結腸癌動脈對縮血管介質的反應性的制作方法
【專利摘要】本發明公開了結腸癌動脈對縮血管介質的反應性，α受體和ETA受體是正常動脈的主要縮血管受體，結腸癌動脈的α受體和ETA受體的縮血管作用明顯弱于癌周動脈。去甲腎上腺素(NA)引起正常動脈收縮的最大收縮和半最大效應濃度分別為97％±19％和5.94±0.17；結腸癌動脈NA收縮的Emax和pEC50分別為74％±5％和5.54±0.21，癌周動脈收縮的Emax和pEC50分別為119％±11％和5.84±0.09。
【專利說明】結腸癌動脈對縮血管介質的反應性
【技術領域】
[0001]本發明屬于醫學【技術領域】，涉及結腸癌動脈對縮血管介質的反應性。
【背景技術】
[0002]快速增長是腫瘤組織的最大特點，血液供應是保證其生長、浸潤和轉移的重要因素[1]，癌組織的血管密度是反映惡性腫瘤生物學行為的一個重要參數，對腫瘤細胞生長、增殖、侵襲和轉移具有重要意義[2]，幾乎是實體瘤獨立的預后因素[3_5]。腫瘤血管在細胞組成、組織結構及功能特點上與非癌患者血管有明顯差異，缺乏完整血管的周邊細胞。血管的舒縮狀態是影響支配組織血流量的最重要因素，由血管舒縮性受體及相應配體調控。
【發明內容】
[0003]本發明為結腸癌動脈對縮血管介質的反應性。為治療惡性腫瘤提供了理論基礎。
[0004]腫瘤血管結構的變化與功能的要求可能會引起腫瘤血管對血管活性物質反應性改變。本發明驗證腫瘤動脈對縮血管物質的反應性降低，或對舒血管物質的反應性增高，或二者兼而有之。本發明驗證了供應結腸癌的動脈(癌動脈)對幾種常見縮血管物質的反應性，并與癌塊周圍的邊緣動脈(癌周動脈)和非癌患者的邊緣動脈(正常動脈)進行比較，研究癌動脈腎上腺素α受體、5-羥色胺(5-ΗΤ)受體、內皮素A(ETa)和內皮素B(ETb)受體功能的變化。
[0005]本發明研究了結腸癌動脈對縮血管介質的反應性。方法，取結腸癌患者供應癌塊的動脈(癌動脈)，以癌塊周圍的邊緣動脈(癌周動脈)和非癌患者的邊緣動脈(正常動脈)為對照，動脈切成長約Imm的動脈環，記錄4種受體激動劑對動脈收縮的量效曲線。結果:去甲腎上腺素(NA)引起正常動脈收縮的最大收縮(Emax)和半最大效應濃度(PEC5tl)分別為97% ±19%和5.94±0.17 ;結腸癌動脈NA收縮的Emax和pEC5Q分別為74% ±5%和
5.54 + 0.21，癌周動脈收縮的Emax和pEC5Q分別為119% ± 11 %和5.84±0.09。結腸癌動脈NA收縮的Emax較癌周動脈及與正常動脈收縮的Emax值顯著降低(P < 0.01，P < 0.05)。內皮素B(ETb)受體激動劑S6c在結腸動脈不引起收縮。內皮素-1 (ET-1)對正常動脈收縮的Emax和pEC5Q分別為106% ±7%和8.85±0.17，對結腸癌動脈和癌周動脈收縮的Emax升高，分別為130% ±6%和248% ±34% (P < 0.01) ;ET_1引起癌動脈和癌周動脈收縮的pEC5(l分別為8.09±0.10和8.37±0.04。5-HT在正常動脈僅引起弱的收縮作用。結論:α受體和ETa受體是正常動脈的主要縮血管受體；結腸癌動脈的α受體和ETa受體的縮血管作用明顯弱于癌周動脈。
【專利附圖】
【附圖說明】
[0006]圖1是ET_l，S6c，NA和5-ΗΤ在結腸癌患者癌動脈引起的濃度-收縮量效曲線圖；
[0007]圖2是NA在結腸癌患者癌動脈、癌周動脈及非癌患者邊緣動脈引起的濃度-收縮量效曲線圖；[0008]圖3是在結腸癌患者癌動脈、癌周動脈及非癌患者邊緣動脈引起的濃度-收縮量效曲線圖；
[0009]圖4是5-HT在結腸癌患者癌動脈、癌周動脈及非癌患者邊緣動脈引起的濃度-收縮量效曲線圖。
【具體實施方式】
[0010]以下對本發明進行實驗:
[0011]I材料與方法:
[0012] 1.1，材料。術前活檢或術后病理檢查確診的結腸癌患者(η = 5，年齡46~61歲，4名男性，I名女性)，采用根治性切除術，取出癌患部位，分離供應癌塊的動脈(癌動脈)；癌周圍約IOcm的邊緣動脈被認為是非癌組織的動脈(癌周動脈)，手術室取出；非癌患者的邊緣動脈取自交通事故患者(η = 5，年齡36~60歲，4名男性，I名女性)，認為是正常動脈。取出動脈后，置冷 Krebs 液(含 mmol.L-1 =NaCl119, NaHC0315、KC14.6、MgCl2L 2、NaH2PO4L 2、CaCl2L 5 和葡萄糖 5.5)。
[0013]去甲腎上腺素(noradrenal ine，NA)，普萘洛爾，乙酰膽堿(ACh)，5-羥色胺(5-hydroxytryptamine, 5-HT), endothelin-1 (ET-1)、Sarafotoxin6c (S6c)均為 Sigma 公司產品，由瑞典隆德大學提供。以上試劑溶于0.1%的牛血清白蛋白，臨用以Krebs液稀釋。濃度以浴槽中最終藥物的濃度表示。
[0014]1.2 方法:
[0015]1.2.1動脈環的制備:顯微鏡下剝離血管周圍組織,0.1% Triton x-100血管內灌注10s，去除血管內皮，再用緩沖液沖洗10s，當ACh引起的舒張率< 10%，認為內皮已去除。將處理好的血管切成Imm長的圓筒段,血管環外徑0.6~1.0mm，每份標本取I~2個血管環。
[0016]1.2.2，血管張力描記:將動脈環套在兩個L型的金屬針上，其中一個連接張力換能器，另一個連微調裝置(調節負荷張力)，通過8通道橋式放大器，將血管張力顯示于計算機屏幕[6’7]。將安裝好的動脈環置入含有Irnl Krebs液的37°CMyograph?‘恒溫浴槽，持續通入含95% O2和5% CO2的混合氣體，pH保持7.4。實驗前，動脈環靜息負荷2.5mN,每IOmin換液一次,穩定1.5h。以K+-Krebs液(含K+60mmol.I71)檢驗動脈環收縮性，兩次收縮高度大于ImN且收縮幅度相差< 10%者用于實驗。K+-Krebs液組成為(mmol.L-1:NaC160、NaHC0315、KC163.5、MgCl2L 2、NaH2PO4L 2、CaCl2L 5 和葡萄糖 5.5)。
[0017]在觀察血管收縮的功能實驗中，使用新鮮血管環，考察α受體功能，先用Prop (10-9mol -L-1)于浴槽中孵育血管半小時阻斷β受體，再濃度累加法加入NA (10_η~lO-W.L-1) '考察5-HT受體功能，濃度累加法加入5-HT(10_n~lO-W.L-1) '考察ETb,ETa受體功能，先濃度累加法加入S6c (10,~10_6mol L-1)，選擇性激動ETb受體，使血管收縮，收縮作用達到最大，使ETb受體內化，ETb受體收縮作用消失，收縮曲線逐漸降至基線水平并穩定至少30min后，累加濃度法加入ET-l(10_n~lO-W.L—1)，可以分別獲得α受體、5-ΗΤ受體、ETb受體、ETa受體劑量-收縮效應曲線。
[0018]1.3，統計方法:數據以Iil5:表示，收縮反應以不同濃度激動劑引起收縮效應相對于63.5mmol.L—1鉀引起的收縮效應百分數表達，反應特征表述為Emax(最大收縮百分率)和PEC5tl(產生一半最大收縮時所需要受體激動劑濃度的負對數)。統計分析及作圖使用Prism4.0軟件。ANOVA two-way和Student t檢驗考察顯著性，當P < 0.05時被認為有顯著性。
[0019]2 結果:
[0020]2.1動脈對K+的收縮反應:63.5mmol.L-1的K+可使動脈產生明顯的收縮，不同的動脈產生的收縮作用無明顯差別，癌動脈環對63.5mmol ^T1K+的收縮力為2.54±0.83mN(n = 32)，癌周動脈的收縮力為2.74±0.96mN(n = 32)，正常動脈環的收縮力為2.92 ±0.78mN(n = 32)，3組收縮力相互比較均P > 0.05。
[0021]2.2癌動脈對縮血管物質反應性的差別累加濃度法觀察4種激動劑對癌動脈環的濃度收縮曲線，結果顯示，ET-1和NA能濃度依賴性地收縮癌動脈，Emax分別為60mmol -T1K+收縮的 130% ±6%^ 74% ±5%，pEC5Q 分別為 8.09±0.10 和 5.54±0.21。5-ΗΤ 可使癌動脈產生微弱的收縮，S6c不引起收縮，如圖1所示ET-1，S6c, NA和5-HT在結腸癌患者癌動脈引起的濃度-收縮量效曲線。數值表示為X 士 a n = 5(n =患者人數)。
[0022]2.3癌動脈、癌周動脈及非癌動脈對NA的反應性:普萘洛爾存在條件下考察NA誘導動脈的濃度-收縮效應曲線，結果顯示NA可濃度依賴性地收縮非癌患者的邊緣動脈，其Emax和PEC5tl分別為97%于非癌患者的邊緣動脈，Emax和PEC5tl分別為74% ±5% (p
<0.05)和5.54±0.21 ;癌周動脈對NA的濃度-收縮效應曲線明顯高于非癌患者的邊緣動脈，其 Eniaj^PpEC5t l 分別為 119% ±11% (P < 0.05)和 5.84±0.09，η = 5 如圖 2 所示，NA在結腸癌患者癌動脈、癌周動脈及非癌患者邊緣動脈引起的濃度-收縮量效曲線。數值表示為三士A η = 5(η =患者人數)。與非癌患者動脈比較I3 < 0.05,與癌周動脈比較++P
<0.01。表1為NA，S6c, ET-1，5-HT在結腸癌癌動脈、癌周邊緣動脈及非癌患者邊緣動脈濃度-收縮量效曲線的Rmax和PEC5tl值。
[0023]表1
[0024]
【權利要求】
1.結腸癌動脈對縮血管介質的反應性。
2.按照權利要求1所示結腸癌動脈對縮血管介質的反應性，其特征在于:α受體和ETa受體是正常動脈的主要縮血管受體，結腸癌動脈的α受體和ETa受體的縮血管作用明顯弱于癌周動脈。
【文檔編號】G01N33/50GK103983763SQ201410206440
【公開日】2014年8月13日 申請日期:2014年5月16日 優先權日:2014年5月16日
【發明者】李潔, 林杰, 王俊杰, 徐雨佳, 陽建軍, 王安發, 陳碧, 張永東 申請人:李潔, 林杰, 王俊杰