17α-羥基黃體酮的檢測方法
【專利摘要】本發明公開了一種17α-羥基黃體酮的檢測方法，該方法包括鑒別方法和/或含量測定方法，以17α-羥基黃體酮為對照品，以體積比為50～70∶30～50的乙腈-水為流動相，用高效液相色譜法進行鑒別和/或含量測定。本發明可以在制得粗品步驟及干燥步驟前就進行檢測，可以更好更全面的反映最終產品中17α-羥基黃體酮的含量，從而保證產品的質量。
【專利說明】17α-羥基黃體酮的檢測方法
【技術領域】
[0001]本發明涉及一種藥物中活性成份的檢測方法，具體涉及的是一種合成激素類藥物所需要的中間體17 a-羥基黃體酮的檢測方法，屬于醫藥【技術領域】。
【背景技術】
[0002]本發明具體涉及到的合成激素類藥物所需要的中間體即17 a -羥基黃體酮，由它可以合成倍他米松、氫化可的松、己酸孕酮、醋酸可的松、氯地孕酮等激素類藥物，在糖代謝，抗炎等方面有很好療效。
[0003]目前，17a -羥基黃體酮的制備工藝中主要涉及制備方法為:取4-雄烯二酮進行氰醇化反應，得到氰醇化物，然后再進行縮合反應得到縮酮，最后與格氏試劑反應得到17 a -羥基黃體酮。中國專利文件一種制備黃體酮的方法(CN103524588A)涉及一種制備黃體酮的方法，該方法以4-雄烯二酮(4AD)為原料，依次經過羥氰化、脫水、保護、氫化、加成水解反應制得黃體酮。
[0004]經過分析可以得知，目前制備方法的整個生產工藝中質量控制比較簡單，可能會因為生產批次的不一樣，或者就算是同一批次也會生產出含量各不相同，品質不均勻的產品。如果在精制步驟進行適當的鑒別和含量測定，這無疑會對產品的質量和療效穩定起著至關重要的作用。
[0005]通過查詢目前國內外的相關文獻發現，僅有17 a-羥基黃體酮合成工藝的報道，還沒有關于對17 a -羥基黃體酮檢測方法的相關報道。
【發明內容】
[0006]針對現有技術的不足，本發明提供了一種17 a-羥基黃體酮的檢測方法，可以全面鑒別及檢測該產品的質量，確保了該藥物的安全有效。
[0007]為實現上述發明目的，本發明采用的具體技術方案如下:
[0008]17 a -羥基黃體酮的檢測方法，包括鑒別方法和/或含量測定方法，以17 a -羥基黃體酮為對照品，以體積比為50?70: 30?50的乙腈-水為流動相，用高效液相色譜法進行鑒別和/或含量測定。
[0009]所述的高效液相色譜法的色譜條件與系統適應性試驗:以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以體積比50?70: 30?50的乙腈-水為流動相，檢測波長為235nm，理論板數按17 a -羥基黃體酮峰計算不低于4000。
[0010]根據本發明優選的，上述方法中的流動相為體積比60:40的乙腈-水。
[0011]根據本發明優選的，所述的鑒別方法具體步驟如下:
[0012]A.對照品溶液的制備:精密稱取17 a -羥基黃體酮對照品適量，用乙腈制成每Iml中含0.2-0.4mg的溶液；
[0013]B.供試品溶液的制備:精密稱定17 a-羥基黃體酮10_20mg，置50ml容量瓶中，力口乙腈溶解并稀釋至刻度，搖勻，濾過，作為供試品溶液；
[0014]C.液相色譜測定色譜峰:分別精密量取對照品溶液與供試品溶液各10 μ 1，注入液相色譜儀中，檢測出供試品色譜中與對照品色譜峰保留時間相一致的色譜峰。
[0015]進一步優選的，所述的鑒別方法具體步驟如下:
[0016]Α.對照品溶液的制備:精密稱取17 α -羥基黃體酮對照品適量，用乙腈制成每Iml中含0.3mg的溶液；
[0017]B.供試品溶液的制備:精密稱定17 α -羥基黃體酮15mg，置50ml容量瓶中，加乙腈溶解并稀釋至刻度，搖勻，濾過，作為供試品溶液；
[0018]C.液相色譜測定色譜峰:分別精密量取對照品溶液與供試品溶液各10 μ 1，注入液相色譜儀中，檢測出供試品色譜中與對照品色譜峰保留時間相一致的色譜峰。
[0019]根據本發明優選的，所述的含量測定方法具體步驟如下:
[0020]Α.對照品溶液的制備:精密稱取17 α -羥基黃體酮對照品適量，用乙腈制成每Iml中含0.2-0.4mg的溶液；
[0021]B.供試品溶液的制備:精密稱定17 α-羥基黃體酮10_20mg，置50ml容量瓶中，力口乙腈溶解并稀釋至刻度，搖勻，濾過，作為供試品溶液；
[0022]C.液相色譜測定色譜峰:分別精密量取對照品溶液與供試品溶液各10 μ 1，注入液相色譜儀中，檢測出供試品色譜中與對照品色譜峰保留時間相一致的色譜峰，按外標法以峰面積計算其含量。
[0023]進一步優選的，所述的含量測定方法具體步驟如下:
[0024]Α.對照品溶液的制備:精密稱取17 α -羥基黃體酮對照品適量，用乙腈制成每Iml中含0.3mg的溶液；
[0025]B.供試品溶液的制備:精密稱定17 α -羥基黃體酮15mg，置50ml容量瓶中，加乙腈溶解并稀釋至刻度，搖勻，濾過，作為供試品溶液；
[0026]C.液相色譜測定色譜峰:分別精密量取對照品溶液與供試品溶液各10 μ 1，注入液相色譜儀中，檢測出供試品色譜中與對照品色譜峰保留時間相一致的色譜峰，按外標法以峰面積計算其含量。
[0027]以上本發明方法中未特別說明的均按照現有技術。
[0028]下述實驗例和實施例用于進一步說明但不限于本發明。
[0029]實驗例1、17 α -羥基黃體酮的鑒別方法研究
[0030]方法:高效液相色譜法
[0031]1.儀器與實驗藥
[0032]島津高效液相色譜儀，LC-10AT型泵，STO-1OA型紫外檢測器，KQ2200B型超聲波清洗器。乙腈為色譜純，水為純化水。17α-羥基黃體酮對照品為山東眾誠藥業股份有限公司實驗室精制后標定的工作對照品。17 α-羥基黃體酮樣品為山東眾誠藥業股份有限公司合成實驗室提供。
[0033]2.方法與結果
[0034]2.1樣品和對照品處理方法如下:
[0035]對照品溶液的制備:精密稱取17 α -羥基黃體酮對照品適量，用乙腈制成每Iml中含0.3mg的溶液。
[0036]供試品溶液的制備:精密稱定17 α -羥基黃體酮15mg，置50ml容量瓶中，加乙腈溶解并稀釋至刻度，搖勻，濾過，作為供試品溶液。
[0037]測定法:分別精密量取對照品溶液與供試品溶液各10μ 1，注入液相色譜儀中，測定，即得。
[0038]2.2色譜條件:
[0039]色譜柱:月旭C18 (150mmX 4.6mm, 5 μ m)
[0040]流動相:乙腈-水(體積比60:40)
[0041]檢測波長:235nm
[0042]流速:1.0ml/min
[0043]結果:在擬定的條件下，樣品中有與對照品保留時間一致的色譜峰。
[0044]實驗例2、17 α -羥基黃體酮的含量測定方法研究
[0045]方法:高效液相色譜法
[0046]1.儀器與實驗藥
[0047]島津高效液相色譜儀，LC-1OAT型泵，STO-1OA型紫外檢測器，KQ2200B型超聲波清洗器。乙腈為色譜純，水為純化水。17α-羥基黃體酮對照品為山東眾誠藥業股份有限公司實驗室精制后標定的工作對照品。17 α-羥基黃體酮樣品為山東眾誠藥業股份有限公司合成實驗室提供。
[0048]2.方法與結果
[0049]2.1色譜條件:
[0050]色譜柱:月旭C18 (150mmX 4.6mm, 5 μ m)
[0051 ] 流動相:乙腈-水(體積比60:40)
[0052]檢測波長:235nm
[0053]流速:1.0ml/min
[0054]2.2溶液的制備
[0055]對照品溶液的制備:精密稱取17 α -羥基黃體酮對照品適量，用乙腈制成每Iml中含0.3mg的溶液；
[0056]供試品溶液的制備:精密稱定17 α -羥基黃體酮15mg，置50ml容量瓶中，加乙腈溶解并稀釋至刻度，搖勻，濾過，作為供試品溶液；
[0057]2.3系統適用性試驗:分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10 μ 1，注入高效液相色譜儀中，記錄色譜圖(見圖1)，結果17 α -羥基黃體酮的保留時間為9.223min,17 α -羥基黃體酮峰與前后色譜峰的分離度均大于1.5，理論板數以17 α _羥基黃體酮峰計算為16632。
[0058]2.4線性關系:精密稱取17α-羥基黃體酮對照品31.4mg，置50ml量瓶中，加乙腈溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為母液，分別精密最取母液3ml、4ml、5ml、6ml、7ml置1ml量瓶中，加乙腈稀釋至刻度，搖勻，作為線性測定溶液。分別精密量取線性測定溶液各10μ 1，注入液相色譜儀中，按照上述色譜條件測定峰面積，以峰面積積分值Y對溶液濃度X (mg/ml)進行線性回歸，結果如下表I所示:
[0059]表1: 17 α -羥基黃體酮線性關系試驗結果
[0060]
【權利要求】
1.17 α-羥基黃體酮的檢測方法，包括鑒別方法和/或含量測定方法，以17 α-羥基黃體酮為對照品，以體積比為50~70: 30~50的乙腈-水為流動相，用高效液相色譜法進行鑒別和/或含量測定。
2.根據權利要求1所述的17α-羥基黃體酮的檢測方法，其特征在于:所述的高效液相色譜法的色譜條件與系統適應性試驗:以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以體積比50~70: 30~50的乙腈-水為流動相，檢測波長為235nm，理論板數按17 α -羥基黃體酮峰計算不低于4000。
3.根據權利要求1或2所述的17α -羥基黃體酮的檢測方法，其特征在于，所述鑒別方法具體步驟如下: Α.對照品溶液的制備:精密稱取17α-羥基黃體酮對照品適量，用乙腈制成每1ml中含0.2-0.4mg的溶液； B.供試品溶液的制備:精密稱定17α-羥基黃體酮10-20mg，置50ml容量瓶中，加乙腈溶解并稀釋至刻度，搖勻，濾過，作為供試品溶液； C.液相色譜測定色譜峰:分別精密量取對照品溶液與供試品溶液各10μ 1，注入液相色譜儀中，檢測出供試品色譜中與對照品色譜峰保留時間相一致的色譜峰。
4.根據權利要求3所述的17α-羥基黃體酮的檢測方法，其特征在于，所述鑒別方法具體步驟如下: Α.對照品溶液的制備:精密稱取17 α -羥基黃體酮對照品適量，用乙腈制成每1ml中含0.3mg的溶液； B.供試品溶液的制備:精密稱定17α -羥基黃體酮15mg，置50ml容量瓶中，加乙腈溶解并稀釋至刻度，搖勻，濾過，作為供試品溶液； C.液相色譜測定色譜峰:分別精密量取對照品溶液與供試品溶液各10μ 1，注入液相色譜儀中，檢測出供試品色譜中與對照品色譜峰保留時間相一致的色譜峰。
5.根據權利要求1或2所述的17α -羥基黃體酮的檢測方法，其特征在于，所述的含量測定方法具體步驟如下: Α.對照品溶液的制備:精密稱取17 α-羥基黃體酮對照品適量，用乙腈制成每1ml中含0.2-0.4mg的溶液； B.供試品溶液的制備:精密稱定17α-羥基黃體酮10-20mg，置50ml容量瓶中，加乙腈溶解并稀釋至刻度，搖勻，濾過，作為供試品溶液； C.液相色譜測定色譜峰:分別精密量取對照品溶液與供試品溶液各10μ 1，注入液相色譜儀中，檢測出供試品色譜中與對照品色譜峰保留時間相一致的色譜峰，按外標法以峰面積計算其含量。
6.根據權利要求5所述的17α-羥基黃體酮的檢測方法，其特征在于，所述的含量測定方法具體步驟如下: Α.對照品溶液的制備:精密稱取17 α -羥基黃體酮對照品適量，用乙腈制成每1ml中含0.3mg的溶液； B.供試品溶液的制備:精密稱定17α -羥基黃體酮15mg，置50ml容量瓶中，加乙腈溶解并稀釋至刻度，搖勻，濾過，作為供試品溶液； C.液相色譜測定色譜峰:分別精密量取對照品溶液與供試品溶液各10μ 1，注入液相色譜儀中， 檢測出供試品色譜中與對照品色譜峰保留時間相一致的色譜峰，按外標法以峰面積計算其含量。
【文檔編號】G01N30/06GK104076103SQ201410332429
【公開日】2014年10月1日 申請日期:2014年7月11日 優先權日:2014年7月11日
【發明者】高英涵, 李義, 李新山 申請人:山東眾誠藥業股份有限公司