一種快速定量白酒中氰化物的方法
【專(zhuān)利摘要】一種快速定量白酒中氰化物的方法，屬于白酒分析檢測(cè)【技術(shù)領(lǐng)域】。本發(fā)明采用兩步反應(yīng)對(duì)白酒中的氰化物進(jìn)行顯色，首先用氧化劑將白酒中的CN–氧化成CN+，再用顯色劑與CN+反應(yīng)生成有色物質(zhì)，然后用分光光度計(jì)測(cè)定其吸光度；其中氧化劑為N–氯代琥珀酰亞胺–琥珀酰亞胺，顯色劑為巴比妥酸–吡啶試劑。本發(fā)明建立的方法的檢測(cè)限可低至7.10μg/L，線(xiàn)性相關(guān)系數(shù)大于0.99，回收率為93%~98%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差在2%以?xún)?nèi)。說(shuō)明白酒中的氰化物可利用本方法檢測(cè)，操作簡(jiǎn)單，檢測(cè)靈敏度高，精確性好，結(jié)果直觀可靠；可利用該檢測(cè)方法對(duì)不同香型、不同年份、不同等級(jí)的白酒成品酒和原酒中的氰化物進(jìn)行檢測(cè)，從而對(duì)白酒的安全性進(jìn)行更好的控制。
【專(zhuān)利說(shuō)明】一種快速定量白酒中氰化物的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種快速定量白酒中氰化物的方法，具體涉及一種應(yīng)用N-氯代琥珀酰亞胺-琥珀酰亞胺試劑為氧化劑、巴比妥酸-吡啶試劑為顯色劑，對(duì)白酒中的氰化物進(jìn)行顯色反應(yīng)，然后運(yùn)用分光光度計(jì)測(cè)定吸光度的方法定量白酒中氰化物的含量，本發(fā)明屬于白酒分析檢測(cè)【技術(shù)領(lǐng)域】。
【背景技術(shù)】
[0002]氰化物是嚴(yán)重危害食品安全的劇毒化合物，可通過(guò)呼吸道、消化道及皮膚進(jìn)入人體內(nèi)。其毒性主要由在體內(nèi)解離出的CN_引起，CN_與細(xì)胞色素氧化酶aa3中的Fe3+結(jié)合，使酶喪失活性，導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)呼吸中斷，阻斷電子傳遞和氧化磷酸化，從根本上抑制三磷腺苷的合成，從而抑制了細(xì)胞內(nèi)氧的利用，造成機(jī)體缺氧以致產(chǎn)生中毒效應(yīng)。
[0003]氰化物也是酒類(lèi)的一項(xiàng)重要的食品安全檢測(cè)指標(biāo)。為了保障食品安全和人民的身體健康，維護(hù)中國(guó)白酒的聲譽(yù)，中國(guó)白酒中氰化物的研究十分必要。而為了控制白酒中氰化物的含量，研究其方便、快速、準(zhǔn)確的定量方法十分必要。
[0004]目前氰化物的檢測(cè)方法主要有分光光度法、熒光光度法、磷光法、原子吸收光譜法、色譜法、電化學(xué)法、流動(dòng)注射分析法等。目前，檢測(cè)酒中氰化物含量的方法在國(guó)內(nèi)主要有以下幾種，化學(xué)分析法、光譜法、色譜法、電化學(xué)方法和其他方法。但是各種方法都各有其優(yōu)缺點(diǎn)，例如，化學(xué)分析法雖然不需要昂貴的儀器設(shè)備，操作過(guò)程簡(jiǎn)單易行，條件容易實(shí)現(xiàn)，但是其精度不高；色譜法所需儀器較昂貴，不適合較小的城市使用和現(xiàn)場(chǎng)的快速監(jiān)測(cè)；電化學(xué)法在處理電極時(shí)的具體操作繁瑣，而且干擾因素較多，故在實(shí)際應(yīng)用中也不是很理想；化學(xué)發(fā)光測(cè)定法，間隔流動(dòng)分析儀測(cè)定法雖然顯示出準(zhǔn)確性較高、相關(guān)系數(shù)在>0.9995以上，變異系數(shù)小、人為誤差基本可消除的多項(xiàng)優(yōu)勢(shì)，可以較好的保證分析結(jié)果的準(zhǔn)確性，但在實(shí)際工作中不常用，難以推廣到所有城市及縣市。
[0005]白酒中的氰化物最經(jīng)典的檢測(cè)方法是國(guó)標(biāo)GB5009.48 - 2003規(guī)定了蒸餾酒與配制酒衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)的檢測(cè)方法，但是該方法中由于對(duì)化學(xué)試劑的用量和濃度有明確的限制，在調(diào)節(jié)溶液的pH值只有0.8mL的量，這樣在做實(shí)驗(yàn)的會(huì)很容易超出10mL。同時(shí)在實(shí)驗(yàn)中樣品中加入異煙酸-吡唑啉酮溶液時(shí)會(huì)出現(xiàn)白色渾濁現(xiàn)象，干擾測(cè)定樣品中氰化物的濃度。經(jīng)過(guò)查找相關(guān)的資料知道干擾物質(zhì)是醛、高級(jí)醇等物質(zhì)。
[0006]本發(fā)明采用分光光度法快速定量白酒中的氰化物，不需要昂貴的儀器設(shè)備，操作過(guò)程簡(jiǎn)單易行，條件容易實(shí)現(xiàn)，且該反應(yīng)依賴(lài)于CN+和吡啶生成戊烯二醛的特定反應(yīng)和隨后的高選擇性偶聯(lián)反應(yīng)，測(cè)定過(guò)程中的可能干擾因素較少，測(cè)定的靈敏度和精確度較高。
【發(fā)明內(nèi)容】
[0007]本發(fā)明的目的是建立白酒中氰化物的定量分析方法，包括化學(xué)反應(yīng)中氧化劑和顯色劑的添加量、反應(yīng)時(shí)間的優(yōu)化及可能干擾條件的確認(rèn)，得到一套完整的快速定量白酒中氰化物的方法。本方法具有操作簡(jiǎn)單，檢測(cè)靈敏度高，精確性好，結(jié)果直觀可靠等優(yōu)點(diǎn)。[0008]本發(fā)明的技術(shù)方案，一種利用分光比色法快速定量白酒中氰化物的方法，采用兩步反應(yīng)對(duì)白酒中的氰化物進(jìn)行顯色，首先用氧化劑N-氯代琥珀酰亞胺-琥珀酰亞胺試劑將白酒中的CN_氧化成CN+，再用顯色劑巴比妥酸-吡啶試劑與CN+反應(yīng)生成有色物質(zhì)，然后用分光光度計(jì)測(cè)定其吸光度；該方法包括如下步驟:
(1)溶液配制:配制400mg/L的氰化鉀貯存液，4°C冰箱保存；氧化劑:將5g琥珀酰亞胺溶于150mL實(shí)驗(yàn)專(zhuān)用水中，再加入0.5g N-氯代琥珀酰亞胺并攪拌至溶解，然后用實(shí)驗(yàn)專(zhuān)用水定容至500mL，4°C下避光保存；顯色劑:將3g巴比妥酸溶于15~20mL實(shí)驗(yàn)專(zhuān)用水中，并加入15mL吡啶，而后用實(shí)驗(yàn)專(zhuān)用水稀釋至50mL，4°C下避光保存，溶液的pH值是;所述實(shí)驗(yàn)專(zhuān)用水為超純水煮沸5~10 min后冷卻；
(2)白酒樣品預(yù)處理:將酒精度在38%vol以上的酒樣用實(shí)驗(yàn)專(zhuān)用水或酒精調(diào)節(jié)至酒精度為46%vol ;酒精度15%~37%νο1的酒樣用實(shí)驗(yàn)專(zhuān)用水或酒精調(diào)節(jié)至酒精度為30%vol ;酒精度在15%vol以下的酒樣不進(jìn)行處理；
(3)顯色反應(yīng):量取20mL經(jīng)步驟(2)預(yù)處理的白酒樣品，向其中加入ImL步驟(1)制備的氧化劑N-氯代 琥珀酰亞胺-琥珀酰亞胺和I mL顯色劑巴比妥酸-吡唆，在25 ± 0.5°C下反應(yīng)25 min,然后在575nm下測(cè)定其吸光度；
(4)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的建立:分別繪制0、30%、46%vol酒精度下的三條標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)；將400mg/L的氰化鉀貯存液作為最高濃度，用實(shí)驗(yàn)專(zhuān)用水將其稀釋至2mg/L作為標(biāo)準(zhǔn)使用液，并用相應(yīng)酒精度的溶液將氰化鉀標(biāo)準(zhǔn)使用液稀釋成一系列梯度標(biāo)準(zhǔn)液；取上述梯度標(biāo)準(zhǔn)液各20mL,向其中加入ImL氧化劑N-氯代琥珀酰亞胺-琥珀酰亞胺和I mL顯色劑巴比妥酸-批啶，在25±0.5°C下反應(yīng)25 min，然后在575nm下測(cè)定其吸光度；并以吸光度值為橫坐標(biāo)，相應(yīng)的氰化鉀溶液濃度為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)；
(5)白酒樣品的測(cè)定:量取20mL經(jīng)步驟(2)預(yù)處理的白酒樣品，向其中加入ImL氧化劑N-氯代琥珀酰亞胺-琥珀酰亞胺和I mL顯色劑巴比妥酸-吡唆，在25±0.5°C下反應(yīng)25min，然后在575nm下測(cè)定其吸光度，對(duì)比步驟(4)繪制的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，得到白酒樣品中氰化物的含量。
[0009]本發(fā)明的有益效果:本發(fā)明建立的方法定量白酒中氰化物的檢測(cè)限可低至
7.10 μ g/L，線(xiàn)性相關(guān)系數(shù)大于0.99，回收率為93%~98%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差在2%以?xún)?nèi)。說(shuō)明白酒中的氰化物可利用本方法檢測(cè)，操作簡(jiǎn)單，檢測(cè)靈敏度高，精確性好，結(jié)果直觀可靠；可利用該檢測(cè)方法對(duì)不同香型、不同年份、不同等級(jí)的白酒成品酒和原酒中的氰化物進(jìn)行檢測(cè)，從而對(duì)白酒的安全性進(jìn)行更好的控制。
【專(zhuān)利附圖】
【附圖說(shuō)明】
[0010]圖1不同酒精度對(duì)氰化鉀的響應(yīng)情況的影響曲線(xiàn)。
[0011]圖2不同酒精度下的定量氰化物的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。
【具體實(shí)施方式】
[0012]實(shí)施例1醬香型白酒成品酒中氰化物定量
(I)溶液配制:配制400mg/L的氰化鉀貯存液，4°C冰箱保存；氧化劑:將5g琥珀酰亞胺溶于150mL實(shí)驗(yàn)專(zhuān)用水中，再加入0.5g N-氯代琥珀酰亞胺并攪拌至溶解，然后用實(shí)驗(yàn)專(zhuān)用水定容至500mL，4°C下避光保存；顯色劑:將3g巴比妥酸溶于15~20mL實(shí)驗(yàn)專(zhuān)用水中，并加入15mL吡啶，而后用實(shí)驗(yàn)專(zhuān)用水稀釋至50mL，4°C下避光保存，溶液的pH值是;所述實(shí)驗(yàn)專(zhuān)用水為超純水煮沸5~10 min后冷卻；
(2)白酒樣品預(yù)處理:將酒精度在38%vol以上的酒樣用實(shí)驗(yàn)專(zhuān)用水或酒精調(diào)節(jié)至酒精度為46%vol ;酒精度15%~37%νο1的酒樣用實(shí)驗(yàn)專(zhuān)用水或酒精調(diào)節(jié)至酒精度為30%vol ;酒精度在15%vol以下的酒樣不進(jìn)行處理；
(3)顯色反應(yīng):量取20mL經(jīng)步驟(2)預(yù)處理的樣品，向其中加入ImL步驟(1)制備的氧化劑N-氯代琥珀酰亞胺-琥珀酰亞胺和I mL顯色劑巴比妥酸-吡啶，在25 ± 0.5°C下反應(yīng)25 min,然后在575nm下測(cè)定其吸光度；
(4)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的建立:分別繪制0、30%、46%vol酒精度下的三條標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)；將400mg/L的氰化鉀貯存液作為最高濃度，用實(shí)驗(yàn)專(zhuān)用水將其稀釋至2mg/L作為標(biāo)準(zhǔn)使用液，并用相應(yīng)酒精度的溶液將氰化鉀標(biāo)準(zhǔn)使用液稀釋成一系列梯度標(biāo)準(zhǔn)液；取上述梯度標(biāo)準(zhǔn)液各20mL,向其中加入ImL氧化劑N-氯代琥珀酰亞胺-琥珀酰亞胺和I mL顯色劑巴比妥酸-批啶，在25±0.5°C下反應(yīng)25 min，然后在575nm下測(cè)定其吸光度；并以吸光度值為橫坐標(biāo)，相應(yīng)的氰化鉀溶液濃度為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)；繪制的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)如圖2所示，不同酒精度對(duì)氰化鉀的響應(yīng)情況的影響曲線(xiàn)如圖1所示。
[0013](5)白酒樣品的測(cè)定:量取20mL經(jīng)步驟(2)預(yù)處理的白酒樣品1_7，向其中加入ImL氧化劑N-氯代琥珀酰亞胺-琥珀酰亞胺和ImL顯色劑巴比妥酸-吡唆，在25±0.5°C下反應(yīng)25min，然后在575nm下測(cè)定其吸光度，將測(cè)得的吸光度值代入相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)中，得到相應(yīng)白酒中氰化物的含量。樣品1-7中氰化物含量如表1所示。
[0014]表1醬香 型成品白酒中氰化物的含量
【權(quán)利要求】
1.一種快速定量白酒中氰化物的方法，其特征在于具體步驟如下: (1)溶液配制:配制400mg/L的氰化鉀貯存液，4°C冰箱保存；氧化劑:將5g琥珀酰亞胺溶于150mL實(shí)驗(yàn)專(zhuān)用水中，再加入0.5g N-氯代琥珀酰亞胺并攪拌至溶解，然后用實(shí)驗(yàn)專(zhuān)用水定容至500mL，4°C下避光保存；顯色劑:將3g巴比妥酸溶于15~20mL實(shí)驗(yàn)專(zhuān)用水中，并加入15mL吡啶，而后用實(shí)驗(yàn)專(zhuān)用水稀釋至50mL，4°C下避光保存，溶液的pH值是;所述實(shí)驗(yàn)專(zhuān)用水為超純水煮沸5~10 min后冷卻； (2)白酒樣品預(yù)處理:將酒精度在38%vol以上的酒樣用實(shí)驗(yàn)專(zhuān)用水或酒精調(diào)節(jié)至酒精度為46%vol ;酒精度15%~37%νο1的酒樣用實(shí)驗(yàn)專(zhuān)用水或酒精調(diào)節(jié)至酒精度為30%vol ;酒精度在15%vol以下的酒樣不進(jìn)行處理； (3)顯色反應(yīng):量取20mL經(jīng)步驟(2)預(yù)處理的白酒樣品，向其中加入ImL步驟(1)制備的氧化劑N-氯代琥珀酰亞胺-琥珀酰亞胺和I mL顯色劑巴比妥酸-吡啶，在25 ± 0.5°C下反應(yīng)25 min,然后在575nm下測(cè)定其吸光度； (4)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的建立:分別繪制0、30%、46%vol酒精度下的三條標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)；將400mg/L的氰化鉀貯存液作為最高濃度，用實(shí)驗(yàn)專(zhuān)用水將其稀釋至2mg/L作為標(biāo)準(zhǔn)使用液，并用相應(yīng)酒精度的溶液將氰化鉀標(biāo)準(zhǔn)使用液稀釋成一系列梯度標(biāo)準(zhǔn)液；取上述梯度標(biāo)準(zhǔn)液各20mL,向其中加入ImL氧化劑N-氯代琥珀酰亞胺-琥珀酰亞胺和I mL顯色劑巴比妥酸-批啶，在25±0.5°C下反應(yīng)25 min，然后在575nm下測(cè)定其吸光度；并以吸光度值為橫坐標(biāo)，相應(yīng)的氰化鉀溶液濃度為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)； (5)白酒樣品的測(cè)定:量取20mL經(jīng)步驟(2)預(yù)處理的白酒樣品，向其中加入ImL氧化劑N-氯代琥珀酰亞胺-琥 珀酰亞胺和I mL顯色劑巴比妥酸-吡唆，在25±0.5°C下反應(yīng)25min，然后在575nm下測(cè)定其吸光度，對(duì)比步驟(4)繪制的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，得到白酒樣品中氰化物的含量。
【文檔編號(hào)】G01N21/31GK103954619SQ201410215706
【公開(kāi)日】2014年7月30日 申請(qǐng)日期:2014年5月21日 優(yōu)先權(quán)日:2014年5月21日
【發(fā)明者】范文來(lái), 徐巖, 張莊英 申請(qǐng)人:江南大學(xué)