一種電鏡生物樣品批量組織處理裝置及應用的制作方法
【專利摘要】本發明提供一種電鏡生物樣品批量處理裝置，由樣品提籃、提手、溶液槽、槽蓋、細胞濾網、壓環組成，樣品提籃設有矩陣排列的編號小格，底部為篩網結構，樣品提籃置于溶液槽內，細胞濾網置于小格內，其大小與編號小格相適，壓環置于細胞濾網底部。本發明設計合理，制作簡單，制作成本低廉，使用時大大節省了實驗操作時間，可批量化制備各類生物電鏡樣品，包括塊狀組織樣品及分散的細胞樣品，降低使用成本，實現平行實驗，可行性極高，從根本上解決了生物樣品批量化處理問題。
【專利說明】一種電鏡生物樣品批量組織處理裝置及應用 【技術領域】
[〇〇〇1] 本發明屬于生物電子顯微科學領域，涉及一種電子顯微鏡生物樣品批量處理裝 置，也適用于具有復雜換液步驟的樣品的其他處理。 【背景技術】
[0002] 生物電子顯微鏡是生物學中研究細胞、組織超微結構最重要、常用的工具。它在生 物學的發展過程中占據重要的地位，目前各種細胞、組織的超微結構知識幾乎都是由它提 供的。
[0003] 在生物電子顯微科學領域中，生物樣品的制備是極其關鍵的步驟，為現代生物學 和醫學的基本技術之一。生物電鏡樣品的制備技術直接決定了樣品質量，其步驟復雜且周 期長，包括取材、固定、脫水、滲透，透射電鏡還包括包埋、聚合等計20步左右的操作。當需 要處理的樣品量達到一定數量時，需要實驗人員花費大量的時間和體力，而且量大后容易 增加出錯率（電鏡樣品往往極小，容易丟失；脫水換液不及時造成干燥或吸收空氣中的水份 而影響電鏡下的觀察結果)。
[0004] 針對復雜且耗時的生物電鏡樣品制作的問題，國內外很多實驗室和專業廠商不斷 推出各種創新或改良方法。最有代表性的是德國LeicaEMTP組織處理儀，樣品處理可實現 全過程自動化，但由于售價很高（幾十萬元），且無法處理分散的細胞樣品，國內少有實驗 室購置使用。
[0005] 現多家開展對外服務的電鏡工作室每批次需處理的樣品量已達幾十甚至上百，而 經濟且易于操作的，適合常規實驗室采用的樣品批量制備裝置卻未見報道。
【發明內容】
[0006] 針對上述狀況，本發明的目的是提供一種電鏡生物樣品批量處理裝置，用于電鏡 生物樣品批量處理，既適用于組織塊樣品，也適用于細胞樣品，從根本上解決了生物樣品批 量化處理問題。
[0007] 本發明一種電鏡生物樣品批量處理裝置，由樣品提籃、提手、溶液槽、槽蓋、細胞濾 網、壓環組成.樣品提籃設有矩陣排列的小格，小格具有編號；樣品提籃底部為篩網結構， 篩網孔徑小于常規電鏡組織樣品直徑，即可使溶液順暢流動，又使電鏡組織樣品不會掉出； 樣品提籃兩邊設有提手，樣品提籃置于溶液槽內，溶液槽尺寸略大于樣品提籃，帶有槽蓋， 可防止樣品吸收水分、試劑揮發等；細胞濾網的大小與樣品提籃帶編號的小格相適，為帶孔 的親水材質，使常規細胞無法通透而溶液可自由通透，專用于放置處理分散的細胞樣品；壓 環外徑與樣品提籃小格內徑切合，壓環置于細胞濾網底部，用于將細胞濾網壓緊于樣品提 籃小格中。
[0008] 樣品提籃、提手，溶液槽，溶液槽蓋，壓環所用材質選用不與所用溶液發生反應的 聚丙烯PP ;細胞濾網所用材質選用聚丙烯PP所制的親水無紡布。
[0009] 本發明的另一個目的是提供所述的裝置在電鏡生物樣品批量處理中的應用，包括 組織塊樣品和細胞樣品的批量處理。
[〇〇1〇] 使用時，計算好細胞樣品份數，在相應的樣品提籃小格中放置細胞濾網，以壓環壓 緊，（如無細胞樣品則可省略）；在溶液槽中倒入第一步驟所需試劑，將樣品提籃置于溶液槽 中，調整溶液量使之高于提籃底部并液面高于樣品一定距離；將樣品置于批量化樣品提籃 中，其中分散的細胞樣品置于細胞專用組件中，做好標記(注意保持樣品置于相應溶液中， 不要干燥）；蓋好溶液槽蓋，置于所需溫度條件下；待時間到，將溶液槽中溶液換成下一步驟 所需溶液，至純包埋劑滲透之前步驟；將樣品取出，純包埋劑浸洗后置于裝有包埋劑的包埋 管中室溫滲透，聚合；本發明裝置細胞濾網為一次性使用，其余部件洗滌后可重復使用。 [〇〇11] 本發明設計合理，制作簡單，制作成本低廉，使用時大大節省了實驗操作時間，可 批量化制備各類生物電鏡樣品，包括塊狀組織樣品及分散的細胞樣品，實現平行實驗，可行 性極高。本發明裝置用于電鏡生物樣品批量處理，降低使用成本，既適用于組織塊樣品，也 適用于細胞樣品，從根本上解決了生物樣品批量化處理問題。 【專利附圖】
【附圖說明】
[0012] 圖1為裝置的結構示意圖。 圖2為樣品提籃的結構示意圖。
[0013] 圖3為樣品提籃的背面結構示意圖。
[0014] 圖4為溶液槽的結構示意圖。
[0015] 圖5為細胞濾網與壓環的結構示意圖。
[0016] 圖6是實施例2應用電鏡生物樣品批量組織處理裝置所制備的腎組織樣本。
[〇〇17] 圖7是染色制備的腎臟電鏡超薄切片樣本比較，其中圖A應用本發明結果，圖B是 應用傳統方法結果。 【具體實施方式】
[0018] 下面結合附圖和實施例對本發明作進一步的說明。
[0019] 實施例一 參見圖1-5, 一種電鏡生物樣品批量組織處理裝置，由樣品提籃1、提手2、溶液槽3、槽 蓋4,細胞濾網5和壓環6組成。樣品提籃1設有矩陣排列的帶編號小格，本實施例樣品提 籃1設置6*10個正方形小格，方格邊長6mm;樣品提籃高10mm;樣品提籃1底部為篩網結 構，篩網孔徑小于常規電鏡組織樣品直徑，本實施例選擇篩網孔徑0.3mm，使溶液順暢流動， 而電鏡組織樣品不會掉出；樣品提籃1兩邊設有提手2,便于拎取換液；樣品提籃1置于溶 液槽3內，溶液槽3長70mm，寬45mm，高20mm，帶有槽蓋4,可防止樣品吸收水分、試劑揮發 等。細胞專用濾網5用于放置細胞樣品，按需要數量置于樣品提籃1的小格中，壓環6外徑 與樣品提籃小格內徑切合，壓環置于細胞濾網5底部，用于將細胞濾網5壓緊于樣品提籃小 格中，本實例壓環6外徑為5. 2mm。
[0020] 樣品提籃1、提手2,溶液槽3,溶液槽蓋4,壓環6所用材質選用不與所用溶液發生 反應的聚丙烯PP，細胞專用濾網5所用材質選用聚丙烯pp所制親水無紡布。
[0021] 使用時步驟如下： (1)計算好細胞樣品份數，將細胞專用濾網5按細胞樣品份數放置于相應的樣品提籃 小格中，以壓環6壓緊，如樣品均為組織塊，則省去此步驟； (2) 在溶液槽3中倒入第一步驟所需試劑； (3) 將樣品提籃1置于溶液槽3中，調整溶液量使之高于樣品提籃1底部，并高于樣品 3-4mm左右； (4) 將樣品置于樣品提籃1中的小格中，分散的細胞樣品用移液器吸取置于細胞專用 組件中，做好標記(注意保持樣品置于相應溶液中，不要干燥）； (5) 蓋好溶液槽蓋4,置于所需溫度條件下； (6) 待時間到，將溶液槽3中溶液換成下一步驟所需溶液； (7) 重復第4、5步操作，至丙酮/包埋劑滲透步驟； (8) 將樣品取出，純包埋劑浸洗后置于裝有包埋劑的包埋管中室溫滲透，聚合。
[0022] 本發明裝置洗滌后可重復使用。本發明裝置用于電鏡生物樣品批量處理。
[0023] 實施例二 使用本電鏡生物樣品批量處理裝置及傳統電鏡生物樣品處理裝置處理批量樣品，步驟 如下： (1) 使用本電鏡生物樣品批量組織處理裝置，以實施例1步驟處理60個電鏡生物樣本 腎臟組織塊，作為批量裝置組； (2) 使用傳統處理裝置印pendorf管或包埋管處理60個電鏡生物樣本腎臟組織塊，作 為對照組； (3) 電子顯微鏡檢測比較兩組方法制作樣品效果，批量裝置組和對照組均結構清晰，分 辨率高。參見圖6是應用電鏡生物樣品批量組織處理裝置所制備的腎組織樣本，電鏡下其 淀粉樣變的特征性絲狀結構清晰可見。
[0024] 圖7是分別應用批量組織處理裝置（A)、傳統方法（B)所染色制備的腎臟電鏡超薄 切片樣本，電鏡下基底膜電子致密物結構均清晰可見。
[0025] (4)比較兩組方法制作樣品各個步驟中人工操作時間，批量裝置組相對對照組而 言每一步驟均節省大量人工操作時間，利于大批量操作。 表1
【權利要求】
1. 一種電鏡生物樣品批量處理裝置，其特征在于，由樣品提籃（1)、提手（2)、溶液槽 (3)、槽蓋（4)，細胞濾網（5)和壓環（6)組成，樣品提籃（1)設有矩陣排列的帶編號小格，樣 品提籃（1)底部為篩網結構，篩網孔徑小于常規電鏡組織樣品直徑，樣品提籃（1)兩邊設有 提手（2)，樣品提籃（1)置于溶液槽（3)內，溶液槽3帶有槽蓋（4)，細胞濾網（5)置于小格 內，其大小與樣品提籃（1)設有矩陣排列的帶編號小格相適，壓環（6)置于細胞濾網（5)底 部。
2. 根據權利要求1所述的一種電鏡生物樣品批量處理裝置，其特征在于，壓環（6)外徑 與樣品提籃小格內徑切合。
3. 根據權利要求1所述的一種電鏡生物樣品批量處理裝置，其特征在于，樣品提籃 (1)、提手（2)，溶液槽（3)，溶液槽蓋（4)，壓環（6)所用材質選用不與所用溶液發生反應的 聚丙烯PP ;細胞濾網（5)所用材質選用聚丙烯pp所制的親水無紡布。
4. 根據權利要求1所述的一種電鏡生物樣品批量處理裝置在電鏡生物樣品批量處理 中應用，所述生物樣品為組織塊樣品或細胞樣品。
【文檔編號】G01N1/28GK104062160SQ201410297642
【公開日】2014年9月24日 申請日期:2014年6月29日 優先權日:2014年6月29日
【發明者】王貝貝, 平澤鵬, 洪健 申請人:浙江大學