一種用于生物染毒后糞便中四溴雙酚a分析的前處理方法
【專利摘要】一種用于生物暴露染毒后糞便中四溴雙酚A分析的前處理方法，涉及生物樣品中有機污染物的檢測分析技術，可為生物暴露染毒后糞便樣品中四溴雙酚A含量的測定提供前處理技術。生物暴露染毒后糞便樣品冷凍干燥后，加入等體積混合的甲基叔丁基醚與正己烷溶劑，經超聲波清洗儀超聲提取三次，取一定量提取液稀釋后經Li-SI固相萃取小柱富集凈化。處理后樣品經超高效液相色譜-串聯質譜儀測定，表明方法具有凈化效果好，操作簡單，回收率較高的優點，通過稀釋的方法降低基質干擾，使得該前處理方法特別適用于生物暴露染毒糞便樣品中四溴雙酚A含量的測定的前處理過程。
【專利說明】—種用于生物染毒后糞便中四溴雙酚A分析的前處理方法
【技術領域】
[0001]本發明涉及生物樣品中有機污染物的檢測分析技術，特別是涉及分析一種生物暴露染毒后所得糞便樣品中四溴雙酚A含量的樣品提取、凈化方法。
【背景技術】
[0002]近年來，四溴雙酚A作為使用量巨大的溴系阻燃劑之一被廣泛應用于家用電器和日常用品中，如計算機、打印機、手機、電視機、洗衣機等電子產品以及紡織品、泡沫家具、建筑材料等。根據歐洲溴科學和環境論壇(Brominated Science and Environmental Forum,BSEF)報告，除約旦、以色列、美國、日本等，我國也是四溴雙酚A主要生產國。由于相關產品生產規模的不斷增長、含四溴雙酚A電子廢棄物的不斷增加，以及可釋放到環境中四溴雙酚A數量的增加，使得人們開始關注四溴雙酚A潛在的環境污染問題和對人體健康的影響。
[0003]調查顯示，由于四溴雙酚A使用廣泛，世界上很多國家和地區的土壤、沉積物、水體和大氣等多種環境介質以及生物樣品中均檢測到四溴雙酚A的賦存，且含量較高。由于頻繁在環境介質及生物介質中檢測出四溴雙酚A，使得公眾對四溴雙酚A的生物毒性倍加關注。目前研究發現四溴雙酚A及其代謝產物在生物體反復暴露的情況下具有潛在的生物蓄積性，及細胞、免疫和內分泌干擾等生物毒性。近年來，四溴雙酚A被認為是一種值得探討和關注的潛在內分泌干擾物，也有研究認為四溴雙酚A具有潛在環境持久性和生物累積性，可能引起持久性有機污染問題。歐洲保護東北大西洋海洋環境公約組織(OSPAR)自2001年將四溴雙酚A納入優化控制污染物后至今未將其取消，其報告中認為四溴雙酚A具有持久性污染問題。基于此，通過動物實驗模擬四溴雙酚A進入生物體后在糞便中的分布規律對四溴雙酚A的影響研究具有重要作用。
[0004]糞便樣品作為非創傷性獲取的生物介質，可準確反應生物體經四溴雙酚A暴露后的內暴露劑量，可通過監測生物糞便中四溴雙酚A含量評價污染物的健康損害。糞便樣品基質復雜，不適宜的前處理技術影響檢測結果，同時生物經暴露染毒后會獲得大量樣品，便捷的前處理技術可大大縮短檢測時間。因此前處理技術是分析樣品中四溴雙酚A含量技術的關鍵。
【發明內容】
[0005]本發明的目的是針對生物暴露染毒后糞便樣品的前處理問題，提供一種回收率高、除雜效果好、準確迅速的凈化技術，實現對生物暴露染毒后糞便樣品中四溴雙酚A定量分析的技術。本發明與現有技術的區別在于，利用超聲清洗儀采用超聲的方式提取糞便樣品中四溴雙酚A，并用稀釋與固相萃取小柱聯合的方式避免基質雜質的干擾，保證了提取效率并避免復雜的凈化步驟損失樣品中四溴雙酚A含量。
[0006]為了實現上述目的，本發明的技術方案如下所述。
[0007]—種適用于分析生物暴露染毒后糞便樣品中四溴雙酚A的前處理方法(圖1)，包括以下步驟:[0008](I)采集生物暴露染毒的糞便樣品，用鑷子挑出雜質，經冷凍干燥后研磨粉碎；
[0009](2)準確稱取干燥后糞便樣品；
[0010](3)加入等體積混合的甲基叔丁基醚與正己烷試劑，超聲提取；
[0011](4)置離心機內低速離心5分鐘，移出上層提取液；
[0012](5)重復步驟(3)-⑷兩次；
[0013](6)合并三次提取液，經無水硫酸鈉干燥，定容至一定體積，并充分混合均勻；
[0014](7)取10~20 μ L混合均勻的提取液，加入C13標記的四溴雙酚A以及正己燒，混合均勻后經活化好的L1-SI小柱富集，甲醇洗脫后定容到一定體積，用0.2 μ m過濾器過濾，過濾后至超高效液相色譜-串聯質譜聯用儀檢測四溴雙酚A濃度。
[0015]該方法所述暴露染毒方式包括經口灌胃暴露、腹腔注射暴露、皮膚暴露、經呼吸暴露。
[0016]本方法中提取方式為超聲波清洗儀超聲提取，時間為提取30分鐘，并重復三次；凈化方式為稀釋與固相萃取小柱結合的方式，這與四溴雙酚A在生物體中以糞便代謝為主有關。
[0017]本發明的優點和積極效果是:生物暴露染毒四溴雙酚A后，主要通過糞便代謝出體外，糞便中四溴雙酚A濃度很高，同時糞便基質復雜，凈化要求較高，因此快速方便的對生物暴露染毒后糞便樣品進行前處理非常重要。本發明中樣品經甲基叔丁基醚與正己烷混合試劑超聲提取，取一定量提取液稀釋后經L1-SI小柱富集凈化。采用超高效液相色譜-串聯質譜儀測定，檢出限為0.02ng/g干重。通過稀釋與固相萃取小柱結合的凈化方式降低基質干擾，使得該前處理方法具有凈化效果好，操作簡單，回收率較高的優點，特別適用于生物暴露染毒糞便樣品中四溴雙酚A含量的測定的前處理過程。
[0018]本前處理方法的加標回收率如表1所示。
[0019]表1本前處理方法的加標回收率
【權利要求】
1.一種用于生物染毒后糞便中四溴雙酚A分析的前處理方法，其特征在于: 該方法包括如下步驟， (1)采集生物暴露染毒的糞便樣品，用鑷子挑出雜質，經冷凍干燥后研磨粉碎； (2)準確稱取干燥后糞便樣品； (3)加入等體積混合的甲基叔丁基醚與正己烷試劑，超聲提取； (4)置離心機內低速離心5分鐘，移出上層提取液； (5)重復步驟(3)-(4)兩次； (6)合并三次提取液，經無水硫酸鈉干燥，定容至一定體積，并充分混合均勻； (7)取10~20μ L混合均勻的提取液，加入C13標記的四溴雙酚A以及正己烷，混合均勻后經活化好的L1-SI小柱富集，甲醇洗脫后定容到一定體積，用0.2 μ m過濾器過濾，過濾后至超高效液相色譜-串聯質譜聯用儀檢測四溴雙酚A濃度。
2.如權利1要求所述的前處理方法，其特征在于:該方法所述暴露染毒生物包括實驗動物中大鼠、小鼠、豚鼠、兔子；該方法所述暴露染毒方式包括經口灌胃暴露、腹腔注射暴露、皮膚暴露、經呼吸暴露。
3.如權利1要求所述的前處理方法，其特征在于:提取方式為超聲波清洗儀超聲提取，時間為提取30分鐘，并重復三次；凈化方式為稀釋與固相萃取小柱結合的方式。
【文檔編號】G01N30/06GK103901140SQ201410171594
【公開日】2014年7月2日 申請日期:2014年4月28日 優先權日:2014年4月28日
【發明者】于云江, 王瓊, 孫朋, 向明燈, 付益偉 申請人:中國環境科學研究院