一種中藥凍干注射劑中有機溶劑殘留的測定方法

一種中藥凍干注射劑中有機溶劑殘留的測定方法
【專利摘要】本發明提供了一種中藥組合物凍干注射劑中有機溶劑殘留的測定方法，本發明中藥凍干注射劑原料包括人參和淫羊藿，臨床用于運動神經元疾病（肌萎縮側索硬化癥、進行性脊肌萎縮癥、進行性延髓麻痹、原發性側索硬化癥）、進行性肌營養不良癥、先天性肌病等疾病所致的肌肉萎縮及重癥肌無力的治療，本發明方法采用頂空氣相色譜法測定其中有機溶劑的殘留量，可以用于該產品的質量控制。
【專利說明】一種中藥凍干注射劑中有機溶劑殘留的測定方法
[0001] 本發明專利申請為分案申請，原案信息如下： 申請號：201010200771. 7 申請日：2010年06月17日 發明名稱：一種中藥凍干注射劑中有機溶劑殘留的測定方法。

【技術領域】
[0002] 本發明涉及一種中藥凍干注射劑中有機溶劑殘留的測定方法，屬于藥物制劑分析

【技術領域】。

【背景技術】
[0003] 中藥凍干注射劑在質量標準上，要求控制的項目比較多，其中，對于藥物分離過程 中使用了大孔吸附樹脂，根據藥品研發指導原則的要求需要對藥物的有機溶劑殘留進行檢 測控制，這對于藥物的安全性至關重要。
[0004] CN1785223A公開了一種治療肌肉萎縮及重癥肌無力的藥物及其制備方法，該專利 公開了該藥物的組方、制劑以及膠囊、片劑等制備方法；該專利還公開了該藥物的藥效學實 驗，證實該藥物具有增強正常運動神經元活力，促進神經突起生長，又能保護興奮性氨基 酸毒性損傷運動神經元，減少細胞凋亡，在維持中樞神經系統功能，延緩病情發展，提高患 者生存質量方面具有重要的臨床應用價值；該專利還公開了其中人參提取物的制備方法， "取人參藥材，用60-90%乙醇提取1-3次，第1次加藥材8-12倍量溶劑提取1-2小時，第2 次加6-10倍量溶劑提取1-2小時，第3次加6-10倍量溶劑提取0. 5-1小時；合并上述提取 液，趁熱濾過，減壓回收乙醇，并濃縮，放入不銹鋼桶內，加純水攪拌均勻，冷藏24-36h ;將 冷藏液取出，放至常溫，板框過濾器過濾，用少量水洗滌板框，濾液加純水稀釋，備用；取人 參濃縮藥液通過處理好的AB-8型大孔吸附樹脂柱，并分別用pH值8-9的氨水、20%乙醇、 80%乙醇洗脫，收集80%乙醇洗脫液。將80%洗脫液加入純水，配成50%醇溶液，通過中性 氧化鋁柱，收集洗脫液，再用少量50%乙醇洗滌柱子，合并洗脫液備用；取藥液加入活性炭， 回流加熱，煮沸20min，趁熱板框抽濾，收集濾液，濃縮，冷藏過夜；澄清板過濾，減壓干燥， 即得人參提取物。"該人參提取物即為人參總皂苷提取物；該專利還公開了淫羊藿提取物的 提取方法，"取淫羊藿藥材，加水煎煮提取2-5次，加水量為10-30倍，第一次提取時間定為 0. 5-2h，以后3次為0. 5-lh ;合并上述提取液，趁熱濾過，減壓濃縮，放入不銹鋼桶內，加乙 醇至藥液含醇濃度為70%,冷藏；過濾，濾液回收乙醇并濃縮，加水攪拌均勻，冷藏，過濾，備 用；取淫羊藿藥液通過處理好的AB-8型大孔吸附樹脂柱，并分別用純水、20%乙醇、50%乙醇 洗脫，收集50%乙醇洗脫液；洗脫液拌入適量硅藻土混勻，用無水乙醇提取2-5次，提取液 合并，回收乙醇并濃縮，濃縮液加入丙酮，并攪拌均勻，冷藏，過濾，沉淀加丙酮再同前處理2 次，合并3次濾液，回收溶劑，并濃縮，減壓干燥，即得淫羊藿提取物。"該淫羊藿提取物即為 淫羊藿總黃酮提取物。該專利未公開凍干注射劑制備及其含量測定方法。
[0005] 由CN1785223A公開的技術內容，可以看出，該中藥組合物分離過程中使用了大孔 吸附樹脂，因此有必要對其制備的制劑-凍干注射劑進行有機溶劑殘留的檢測。
[0006] 本專利申請即是在CN1785223A的基礎上做了進一步的研發，在研制該中藥組合 物的凍干注射劑的基礎上，制定了有機溶劑殘留的測定方法。


【發明內容】

[0007] 本發明的目的是提供一種中藥凍干注射劑有機溶劑殘留的測定方法。
[0008] 本發明所述中藥凍干注射劑是由如下重量份比例的原料制成： 人參總皂苷提取物30-70淫羊藿總黃酮提取物20-60。
[0009] 本發明采用頂空氣相色譜法，對該中藥凍干注射劑進行有機溶劑殘留的控制。本 發明測定方法可以有效的、可靠的對本發明所述中藥凍干注射劑進行質量控制，以確保其 安全有效。
[0010] 本發明測定方法中，頂空氣相色譜條件條件優選如下： 色譜柱：毛細管柱填料為聚乙二醇-20M，規格為30mX320ymX0. 25μπι ;程序升溫方 式為柱溫60°C，保持2 min，然后以10°C 升至80°C，保持5 min，再以15°C 升 至150°C，保持lmin ;FID檢測器溫度為240°C，進樣口溫度為200°C ;載氣為氮氣，流速1.0 mMmirr1 ;分流進樣，分流比為10:1 ;頂空進樣體積為lmL ;以水為溶劑平衡溫度為90°C，平 衡時間為20 min。 toon] 本發明測定方法中，供試品和對照品的配制方法如下： 供試品溶液取權利要求1所述中藥凍干注射劑〇. 4 g，精密稱定，置10 mL頂空進樣瓶 中，精密加水2 mL密封瓶口，振搖使溶解，即得； 對照品溶液取正己烷、苯、甲苯、鄰二甲苯、間二甲苯、對二甲苯、苯乙烯、二乙烯苯適 量，精密稱定，分別加 N，N-二甲基甲酰胺制成每mL含苯0. 20 mg,正己燒2. 36 mg,甲苯、鄰 二甲苯、間二甲苯、對二甲苯各2. 00 mg,苯乙烯2. 50 mg,二乙烯苯1. 00 mg的溶液，作為各 自單獨的對照品貯備溶液；分別量取各對照品貯備溶液苯、甲苯、鄰二甲苯、間二甲苯、對二 甲苯各10 mL,苯乙烯8 mL,正己燒8. 5 mL,二乙烯苯20 mL混合，加 N，N-二甲基甲酰胺定容 至IJ 100 mL，作為混合對照品貯備溶液，取混合對照品貯備液2ml，加水稀釋至100ml，作為對 照品溶液。
[0012] 本發明測定方法所述中藥凍干注射劑的原料重量比例優選為： 人參總皂苷提取物35淫羊藿總黃酮提取物55。
[0013] 還優選為： 人參總皂苷提取物65淫羊藿總黃酮提取物25。
[0014] 或者： 人參總皂苷提取物50淫羊藿總黃酮提取物40。
[0015] 為證實本發明方法可行性，發明人進行了如下的驗證試驗： 1、樣品制備： 人參總皂苷提取物50克淫羊藿總黃酮提取物40克 制備方法： a、將800克羥丙基-β -環糊精加水4000ml溶解制成20%的溶液，將淫羊藿總黃酮提取 物加水750ml(5. 33%)加熱溶解，分次緩慢加入羥丙基-β -環糊精溶液中，保溫80°C ± 1 °C， 動態攪拌包合，包合時間3小時，將人參總皂苷提取物加水100ml (50%)加熱溶解，加入包合 液中，繼續包合1小時； b、 加水調節溶液總量至6000ml，用10%的氫氧化鈉溶液調節PH到7. 5,加入活性炭24 克（即含活性炭0. 4%)，煮沸10分鐘，趁熱用澄清板框過濾，濾除活性炭，再用0. 22 μ m微孔 濾膜過濾，用水定容至6000ml ; c、 105°C熱壓滅菌30分鐘，取出，放至常溫，用0. 22 μ m微孔濾膜過濾，分裝至15ml西 林瓶，每支6ml，半壓塞，置凍干機中，-40°C預凍3小時； d、 按照預凍條件，在真空度為0. 05Pa狀態下，從-40°C至0°C升溫升華28小時，再從 0°C至30°C升溫干燥4. 5小時； e、 在升華和干燥的真空狀態下壓塞，出箱，壓鋁蓋，燈檢，包裝。
[0016] 2、方法學驗證 2. 1儀器和試劑 Agilent 6890N氣相色譜儀(包括FID氫火焰檢測器，7694E頂空進樣器，美國安捷倫公 司）；二乙烯苯(批號：CA12605400);苯(批號：C10535000);鄰二甲苯(批號：C17945000);間 二甲苯(批號：C17945100);對二甲苯(批號：C17945200);苯乙烯(批號：C16982000);正己烷 (批號：C14195500);以上試劑均為德國Labor Dr. Ehrensterfer. Gmbh生產。甲苯（色譜純， 天津光復精細化工）；N，N-二甲基甲酰胺(分析純，天津大茂化工)。水為無有機物蒸餾水。
[0017] 3方法與結果 3. 1色譜條件 色譜柱：AT-WAX毛細管柱聚乙二醇-20M，30mX320 μπιΧΟ. 25 μπι;程序升溫方式為柱 溫 60°C，保持 2 min，然后以 10 °C 升至 80°C，保持 5 min，再以 15°C 升至 150°C， 保持1 min ;FID檢測器溫度為240°C，進樣口溫度為200°C;載氣為氮氣，流速1. 0 mL €11-1 ; 分流進樣，分流比為10 : 1 ;頂空進樣體積為1 mL :以水為溶劑平衡溫度為90°C，平衡時間 為 20 min。
[0018] 3. 2溶液的制備 3. 2. 1對照品溶液 取正己烷、苯、甲苯、鄰二甲苯、間二甲苯、對二甲苯、苯乙烯、二乙烯苯適量，精密稱定， 分別加 N，N-二甲基甲酰胺制成每mL含苯0. 20 mg,正己燒2. 36 mg,甲苯、鄰二甲苯、間二甲 苯、對二甲苯各2. 00 mg,苯乙烯2. 50 mg,二乙烯苯1. 00 mg的溶液，作為各自單獨的對照品 貯備溶液。分別量取各對照品貯備溶液苯、甲苯、鄰二甲苯、間二甲苯、對二甲苯各10 mL，苯 乙烯8 mL，正己烷8. 5 mL，二乙烯苯20 mL混合，加 N，N-二甲基甲酰胺定容到100 mL，作為 混合對照品貯備溶液，取混合對照品貯備液2ml，加水稀釋至100ml，作為對照品溶液。
[0019] 3. 2. 2供試品溶液 取上述制備的本發明凍干注射劑內容物〇.4g，精密稱定，置10 mL頂空進樣瓶中，精密 加水2 mL密封瓶口，振搖使溶解，即得。
[0020] 3. 2. 3空白溶液 取按本品制備工藝制備的輔料空白樣品〇. 4 g，置10 mL頂空進樣瓶中，精密加水2 mL 密封瓶口，振搖使溶解，即得。
[0021] 3. 3系統適用性試驗 取"3. 2"項下方法制備的對照品溶液、供試品溶液和空白溶液，按"3. 1"項下的色譜條 件進行分析，記錄色譜圖。
[0022] 結果表明，正己烷、苯、甲苯、對二甲苯、間二甲苯、鄰二甲苯、苯乙烯、二乙烯苯各 峰與相鄰峰均達基線分離，分離度大于1.5,按鄰二甲苯峰計算，理論塔板數（N)不低于 100000。
[0023] 3. 4線性關系 分別取上述混合對照品貯備液〇. 8、1. 2、1. 6、2. 0、2. 4 mL，加 N，N-二甲基甲酰胺定容 至100 mL，制成濃度為1. 6、2. 4、3. 2、4. 0、4. 8μ g*mL-l的系列混合對照品溶液(其中苯為 0. 16、0. 24、0. 32、0. 40、0. 48μ g*mL-l)，分別精密量取2 mL置10 mL頂空進樣瓶中，密封，搖 勻，按"2. 1"項下的色譜條件進樣測定，以峰面積（A)對濃度（C)進行線性回歸，得回歸方 程，結果見表1。

【權利要求】
1. 一種中藥凍干注射劑中有機溶劑殘留的測定方法，該中藥凍干注射劑是由30-70重 量份的人參總皂苷提取物和20-60重量份的淫羊藿總黃酮提取物制成，其特征在于該方法 采用頂空氣相色譜法測定。
2. 根據權利要求1所述測定方法，其特征在于所述頂空氣相色譜法的色譜條件為： 色譜柱：毛細管柱填料為聚乙二醇-20M，規格為30mX 320 μ mXO. 25 μ m ;程序升溫方 式為柱溫60°C，保持2min，然后以10 °C 升至80°C，保持5min，再以15°C 升 至150°C，保持lmin ;FID檢測器溫度為240°C，進樣口溫度為200°C ;載氣為氮氣，流速1.0 mMmirr1 ;分流進樣，分流比為10:1 ;頂空進樣體積為lmL ;以水為溶劑平衡溫度為90°C，平 衡時間為20 min。
3. 根據權利要求1-2任一項所述的測定方法，其特征在于所述中藥凍干注射劑原料的 重量比例如下： 人參總皂苷提取物35淫羊藿總黃酮提取物55。
4. 根據權利要求1-2任一項所述的測定方法，其特征在于所述中藥凍干注射劑原料的 重量比例如下： 人參總皂苷提取物65淫羊藿總黃酮提取物25。
5. 根據權利要求1-2任一項所述的測定方法，其特征在于所述中藥凍干注射劑原料的 重量比例如下： 人參總皂苷提取物50淫羊藿總黃酮提取物40。
【文檔編號】G01N30/02GK104062373SQ201410295915
【公開日】2014年9月24日 申請日期:2010年6月17日 優先權日:2010年6月17日
【發明者】宋劍, 鄭亞杰, 賈繼明, 劉興國, 王貴金, 蔡燕, 裴彩云 申請人:河北以嶺醫藥研究院有限公司