基于鉑納米粒子催化電化學循環信號放大技術測定dna的電化學傳感器和測定dna的方法
【專利摘要】本發明涉及基于鉑納米粒子催化電化學循環信號放大技術測定DNA的電化學傳感器的制備方法及其應用，將發卡DNA1自組裝在鉑納米粒子修飾金電極表面，當有目標物DNA2存在時，由于目標物DNA2與組裝在金電極表面表面上的發卡DNA1部分互補配對，打開DNA1的發卡結構；然后另外一條發卡DNA3鏈通過競爭配對雜交取代目標鏈DNA2，目標鏈DNA2被釋放下來，釋放的目標鏈則繼續打開新的發卡結構，如此的循環作用實現了目標鏈DNA2的循環使用，結合制備的納米粒子電化學探針實現信號的放大，再利用制備好的電化學傳感器催化PAP與PQI之間的循環，實現了電化學信號的進一步放大，利用環伏安法或DPV測定電流信號強度，根據測得電流信號強度，實現對目標鏈DNA2測定。本發明的傳感器具有高的檢測靈敏度。
【專利說明】基于鉑納米粒子催化電化學循環信號放大技術測定DNA的電化學傳感器和測定DNA的方法
【技術領域】
[0001]本發明屬于分析化學和電化學傳感器領域，涉及基于鉬納米粒子催化電化學循環信號放大技術測定DNA的電化學傳感器和測定DNA的方法。
【背景技術】
[0002]DNA是生物體內的遺傳分子。DNA的檢測通常與各種疾病的診斷相關，因此DNA檢測具有重要的研究意義。目前由于DNA檢測技術的不斷進步，人們對其他生物分子如蛋白質、小分子物質的檢測也可以轉化為對DNA的檢測。DNA檢測的方法很多，比如增強納曼散射技術(Wei, X.，Su, S.，Guo, Y.，Jiang, X.，Zhong, Y.，Su, Y.，Fan, C.，Lee,S.T.and He, Y.(2013)A Molecular Beacon - Based Signal - Off Surface - EnhancedRaman Scattering Strategy for Highly Sensitive, Reproducible, and MultiplexedDNA Detection.Small, 9，2652-2652)，熒光技術(Su, S.，Wei, X.，Zhong, Y.，Guo, Y.，Su,Y., Huang, Q., Lee, S.-T., Fan, C.and He, Y.(2012) Silicon Nanowire-Based MolecularBeacons for High-Sensitivity and Sequence-Specific DNA Multiplexed Analysis.ACSNano, 6，2582-2590)，化學發光檢測(Hun, X.，Liu, F.，Mei, Z.H.(2013) Signal amplifiedstrategy based on target-1nduced strand release couplingcleavage of nickingendonuclease for the ultrasensitive detection of ochratoxin A.Biosensors andBioelectronics, 39:145-151)、電化學檢測(Kjaliman, T.Η.M., Peng, H., Soeller, C.Travas-Sejdic J.(2010)A CdTe nanoparticle-modified hairpin probe for direct andsensitive electrochemical detection of DNA)等。這些方法各有其有點，能不同程度的滿足對DNA檢測的要求，但方法或者靈敏度不高，或者這些方法復雜。與文獻報道的鉬納米粒子催化方法相比，本發明具有合成鉬納米粒子簡單，測定靈敏度高的優點。
【發明內容】
[0003]基于鉬納米粒子催化電化學循環信號放大技術測定DNA的電化學傳感器和測定DNA的方法。發明設計兩條發卡DNA，即DNAl和DNA3。將發卡DNAl自組裝在鉬納米粒子修飾金電極表面，當有目標物DNA2 (Target)存在時，由于目標物DNA2與組裝在金電極表面上的發卡DNAl部分互補配對，打開DNAl的發卡結構。然后另外一條發卡DNA3鏈通過競爭配對雜交取代目標鏈DNA2，目標鏈DNA2被釋放下來，釋放的目標鏈則繼續打開新的發卡結構，如此的循環作用實現了目標鏈DNA2的循環使用，結合制備的納米粒子電化學探針實現了信號的放大。另外，由于要檢測的目標物DNA2濃度一般都極低，所以本發明還提出了利用制備好的電化學傳感器催化PAP與PQI之間的循環，實現了電化學信號的進一步放大用于DNA的測定，從而實現了對目標鏈DNA2的聞靈敏度測定。
[0004]本發明是通過以下措施來實現的:基于鉬納米粒子催化電化學循環信號放大技術測定DNA的電化學傳感器和測定DNA的方法，其特征包括以下步驟:[0005](I)制備金納米粒子；
[0006](2) 二茂鐵修飾的金納米粒子(Fc-AuNPs)制備；
[0007](3)制備 DNA 修飾 Fc-AuNPs 探針；
[0008](4)制備鉬納米粒子；
[0009](5)制備電化學傳感器；
[0010](6)利用制備的傳感器對DNA進行測定,構建測定DNA的方法；
[0011](7)利用所建立的方法，對樣品進行檢測。
[0012]優選的，本發明所述的金納米粒子制備包括以下步驟:把容量瓶、棕色廣口瓶、圓底燒瓶等玻璃儀器用王水泡30min，用二次水沖洗烘干后備用。在IOOmL圓底燒瓶中加入50mL ImM的HAuCl4,并在攪拌下加熱至沸騰，然后快速加入5mL的38.8mM的檸檬酸鈉(Na3C6H5O7)，此時溶液由無色變為酒紅色。再加熱lOmin，攪拌15min，冷卻至室溫，轉移至棕色瓶中，并放于4°C溫度下儲存備用。
[0013]優選的，本發明所述的二茂鐵修飾的金納米粒子(Fc-AuNPs)制備包括以下步驟:把容量瓶、棕色廣口瓶、圓底燒瓶等制備和儲備金屬納米粒子的所用的玻璃儀器用王水(HCl =HNO3 = 1:3)浸泡30min，然后用二次水沖洗烘干備用。首先，將Img Fe加入到2mL0.1OmoI/LNHS 和 0.1OmoI/L EDC 的 0.20mol/L PBS (pH7.40)溶液中，將此混合溶液在室溫下劇烈攪拌反應2h。然后向混合溶液中加入2mL金納米粒子溶液，室溫下反應24h后離心(13000r/min，30min)，沉淀用PBS洗滌三次，以除去未反應的Fe，最后將沉淀用水溶解分散，即得二茂鐵修飾的金納米粒子(Fc-AuNPs)，在4°C下避光儲存備用
[0014]優選的，本發明所述的DNA修飾Fc-AuNPs探針制備包括以下步驟:取2mL的樣品管，依次加入 1.5 μ L500mM 的 Tris-HCl，6 μ LlOmM 的 TCEP，7.2 μ LlOO μ M 的DNA4, 7.2 μ LlOO μ M的巰基已胺，室溫放置30min后加入ImL制得的Fc-AuNPs，室溫下反應12h。然后在10000r/min下離心30min，棄去上清液，加入800 μ L Tris-HCl緩沖液洗3次，并用Tris-HCl緩沖溶液定容至lmL，即得DNA修飾Fc-AuNPs探針(即電化學探針)，4°C儲存備用。
[0015]優選的，本發明所述的鉬納米粒子制備包括以下步驟:把合成要用到的玻璃儀器如容量瓶、棕色廣口瓶、圓底燒瓶等用王水(HCl =HNO3 = 1:3)浸泡洗凈，用二次水沖洗烘干后備用。在IOOmL圓底燒瓶中加入50mLlmM的HPtCl6,并在攪拌下加熱至沸騰，然后快速加入5mL的38.8mM的檸檬酸鈉(Na3C6H5O7)，此時溶液由黃色變為棕色。再加熱lOmin，攪拌30min，冷卻至室溫，即得鉬納米粒子(PtNPs)，轉移至棕色瓶中，并放于4°C溫度下儲存備用。
[0016]優選的，本發明所述的電化學傳感器的制備包括以下步驟:(I)制備鉬納米粒子修飾金電極:取金電極經0.2 μ m，0.03 μ m和0.05 μ m的a -Al2O3拋光粉拋光后，用二次蒸餾水沖洗干凈，然后在超聲波水浴中超聲5min，用高純氮氣吹干。取5?20 μ L制備的PtNPs滴涂在金電極表面，置于避光處自然晾干，用二次水沖洗電極，得鉬納米粒子修飾的金電極(PtNPs/GE) ； (2)DNA的預處理:進行發卡DNA的預處理。取一定量的0.1?10 μ M的巰基DNAl (或DNA3)于2mL離心管中，置于95 °C恒溫水浴槽中加熱5min，取出后立即置于冰水中冷卻Imin即得到發卡DNAl ； (3)制備電化學傳感器:取5?30 μ L經過預處理的發卡DNAl滴涂在PtNPs/GE表面，4°C下使其自組裝反應24h。接著取10 μ LlOO μ M的巰基已醇封閉，得電化學傳感器。
[0017]優選的，一種對DNA2檢測方法，其特征是:取5?20 μ L目標物DNA2滴加到電化學傳感器的電極表面，37°C下孵育30min。取5?20 μ L發卡DNA3滴加到電極表面。37°C下孵育4h,孵育完成后用PBS沖洗兩次。最后,取5?50 μ L制備的電化學探針滴加到電極表面，37°C下繼續孵育lh。將電極插入0.5mL50mM的硼氫化鈉，1.75mL20mM的PNP和3.25mLPBS混合液中，采用三電極系統檢測，工作電極為金電極或修飾金電極，對電極為鉬絲電極，參比電極為Ag/AgCl電極，利用循環伏安法或DPV測定電流信號強度，根據測得電流信號強度的變化，計算目標鏈DNA2的濃度。
[0018]根據電流信號強度對DNA2進行定量，根據標準溶液濃度和信號關系作圖得標準曲線。
[0019]具體實驗原理如圖1所示。
[0020]不同電極測定目標物DNA2時的電流信號強度比較如圖2所示。
[0021 ] 目標物DNA2的標準曲線如圖3所示。
[0022]分析性能如下:
[0023]本發明研究了不同濃度目標物DNA2與電流信號強度之間的關系，得到了檢測目標物DNA2的標準曲線，線性范圍及線性方程。
[0024]當目標物DNA2的濃度在0.2fM_700fM之間時，隨著目標物DNA2濃度的變化，電流信號強度有明顯變化。經計算得到檢測目標物DNA2的非線性方程為y = -0.003x2+3.783x+21.90(7是體系的電流信號強度3是目標物0嫩2的濃度，單位€1;11= 12，η表示同一濃度測定次數R = 0.9987)。目標物DNA2的濃度在0.2fM?10.0fM范圍內與電流信號強度呈一定的線性關系，其線性回歸方程是y = 7.401X+1.001，線性相關系數R = 0.9990，檢測限是0.1fM(3 σ )。該測定方法的精密度通過對濃度為IOfM的目標物DNA2進行11次平行測定而計算得出，相對標準偏差分別為3.8%，表明本發明的測定方法有較好的重現性。
[0025]另外，金電極不經過鉬納米粒子修飾，利用裸金電極直接固定發卡DNA1，其他步驟相同按本發明的方法制備電化學傳感器，然后利用其對目標物DNA2進行檢測，測定的檢測限為150fM。表明本發明提出的基于鉬納米粒子催化電化學循環信號放大技術測定DNA的電化學傳感器和測定DNA的方法具有高的靈敏度。所制備的鉬納米粒子修飾電極信號強度(1.520 μ A)是金電極不經過鉬納米粒子修飾電極信號強度(0.0727 μ Α)的23倍(空白信號為0.0662 μ Α)(圖2)，增強效果較文獻報道6.66倍的效果要好(In situamplified electronic signal for determination of low—abundance proteins couplingwith nanocatalyst-based redox cycling.Juan Tang, Jun Zhou, Qunfang Li，DianpingTang, Guonan Chen and Huanghao YangChem.Commun.，2013，49，1530—1532)。
【專利附圖】
【附圖說明】
[0026]圖1.基于鉬納米粒子催化電化學循環信號放大技術測定DNA的電化學傳感器和測定DNA的原理圖。
[0027]圖2.不同電極測定目標物DNA2時的電流信號強度比較圖。㈧裸金電極對目標物DNA2的響應；(B)鉬納米粒子修飾電極對不含目標物DNA2的響應；(C)鉬納米粒子修飾電極對含目標物DNA2的響應。[0028]圖3.目標物DNA2的標準曲線，橫坐標x是目標物DNA2濃度，單位是fM，縱坐標y是體系的電流信號強度。
【具體實施方式】
[0029]下面的實例將具體說明本發明的操作方法，但不能作為對本發明的限定。
[0030]實例:基于鉬納米粒子催化電化學循環信號放大技術測定DNA的電化學傳感器和測定DNA的方法。
[0031]1.實驗部分
[0032]1.1儀器與試劑
[0033]1.1.1儀器設備
[0034]CHI660B電化學工作站，上海辰華儀器公司；Anke-TGL_16C飛翁牌高速離心機，上海市安亭科學儀器廠；HS-3D型酸度計，上海雷磁儀器廠；實驗用三電極系統:金電極及修飾金電極為工作電極，Ag/AgCl (飽和KCl)電極為參比電極，鉬絲電極為對電極。
[0035]1.1.2 試劑
[0036]三(2-羧乙基)膦鹽酸鹽(TCEP)，氯金酸(HAuCl4)，氯鉬酸(H2PtCl6)，檸檬酸三鈉(Na3C6H5O7),氧化鋁粉末U-Al2O3)均購自上海阿拉丁試劑公司；巰基已醇(HS- (CH2) 6-0H)，巰基已胺HS- (CH2) 6_NH2，三(羥甲基)氨基甲烷(Tri s)，對硝基苯酚(PNP)，二茂鐵甲酸(Fe)，硼氫化鈉(NaBH4),均購自國藥集團化學試劑有限公司；N_羥基琥珀酰亞胺(NHS)和1-乙基-3-(3-二甲基氨丙基)-碳化二亞胺(EDC)購于Sigma。
[0037]PBS緩沖溶液是0.20M, pH = 7.4，其的配制方法是稱取0.2g KH2PO4,8.0g NaCl、
2.9g Na2HPO4.12H20 及 0.2g KCl 溶解于 IL 水中。
[0038]Tris-HCl緩沖溶液配置，稱1.576g Tris用IOOOmL蒸餾水溶解，用6M的NaOH調pH到8.2，即得。
[0039]所用人工合成DNA序列(北京賽百盛生物工程有限公司購得)如下:
[0040]優選的DNA4 部分序列為:5' -TTT TTT ATT CGA TCC GGT GCT CTT ATG CCC-HS-3'
[0041]優選的DNA2 部分序列為:5’ -CAA TAA CTA CCG GGC ATT ACT GGC CTT-3’ ；
[0042]優選的DNAl 部分序列為:5’-SH-AAA GCC AGT AAT GCC CGG TAG TTA TTC CATCGT GTACAA TAA CTA CCG GGC ATA AGA GCA CCC TTG TAC-3，
[0043]優選的DNA3部分序列為:5’_TAG TTA TTG TAC ACG ATG GAA TAA CTA CCG GGCATC CATCGT GTA C-3，；。
[0044]1.2金納米粒子的制備
[0045]把容量瓶、棕色廣口瓶、圓底燒瓶等玻璃儀器用王水泡30min，用二次水沖洗烘干后備用。在IOOmL圓底燒瓶中加入50mL，ImM的HAuCl4，并在攪拌下加熱至沸騰，然后快速加入5mL的38.8mM的朽1檬酸鈉(Na3C6H5O7),此時溶液由無色變為酒紅色。再加熱IOmin,攪拌15min，冷卻至室溫，轉移至棕色瓶中，并放于4°C溫度下儲存備用。
[0046]1.3 二茂鐵修飾的金納米粒子(Fc-AuNPs)的制備
[0047]把容量瓶、棕色廣口瓶、圓底燒瓶等制備和儲備金屬納米粒子的所用的玻璃儀器用王水(HCl =HNO3 = 1:3)浸泡30min，然后用二次水沖洗烘干備用。首先，將Img Fe加入到2mL含0.1OmoI/L NHS和0.1OmoI/L EDC的PBS溶液中，將此混合溶液在室溫下劇烈攪拌反應2h。然后向混合溶液中加入200mL金納米粒子溶液,室溫下反應24h后離心(13000r/min，30min)，沉淀用PBS洗滌三次，以除去未反應的Fe，最后將沉淀用水溶解分散，即得二茂鐵修飾的金納米粒子(Fc-AuNPs)，在4°C下避光儲存備用。
[0048]1.4DNA修飾Fc-AuNPs探針的制備
[0049]取2mL 的樣品管，依次力卩入 1.5μ L500mM 的 Tris-HCl，6 μ LlOmM 的 TCEP,
7.2 μ LlOO μ M的DNA4，7.2 μ LlOO μ M的巰基已胺，室溫放置30min后加入ImL制得的Fc-AuNPs，室溫下反應12h。然后在100001'/1^11下離心301^11，棄去上清液，加入80(^1^Tris-HCl緩沖液洗3次，并用Tris-HCl緩沖溶液定容至lmL，即得DNA修飾Fc-AuNPs探針(即電化學探針)，4°C儲存備用。
[0050]1.5鉬納米粒子的制備
[0051]把合成要用到的玻璃儀器如容量瓶、棕色廣口瓶、圓底燒瓶等用王水(HCl =HNO3 =1:3)浸泡洗凈，用二次水沖洗烘干后備用。在IOOmL圓底燒瓶中加入50mL，ImM的HPtCl6,并在攪拌下加熱至沸騰，然后快速加入5mL的38.8mM的檸檬酸鈉(Na3C6H5O7)，此時溶液由黃色變為棕色。再加熱lOmin，攪拌30min，冷卻至室溫，即得鉬納米粒子(PtNPs)，轉移至棕色瓶中，并放于4°C溫度下儲存備用。
[0052]1.6電化學傳感器的制備
[0053]1.6.1鉬納米粒子修飾金電極的制備
[0054]取金電極經0.2μL?，0.03μπι和0.05μπι的a-Al2O3拋光粉拋光后，用二次蒸餾
水沖洗干凈，然后在超聲波水浴中超聲5min，用高純氮氣吹干。取10 μ L制備的PtNPs滴涂在金電極表面，置于避光處自然晾干，用二次水沖洗電極，得鉬納米粒子修飾的金電極(PtNPs/GE)。1.6.2DNA 的預處理
[0055]進行發卡DNA的預處理。取一定量的10-6Μ的巰基DNAl (或DNA3)于2mL離心管中，置于95°C恒溫水浴槽中加熱5min，取出后立即置于冰水中冷卻Imin即得到發卡DNA-Hl。
[0056]1.6.3電化學傳感器的制備
[0057]取10μ L經過預處理的發卡DNAl滴涂在PtNPs/GE表面，4°C下使其自組裝反應24h。接著取10 μ L，100 μ M的巰基已醇封閉，得電化學傳感器
[0058]L7DNA 檢測
[0059]取IOyL目標物DNA2滴加到電化學傳感器的電極表面，37°C下孵育30min。取10 μ L發卡DNA3滴加到電極表面。37°C下孵育4h，孵育完成后用PBS沖洗兩次。最后，取IOyL制備的電化學探針滴加到電極表面，37°C下繼續孵育lh。將電極插入0.5mL50mM的硼氫化鈉，1.75mL20mM的PNP和3.25mL PBS混合液中，采用三電極系統檢測，工作電極為金電極或修飾金電極，對電極為鉬絲電極，參比電極為Ag/AgCl電極，通過循環伏安法或DPV測得電流的變化，根據標準溶液濃度和信號關系作圖得標準曲線。
[0060]1.8樣品分析
[0061]將含目標物DNA2的樣品溶液按步驟1.7方法進行實驗，根據電流信號強度和步驟
1.7所得標準曲線可以獲取目標物DNA2含量。
[0062]根據發明的方法對目標物DNA2含量進行了測定，并采用標準加入法對方法進行了評價，樣品測定回收率為98.9 - 104.3%，測定結果見表1，本發明的方法在目標物DNA2檢測中具有精密度高的特點。[0063]表1.樣品分析測定結果
[0064]
【權利要求】
1.基于鉬納米粒子催化電化學循環信號放大技術測定DNA的電化學傳感器的制備方法，其特征包括以下步驟: (1)制備鉬納米粒子修飾金電極:取金電極經0.2 μ m, 0.03 μ m和0.05 μ m的a -Al2O3拋光粉拋光后，用二次蒸餾水沖洗干凈，然后在超聲波水浴中超聲5min，用高純氮氣吹干；取5~20 μ L制備的PtNPs滴涂在金電極表面，置于避光處自然晾干，用二次水沖洗電極，得鉬納米粒子修飾的金電極(PtNPs/GE)； (2)DNA的預處理:進行發卡DNA的預處理，取一定量的0.1~10 μ M的巰基DNAl (或DNA3)于2mL離心管中，置于95°C恒溫水浴槽中加熱5min，取出后立即置于冰水中冷卻Imin即得到發卡DNAl ； (3)制備電化學傳感器:取5~30μ L經過預處理的發卡DNAl滴涂在PtNPs/GE表面，.4°C下使其自組裝反應24h ;接著取10 μ LlOO μ M的巰基已醇封閉，得電化學傳感器； 其中:所述的鉬納米粒子制備包括以下步驟:把合成要用到的玻璃儀器如容量瓶、棕色廣口瓶、圓底燒瓶等用王水(HCl =HNO3 = 1:3)浸泡洗凈，用二次水沖洗烘干后備用；在IOOmL圓底燒瓶中加入50mL，0.1~50mM的HPtCl6,并在攪拌下加熱至沸騰，然后快速加入5mL的38.8mM的檸檬酸鈉(Na3C6H5O7)，此時溶液由黃色變為棕色；再加熱lOmin，攪拌30min，冷卻至室溫，即得鉬納米粒子(PtNPs)，轉移至棕色瓶中，并放于4°C溫度下儲存備用。
2.一種利用權利要求1制備的電化傳感器檢測DNA含量的方法，其特征在于:取5~20 μ L目標物DNA2滴加到電化學傳感器的電極表面，37°C下孵育30min ;取5~20 μ L發卡DNA3滴加到電極表面；37°C下孵育4h，孵育完成后用PBS沖洗兩次；最后，取5~50 μ L制備的電化學探針滴加到電極表面，37°C下繼續孵育Ih ;將電極插入0.5mL50mM的硼氫化鈉，1.75mL20mM的PNP和3.25mL PBS混合液中，采用三電極系統檢測，工作電極為金電極或修飾金電極，對電極為鉬絲電極，參比電極為Ag/AgCl電極，利用循環伏安法或DPV測定電流信號強度，根據標準溶液濃度和信號關系作圖得標準曲線； 所述的 DNAl 的部分序列為:5’ -SH-AAA GCC AGT AAT GCC CGG TAG TTA TTC CATCGT GTACAA TAA CTA CCG GGC ATA AGA GCA CCC TTG TAC-3’ ； 所述的 DNA2 的部分序列為:5’ -CAA TAA CTA CCG GGC ATT ACT GGC CTT-3’ ；
所述的 DNA3 的部分序列為:5’ -TAG TTA TTG TAC ACG ATG GAA TAA CTA CCG GGCATC CATCGT GTA C-3，； 所述的 DNA4 的部分序列為:5' -TTT TTT ATT CGA TCC GGT GCT CTT ATGCCC-HS-3'。
3.根據權利要求1所述的電化學傳感器在檢測DNA含量中的應用。
4.根據權利要求1所述的電化學傳感器，其中所述的金納米粒子制備包括以下步驟:把容量瓶、棕色廣口瓶、圓底燒瓶等玻璃儀器用王水泡30min，用二次水沖洗烘干后備用；在IOOmL圓底燒瓶中加入50mLlmM的HAuCl4,并在攪拌下加熱至沸騰，然后快速加入5mL的38.8mM的檸檬酸鈉(Na3C6H5O7)，此時溶液由無色變為酒紅色；再加熱lOmin，攪拌15min，冷卻至室溫，轉移至棕色瓶中，并放于4°C溫度下儲存備用。
5.一種利用權利要求2檢測DNA含量的方法，其中所述的二茂鐵修飾的金納米粒子(Fc-AuNPs)制備包括以下步驟:把容量瓶、棕色廣口瓶、圓底燒瓶等制備和儲備金屬納米粒子的所用的玻璃儀器用王水(HCl =HNO3= 1:3)浸泡30min，然后用二次水沖洗烘干備用；首先，將 Img Fe 加入到含 2mL0.1OmoI/L NHS 和 0.1OmoI/L EDC 的 0.20mol/L PBS (pH7.40)溶液中，將此混合溶液在室溫下劇烈攪拌反應2h ;然后向混合溶液中加入2mL金納米粒子溶液，室溫下反應24h后離心(13000rpm/min, 30min),沉淀用PBS洗漆三次，以除去未反應的Fe，最后將沉淀用水溶解分散，即得二茂鐵修飾的金納米粒子(Fc-AuNPs)。
6.一種利用權利要求2檢測DNA含量的方法，其中所述的DNA修飾Fc-AuNPs探針制備包括以下步驟:取2mL的樣品管，依次加入1.5μ L500mM的Tris-HCl，6 μ LlOmM的TCEP，7.2 μ LlOO μ M的DNA4, 7.2 μ LlOO μ M的巰基已胺，室溫放置30min后加入ImL制得的Fc-AuNPs，室溫下反應12h ;然后在10000r/min下離心30min，棄去上清液，加入800 μ LTris-HCl緩沖液洗3次，并用Tris-HCl緩沖溶液定容至lmL，即得DNA修飾Fc-AuNPs探針(即電化學探針)，4°C儲存備用。
7.根據權利要求2檢測DNA含量的方法，其特征在于所述PBS緩沖溶液是0.20M, pH =7.4，其的配制方法是稱取 0.2g KH2PO4,8.0g NaCl,2.9g Na2HPO4.12H20 及 0.2g KCl 溶解于IL水中，即得。
8.根據權利要求6 所述的DNA修飾Fc-AuNPs探針制備，其特征在于所述Tris-HCl緩沖溶液配置，稱1.576g Tris用1000mL蒸餾水溶解，用6M的NaOH調pH到8.2，即得。
【文檔編號】G01N27/48GK104007152SQ201410273296
【公開日】2014年8月27日 申請日期:2014年6月18日 優先權日:2014年6月18日
【發明者】混旭, 柏莉, 謝國亮 申請人:青島科技大學