一種快速測定蜂蜜制品中鋁離子含量的方法
【專利摘要】本發明涉及一種快速測定蜂蜜制品中的鋁含量的方法，主要是基于茜素紅S作為絡合顯色劑的紫外可見分光光度測定方法。該方法能縮短檢樣時間、節省資源、重現性和穩定性較好，回收率較高，能滿足實驗室測定的現實要求。
【專利說明】一種快速測定蜂蜜制品中鋁離子含量的方法
【技術領域】
[0001]本發明涉及屬于食品安全檢測【技術領域】，具體涉及一種快速測定蜂蜜制品中鋁離子含量的方法。
【背景技術】
[0002]鋁鹽被廣泛用于餐飲業中的餐具和食品添加劑，環境治理的水處理劑以及醫藥中的免疫佐劑等，已經成為日常生活中不可缺少的一部分。然而，過量的鋁鹽隨食品、藥物、飲水等途徑一旦進入人體，就會表現出生物毒性效應。有研究表明，老年性癡呆(阿爾茨海默病)、關島帕金森氏癡呆綜合癥、肌肉萎縮性脊髓側索硬化、和透析性腦病等神經失調性疾病、骨軟化癥及小細胞貧血等都與鋁鹽的過量攝入有關，有關病癥被稱為鋁腦病、鋁骨病。這些研究為公眾健康敲響了警鐘，所以準確、快速的測定鋁含量是保證食品安全與工業高效生廣的如提。
[0003]蜂蜜，是昆蟲蜜蜂從開花植物的花中采得的花蜜在蜂巢中釀制的蜜。蜂蜜的成分除了葡萄糖、果糖之外還含有各種維生素、礦物質和氨基酸。但是市場上的摻假蜂蜜制品越來越多，關于蜂蜜制品中的摻假主要有，摻入白砂糖、摻入明礬增稠等；而造假產品更甚，主要是利用明礬、白糖和醬油的炒制，形成在色澤、狀態等方面類似于蜂蜜的制品，無形中引起了鋁離子含量的嚴重超標。
[0004]因此，建立一種快速準確測定蜂蜜制品中的鋁離子含量，對于更好的檢驗蜂蜜制品的制假行為，規范蜂蜜制品的檢測有重大意義。
[0005]目前，國家還沒有一套完整的檢測蜂蜜制品中鋁含量的方法，具體檢測方法一直參照面粉制品中的檢測方法(GB/T5009.182-2003，該方法的原理為:試樣經處理后，三價鋁離子在乙酸-乙酸鈉緩沖介質中，與鉻天青S及溴化十六烷基三甲胺反應形成藍色三元絡合物，于640nm波長處測定吸光度并與標準比較定量)。除此方法之外，常見的測定方法主要有=EDTA絡合滴定法、電感耦合等離子體原子發射光譜法(ICP)及ICP質譜法(ICP-MS)、石墨爐原子吸收光度法、分光光度法、熒光分析法以及極譜法等。
[0006]現有的檢測方法中以鉻天青作為顯色劑的分光光度法應用最多，研究應用也最為廣泛，但是該方法體系繁瑣，需要加入乳化劑和增敏劑作為樣品預處理(增溶)和方法靈敏度的手段之一。原子吸收光譜(AAS)以及電感耦合等離子體原子發射光譜法(ICP)及ICP質譜法(ICP-MS)等方法，均需要硝酸、高氯酸消解、微波消解和灰化消解等步驟處理樣品，耗時長、效率低、測定成本較高。而快速溶劑萃取技術為全自動化式設計，可連續自動萃取24個樣品，樣品處理通量大，萃取效率高，是近年來發展起來的一種在高溫(室溫?200°C)、高壓(大氣壓?20MPa)條件下快速提取固體或半固體樣品的樣品前處理方法，與常用的索氏提取、超聲提取、微波萃取技術等方法相比，可大大縮短萃取時間，提高萃取效率，減少萃取溶劑用量，顯著降低了單個樣品的提取費用，具有節省溶劑、快速、健康環保、自動化程度高等優點。
[0007]常規的茜素紅S分光光度法(趙丹華，茜素紅S標記分光光度法測定微量人血清白蛋白，廣州第二師范學院學報，2011年10月，第31卷第5期:51-54)步驟為:于25mL比色管中加入pH = 5.10的3.0mL B-R緩沖溶液，4.00mL5.0 X 10_4mol/L茜素紅S，一定量的標準BSA溶液，稀釋至刻度，靜置20min，于λ = 420nm處吸光度A值，不加入BSA，按照上述步驟做空白，測定吸光度Atl值，以二次去離子水作為參比溶液，測定吸光度值，令Λ A =A0-A,以Λ A作為測定BSA的信號響應。
[0008]本發明主要涉及快速溶劑萃取法制備樣品待測溶液，利用茜素紅S絡合反應的簡便、穩定、靈敏度和準確度高等特點，建立一種快速測定蜂蜜制品中鋁離子含量的可見分光光度法。
【發明內容】
[0009]本發明的目的是克服上述現有技術的不足，提供一種樣品處理時間短、高效測定、成本低廉、反應體系簡便、靈敏度高、測試結果準確，符合精度要求的基于茜素紅S絡合反應的紫外可見分光光度法測定蜂蜜制品中鋁離子含量的方法。
[0010]本發明提供一種快速測定蜂蜜制品中鋁離子含量的方法，該方法是以茜素紅S作為絡合顯色劑的紫外可見分光光度測定方法。
[0011]所述方法包括:標準曲線的繪制、樣品待測液的制備和快速檢測。
[0012]所述標準曲線的繪制包括以下步驟:準確移取1.5mL茜素紅S溶液、0.15mL pH4.6的磷酸氫二鈉-檸檬酸緩沖液于8支比色管中，分別加入0.0mL,0.1mL,0.2mL、0.3mL、
0.4mL、0.5mL、0.6mL、0.7mL招離子標準溶液，加去離子水定容至5mL,混合均勻，靜置IOmin,于490nm處測定光吸收值，以鋁離子含量mg/mL為橫坐標，光吸收值為縱坐標，繪制鋁離子標準曲線，其線性回歸方程為Y = 1.49305X+0.01071，相關系數r為0.99937，其中X代表鋁離子的濃度mg/mL，y代表吸光值。樣品待測液的制備包括以下步驟:采用全自動快速溶劑萃取儀，分別準確稱取1.0g蜂蜜制品3份，加入濃度為0.1 %的稀鹽酸溶液20mL，在壓力lOOOpsi，溫度100°C，時間5min，靜態萃取(2循環)，自動過濾殘渣，將萃取液轉移至IOOmL容量瓶中定容，過0.45微米微孔濾膜，待測。
[0013]樣品溶液的快速檢測:準確移取萃取液0.2mL, 1.5mL茜素紅S溶液、0.15mL pH4.6的磷酸氫二鈉-檸檬酸緩沖液，使樣品中的鋁離子與顯色劑發生絡合反應，在490nm處測定光吸收值，同時做空白試驗，參照標準曲線方程進行樣品中鋁離子含量的計算，按照下式計算蜂蜜制品中鋁離 子含量的計算:
w ,, X CC廠Co)x100「 n A ( mg/kg)=-:---
[0014]m
1000
[0015]式中:
[0016]X表示樣品中的鋁含量，單位mg/kg ;
[0017]C1表示樣品測定液的吸光值所對應的招的濃度,單位mg/mL ；
[0018]C0表示空白試液招的濃度,單位mg/mL ；
[0019]m代表樣品的質量，單位g ；
[0020]100表示樣品制備液的體積，單位mL ；
[0021]1000表示測定質量單位轉化即由g轉化為kg。[0022]具體的，本發明提供的快速檢測蜂蜜中鋁離子含量的方法，包括以下步驟:
[0023]I)茜素紅S溶液的制備稱取茜素紅S0.025g，溶于50mL無水乙醇中，用蒸餾水稀釋定容至IOOmL ；
[0024]2)鋁離子標準溶液的制備:稱取0.89g AlCl3.6H20，用去離子水溶解并定容至10OmT,；
[0025]3)磷酸氫二鈉溶液的制備:稱取磷酸氫二鈉0.716g，用去離子水溶解并定容至10OmT,；
[0026]4)檸檬酸溶液的制備:稱取檸檬酸0.21g，用去離子水溶解并定容至IOOmL ；
[0027]5)pH4.6磷酸氫二鈉-檸檬酸緩沖液的制備:準確移取46.75mL0.2mol/L磷酸氫二鈉溶液和53.25mL0.lmol/L檸檬酸溶液，混勻至IOOmL ；
[0028]6)標準曲線的繪制:準確移取1.5mL茜素紅S溶液、0.15mL pH4.6的磷酸氫二鈉-檸檬酸緩沖液于8支比色管中，分別加入0.0,0.1,0.2,0.3,0.4,0.5,0.6,0.7mL鋁離子標準溶液，加去離子水定容至5mL，混合均勻，靜置lOmin，于490nm處測定光吸收值，以鋁離子含量(mg/mL)為橫坐標，光吸收值為縱坐標，繪制鋁離子標準曲線；
[0029]7)樣品溶液的快速制備:采用全自動快速溶劑萃取儀，稱取1.0g蜂蜜制品，加入濃度為0.1%的稀鹽酸溶液20mL，在壓力lOOOpsi，溫度100°C，時間5min，靜態萃取(2循環)，自動過濾殘渣，將萃取液轉移至IOOmL容量瓶中定容，過0.45微米微孔濾膜，待測；
[0030]8)樣品溶液的快速檢測準確移取步驟7)萃取液0.2mL, 1.5mL茜素紅S溶液、
0.15mL pH4.6的磷酸氫二鈉-檸檬酸緩沖液，使樣品中的鋁離子與顯色劑發生絡合反應，在490nm處測定光吸收值，同時做空白試驗，參照標準曲線方程進行樣品中鋁離子含量的計算，按照下式計算蜂蜜制品中鋁離子含量的計算:
【權利要求】
1.一種快速檢測蜂蜜制品中鋁離子含量的方法，其特征在于，該方法是茜素紅S作為絡合顯色劑的紫外可見分光光度測定方法。
2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述茜素紅S分光光度計方法包括:標準曲線的繪制、樣品待測液的制備和快速檢測。
3.根據權利要求2所述的方法，其特征在于，所述標準曲線的繪制包括以下步驟:準確移取1.5mL茜素紅S溶液、0.15mL pH4.6的磷酸氫二鈉-檸檬酸緩沖液于8支比色管中，分別加入 0.0mL,0.1mL,0.2mL、0.3mL、0.4mL、0.5mL、0.6mL、0.7mL 鋁離子標準溶液，加去離子水定容至5mL，混合均勻，靜置lOmin，于490nm處測定光吸收值，以鋁離子含量mg/mL為橫坐標，光吸收值為縱坐標，繪制鋁離子標準曲線，其線性回歸方程為Y =1.49305X+0.01071，相關系數R為0.99937，其中x代表鋁離子的濃度mg/mL，y代表吸光值。
4.根據權利要求2所述的方法，其特征在于，所述樣品待測液的制備包括以下步驟:采用全自動快速溶劑萃取儀，分別準確稱取1.0g蜂蜜制品3份，加入濃度為0.1%的稀鹽酸溶液20mL，在壓力lOOOpsi，溫度100°C，時間5min，靜態萃取，重復操作，自動過濾殘渣，將萃取液轉移至IOOmL容量瓶中定容，過0.45微米微孔濾膜，待測。
5.根據權利要求2所述的方法，其特征在于，所述樣品溶液的快速檢測:準確移取萃取液0.2mL, 1.5mL茜素紅S溶液、0.15mL pH4.6的磷酸氫二鈉-檸檬酸緩沖液，使樣品中的鋁離子與顯色劑發生絡合反應，在490nm處測定光吸收值，同時做空白試驗，參照標準曲線方程進行樣品中鋁離子含量的計算，按照下式計算蜂蜜制品中鋁離子含量的計算:
6.根據權利要求1-5任一項所述的方法，其特征在于，所述方法包括以下步驟: 1)茜素紅S溶液的制備:稱取茜素紅S0.025g，溶于50mL無水乙醇中，用蒸餾水稀釋定容至IOOmL ； 2)鋁離子標準溶液的制備:稱取0.89g AlCl3.6H20，用去離子水溶解并定容至IOOmL ； 3)磷酸氫二鈉溶液的制備:稱取磷酸氫二鈉0.716g，用去離子水溶解并定容至IOOmL ； 4)檸檬酸溶液的制備:稱取檸檬酸0.21g，用去離子水溶解并定容至IOOmL ； 5)pH4.6磷酸氫二鈉-檸檬酸緩沖液的制備:準確移取46.75mL0.2mol/L磷酸氫二鈉溶液和53.25mL0.lmol/L檸檬酸溶液，混勻至IOOmL ； 6)標準曲線的繪制:準確移取1.5mL茜素紅S溶液、0.15mL pH4.6的磷酸氫二鈉-檸檬酸緩沖液于8支比色管中，分別加入0.0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7mL鋁離子標準溶液，加去離子水定容至5mL，混合均勻，靜置lOmin，于490nm處測定光吸收值，以鋁離子含量(mg/mL)為橫坐標,光吸收值為縱坐標,繪制招離子標準曲線； 7)樣品溶液的快速制備:采用全自動快速溶劑萃取儀，稱取1.0g蜂蜜制品，加入濃度為0.1%的稀鹽酸溶液20mL，在壓力lOOOpsi，溫度100°C，時間5min，靜態萃取，重復稀釋、萃取，自動過濾殘渣，將萃取液轉移至IOOmL容量瓶中定容，過0.45微米微孔濾膜，待測； 8)樣品溶液的快速檢測:準確移取步驟7)的萃取液0.2mL，1.5mL茜素紅S溶液、.0.15mL pH4.6的磷酸氫二鈉-檸檬酸緩沖液，使樣品中的鋁離子與顯色劑發生絡合反應，在490nm處測定光吸收值，同時做空白試驗，參照標準曲線方程進行樣品中鋁離子含量的計算，按照下式計算蜂蜜制品中鋁離子含量的計算:
7.權利 要求1-6任一項所述方法在檢測蜂蜜制品中鋁離子含量的應用。
【文檔編號】G01N21/33GK103994981SQ201410175906
【公開日】2014年8月20日 申請日期:2014年4月28日 優先權日:2014年4月28日
【發明者】王曉力, 王永剛, 朱新強, 王春梅, 張茜, 路遠, 汪曉斌, 楊曉 申請人:中國農業科學院蘭州畜牧與獸藥研究所