每管靶序列樣品中 加入36 μ L滅菌后的超純水后于渦旋振蕩器上劇烈震蕩混勻，即得到100 μ Μ的靶序列貯 存液，互補(bǔ)和單堿基錯配靶序列分別記為16223Μ和16223W。借助電化學(xué)模擬軟件利用 Randles&Ershlern式進(jìn)行等效電路擬合的原理圖見圖5。由于氧化石墨烯/DNA水凝膠電 極的電化學(xué)阻抗譜中出現(xiàn)了一個半圓弧，意味著存在一個時間常數(shù)，故而采用一個電容與 電阻的并聯(lián)電路來表征；又因?yàn)榈皖l范圍內(nèi)出現(xiàn)了一端斜直線，意味著電極表面與溶液存 在擴(kuò)散受阻的情況，因而采用擴(kuò)散阻抗與電子轉(zhuǎn)移電阻并聯(lián)后與電容串聯(lián)的電路表示。根 據(jù)擬合得到的等效電路計(jì)算出氧化石墨烯/DNA水凝膠電極在經(jīng)PEI修飾前后的電子轉(zhuǎn)移 阻抗分別為 6· 40Χ104Ω 和 9· 69Χ104Ω。
[0052] 實(shí)施例5
[0053] 分別吸取200 μ L血液樣本、200 μ L Binding Buffer和40 μ L蛋白酶Κ(實(shí)驗(yàn)前 用4. 5mL去離子水溶解并分裝）加入至1. 5mL離心管中，經(jīng)渦旋混勻后在70°C水浴中孵育 lOmin，然后加入100yL異丙醇混勻。取High Filter柱子放入潔凈的收集管中，將上步得 到的混合液移至柱子中，以8000g離心lmin，棄去濾液后將柱子放入新的收集管中。向High Filter柱子中加入500 μ L Inhibitor Removal Buffer (實(shí)驗(yàn)前用20mL無水乙醇稀釋），于 室溫下以8000g離心lmin，棄去濾液后將柱子放入新的收集管中。向High Filter柱子中加 入500yL Wash Buffer (實(shí)驗(yàn)前用80mL無水乙醇稀釋），于室溫下以8000g離心lmin，棄去 濾液后將柱子放入新的收集管中。重復(fù)進(jìn)行2次后于室溫下以10000g離心10s，徹底去除 Wash Buffer。將High Filter柱子放入滅菌后的1.5mL離心管中，加入200yL在70°C條 件下預(yù)熱后的Elution Buffer,于室溫下以8000g離心lmin，離心管中溶液即為所提取的 基因組DNA溶液，將其儲存于-20°C條件下備用或者用于PCR。為獲得不同的實(shí)際樣品進(jìn)行 檢測，選取正常人和卵巢癌患者的基因組DNA作為模板進(jìn)行PCR擴(kuò)增，將得到的產(chǎn)物純化后 作為實(shí)際樣品。PCR反應(yīng)各組分為2. 5 μ LlOXPfu DNA聚合酶緩沖液，0. 5 μ L dNTPs (10mM)， 0.5以1^上游引物（2(^]\〇,0.54 1^下游引物（2(^]\〇,0.54 1^基因組0嫩，0.54 1^?包0嫩 聚合酶（5U/yL)和18yL去離子水。PCR條件是1)94°C預(yù)變性5min，2)94°C變性45s，退 火45s，72°C延伸90s，此步重復(fù)34次，3)72°C再延伸5min。表2列出了 PCR擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)中針 對突變位點(diǎn)采用的引物及相應(yīng)的退火溫度和擴(kuò)增產(chǎn)物長度。
[0054] 表2針對突變位點(diǎn)設(shè)計(jì)的引物以及擴(kuò)增產(chǎn)物長度和退火溫度
[0055]

【權(quán)利要求】
1. 一種水凝膠電極的制備方法，其特征在于包括以下步驟： 1) 用石墨粉為原料，加入硝酸鈉、硫酸、高錳酸鉀，混合后反應(yīng)，直至形成粘稠的混合 物，然后第一次加入純水，繼續(xù)反應(yīng)，再第二次加入純水將反應(yīng)終止，再加入過氧化氫溶液 用以除去未反應(yīng)的高錳酸鉀，經(jīng)洗滌，離心，干燥，即得氧化石墨固體，氧化石墨固體經(jīng)超聲 得到分散均勻的氧化石墨烯水溶液； 2) 將步驟1)得到的氧化石墨烯水溶液與魚精DNA混合，得混合溶液，將混合溶液加入 用保鮮膜包裹的底部打孔的離心管中，加熱，待凝膠穩(wěn)定形成后，將銅絲插入離心管底部小 孔固定，即得到氧化石墨烯和魚精DNA復(fù)合的水凝膠電極。
2. 如權(quán)利要求1所述一種水凝膠電極的制備方法，其特征在于在步驟1)中，所述石墨 粉、硝酸鈉、硫酸、高錳酸鉀的配比為2g : lg : 16ml : 6g，其中，石墨粉、硝酸鈉、高錳酸鉀 以質(zhì)量計(jì)算，硫酸以體積計(jì)算。
3. 如權(quán)利要求1所述一種水凝膠電極的制備方法，其特征在于在步驟1)中，所述硫酸 采用市售濃硫酸。
4. 如權(quán)利要求1所述一種水凝膠電極的制備方法，其特征在于在步驟1)中，所述反應(yīng) 的條件為在35°C下反應(yīng)30min。
5. 如權(quán)利要求1所述一種水凝膠電極的制備方法，其特征在于在步驟1)中，第一次加 入純水的量為92ml，所述繼續(xù)反應(yīng)的條件可為在95°C繼續(xù)反應(yīng)5h ;所述第二次加入純水的 量可為400ml。
6. 如權(quán)利要求1所述一種水凝膠電極的制備方法，其特征在于在步驟1)中，所述過氧 化氫溶液采用6ml質(zhì)量分?jǐn)?shù)為30%的過氧化氫溶液。
7. 如權(quán)利要求1所述一種水凝膠電極的制備方法，其特征在于在步驟2)中，所述加熱 的時間為lOmin。
8. 如權(quán)利要求1?7任一項(xiàng)所述一種水凝膠電極的制備方法制備的氧化石墨烯和魚精 DNA復(fù)合的水凝膠電極。
9. 如權(quán)利要求1?7任一項(xiàng)所述一種水凝膠電極的制備方法制備的氧化石墨烯和魚 精DNA復(fù)合的水凝膠電極在制備氧化石墨烯和魚精DNA復(fù)合材料水凝膠生物傳感器中的應(yīng) 用，所述氧化石墨烯和魚精DNA復(fù)合材料水凝膠生物傳感器的制備方法如下： 將氧化石墨烯和魚精DNA復(fù)合的水凝膠電極經(jīng)過聚乙烯亞胺修飾，再通過靜電作用固 定探針DNA，即得氧化石墨烯和魚精DNA復(fù)合材料水凝膠生物傳感器。
10. 如權(quán)利要求1?7任一項(xiàng)所述一種水凝膠電極的制備方法制備的氧化石墨烯和魚 精DNA復(fù)合的水凝膠電極在檢測卵巢癌線粒體DNA突變中的應(yīng)用。
【文檔編號】G01N27/00GK104086786SQ201410340633
【公開日】2014年10月8日 申請日期:2014年7月17日 優(yōu)先權(quán)日:2014年7月17日
【發(fā)明者】翁建, 孫莉萍, 胡楠, 彭健 申請人:廈門大學(xué)