一種用于癌癥放化療的輔助治療制劑的質量檢測方法
【專利摘要】本發明公開了一種用于癌癥放化療的輔助治療制劑的質量檢測方法，包括以下步驟：野黃芩苷含量測定；木犀草素含量測定：色譜柱：C18柱；以甲醇—0.1%磷酸水溶液體積比=40：60為流動相；檢測波長為360nm，流速為1.0ml/min，柱溫為35℃；理論板數按木犀草素峰計應不低于5000；對照品溶液的制備；供試品溶液的制備；分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測定，即得；本品每粒含雪蓮花以木犀草素計，不得少于0.05mg。本發明準確度高、能有效且全面地控制制劑質量。
【專利說明】—種用于癌癥放化療的輔助治療制劑的質量檢測方法
【技術領域】
[0001]本發明屬于中藥【技術領域】，特別涉及一種用于癌癥放化療的輔助治療制劑的質量檢測方法。
[0002]
【背景技術】
[0003]含量測定作為中藥質量標準中的關鍵內容之一，對于有效成分制劑而言，可在很大程度上控制藥品質量，但對于復方制劑，以及采用多種不同提取方式或多條提取路線的工藝和多個有效部位制成的新藥而言，僅建立某單一成分的含量測定帶有較大的片面性。雖然研究者越來越認識到中藥新藥工藝過程的控制對于質量控制的重要性，但是多數制劑的質量標準仍然不能全面反映制劑的過程控制結果，即難以全面控制中藥制劑的質量。因此，在中藥研究的技術要求方面，有必要在質量標準中建立多指標含量測定，目的之一是實現對多數成分指標的控制，并將對中藥制劑工藝過程的控制直接在質量標準中得到體現，即在處方中含有多個明確有效成分，或對處方中的藥味，在分別按不同路線提取等各種不同情況下，均有必要研究建立多個指標的含量測定。欣力康制劑是一種用于癌癥放化療的輔助治療制劑，為苗藥驗方，其制法為:按處方量稱取半枝蓮501g、龍葵402g、蛇莓231g、輪環藤根200g、黃芪501g、紅參181g、雪蓮花501g、當歸161g、郁金181g、丹參171g，丹參、雪蓮花加75%乙醇回流提取2次，每次2小時，過濾，回收乙醇并濃縮至相對密度為1.10?1.20的浸膏。醇提后的藥渣再分別加水煎煮兩次，分別提取2小時和I小時，過濾，合并濾液，濾液備用；其余8味，加水提取3次，分別提取2小時、1.5小時和I小時，過濾，合并濾液，與上述醇提后水提的濾液合并，減壓蒸發濃縮至相對密度為1.15?1.20的浸膏；加乙醇靜置，取上清液過濾，沉淀再加入乙醇靜置取上清液過濾，棄去沉淀，合并兩次濾液，回收乙醇并濃縮至相對密度為1.10?1.20的浸膏，與上述醇提浸膏合并混勻后，取部分浸膏或全部浸膏噴霧干燥，得噴霧粉備用；未噴粉的浸膏與噴霧粉沸騰制粒，整粒過篩、混勻，制得用于癌癥放化療的輔助治療顆粒劑1000份；或沸騰制粒得到的顆粒粉碎且過篩，干燥，制得用于癌癥放化療的輔助治療膠囊1000份；或全部浸膏噴霧干燥所得噴粉經干法制粒后過篩，干燥，制得用于癌癥放化療的輔助治療膠囊1000份。其含十味中藥，制備工藝復雜，僅建立半枝蓮中野黃芩苷的含量測定對其質量控制有較大的片面性。
【發明內容】
[0004]本發明的目的在于克服上述缺點而提供的一種準確度高、能有效且全面地控制制劑質量的用于癌癥放化療的輔助治療制劑的質量檢測方法。
[0005]本發明的一種用于癌癥放化療的輔助治療制劑的質量檢測方法，包括如下步驟: 一種用于癌癥放化療的輔助治療制劑的質量檢測方法，包括以下步驟:
(I)野黃芩苷含量測定
照高效液相色譜法(《中國藥典》2010年版一部附錄VI D)測定。[0006]色譜條件與系統適用性試驗
色譜柱:C18柱(5 m，4.6X 250mm);以甲醇一0.1%三氟乙酸水溶液(25:75)為流動相；檢測波長為335nm，流速為1.0ml/min，柱溫為40°C。理論板數按野黃芩苷峰計應不低于4000。
[0007]對照品溶液的制備
取野黃芩苷對照品適量，精密稱定，加適量甲醇超聲溶解，冷卻定容，制成每Iml含野黃芩苷50 μ g的溶液，即得。
[0008]供試品溶液的制備
取裝量差異項下的本品粉末約0.5g，精密稱定，置50ml容量瓶中，加入70%甲醇定容，密塞，稱重，超聲(功率100W，頻率59HZ) 30分鐘，放冷，稱重，用70%甲醇補足減失的重量，搖勻，用微孔濾膜(0.45 μ m)濾過，取續濾液，即得。
[0009]測定法
分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μ 1，注入液相色譜儀，測定，即得。
[0010]本品每粒含半枝蓮以野黃岑苷(C21H18O12)計,不得少于0.50mg。
[0011](2)木犀草素含量測定
照高效液相色譜法(《中國藥典》2010年版一部附錄VI D)測定。
[0012]色譜條件與系統適用性試驗
色譜柱:C18柱(5 m，4.6X 250mm);以甲醇一0.1%磷酸水溶液(40:60)為流動相；檢測波長為360nm,流速為1.0ml/min,柱溫為35°C。理論板數按木犀草素峰計應不低于5000。
[0013]對照品溶液的制備
取木犀草素對照品適量，精密稱定，加適量甲醇超聲溶解，冷卻定容，制成每Iml含木犀草素20 μ g的溶液，即得。
[0014]供試品溶液的制備
取裝量差異項下的本品粉末約1.0g，精密稱定，置50ml容量瓶中，加入50%甲醇定容，密塞，稱重，超聲(功率100W，頻率59HZ) 30分鐘，放冷，稱重，用50%甲醇補足減失的重量，搖勻，用微孔濾膜(0.45 μ m)濾過，取續濾液，即得。
[0015]測定法
分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μ 1，注入液相色譜儀，測定，即得。
[0016]本品每粒含雪蓮花以木犀草素(C15HltlO6)計,不得少于0.05mg。
[0017]本發明與現有技術相比，具有明顯的有益效果，由以上技術方案可知:發明人試驗采用了專屬性強、靈敏度高的高效液相色譜法測定用于癌癥放化療的輔助治療制劑中齊墩果酸、熊果酸和木犀草素的含量，但齊墩果酸、熊果酸的含量均低于萬分之一，而木犀草素含量高于萬分之一，且木犀草素與其他組分分離度、重現性、精密度、回收率都較好，故確定本發明的用于癌癥放化療的輔助治療制劑中木犀草素的含量。雪蓮花為方中臣藥，具有清熱解毒，消腫止痛的功效。其主要有效成分為木犀草素，現代藥理學研究表明該成分具多重藥理活性，故在原有質量標準上增加了雪蓮花中木犀草素含量測定的指標，以有效控制產品質量。
【具體實施方式】[0018]以下通過具體實驗例來進一步說明本發明方法的有益效果。
[0019]實驗例:
1.1儀器、對照品、試劑和試藥
1.1.1儀器:島津LC-20AD型高效液相色譜儀，LC Solution工作站；超聲波清洗器(上海冠特超聲儀器有限公司)；電子天平(十萬分之一)AUW120D型(日本島津)。
[0020]1.1.2對照品:木犀草素對照品(批號:111520-200504)含量測定用，購于中國藥品生物制品檢定所。
[0021]1.1.3試劑:磷酸為分析純，甲醇為色譜純，水為重蒸餾水。
[0022]1.1.4供試品:用于癌癥放化療的輔助治療膠囊樣品和陰性樣品為貴陽新天藥業股份有限公司提供。
[0023]1.2對照品溶液的制備
儲備液的制備:精密稱取木犀草素對照品12.38mg (批號:111520-200504)
置50ml容量瓶中加甲醇溶解，制成每Iml含木犀草素247.60 μ g的溶液。
[0024]對照品溶液①:精密稱取對照品貯備液1ml，置20ml容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得每Iml含12.38 Ug的溶液。
[0025]對照品溶液②:精密稱取對照品貯備液5ml，置50ml容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得每Iml含24.760 Ug的溶液。
[0026]1.3 色譜條件試驗色譜柱:Elite Hypersil C18 柱(5 μ m, 250nmX4.6nm)
1.3.1檢測波長選擇:參照文獻中雪蓮花藥材木犀草素含量測定波長為360nm，木犀草素對照品紫外掃描最大吸收波長為348nm。擬定檢測波長為360nm。
[0027]1.3.2供試品的制備:精密稱取樣品(121001)1.0g，置50ml容量瓶中，加入50%甲醇定容，稱定重量，超聲30分鐘，放冷，用50%甲醇補重，搖勻，用微孔濾膜濾過，取續濾液，作為供試品溶液。
[0028]1.3.3流動相選擇:分別以甲醇-0.1%磷酸水溶液(47:53)，(40:60), (38:62)，(39:61)為流動相對木犀草素對照品溶液與供試品溶液進行含量測定。色譜圖顯示，在以甲醇-0.1%磷酸水(40:60)為流動相的色譜條件下檢測，木犀草素峰對稱性較好，與其他峰之間分離度較好，柱效好，故以甲醇-0.1%磷酸水(40:60)為流動相。
[0029]1.4專屬性試驗
精密稱取樣品1.0g，置50ml容量瓶中，加50%甲醇定容，稱定重量，超聲30分鐘，放冷，再稱定重量，用50%甲醇補足減失的重量，搖勻，取樣品溶液過微孔濾膜，取續濾液，作為供試品溶液。另取陰性樣品同法制成陰性樣品溶液。精密吸取木犀草素對照品溶液、陰性樣品溶液和供試品溶液各10 μ I注入液相色譜儀，記錄色譜圖。從色譜圖中可看出，供試品在與對照品保留時間相應的位置上出峰，且峰形好，而陰性樣品在相應的位置上無峰，說明陰性樣品對樣品的測定無干擾。樣品在圖譜中的木犀草素的理論塔板數在5000以上，且與其他物質的分離度大于1.5，峰形好，結合本試驗的研究結果,規定本試驗的理論塔板數按木犀草素峰計算，應不低于5000。
[0030]1.5線性關系試驗
自動進樣器分別精密吸取12.38 μ g/ml木犀草素對照品溶液2μ 1、4μ 1、6μ 1、8μ 1、10 μ 1、12 μ 1、16 μ 1、20 μ I自動進樣，按10 μ I的濃度為12.38 μ g/ml計算，得進樣量-面積關系，如下表:
【權利要求】
1.一種用于癌癥放化療的輔助治療制劑的質量檢測方法，包括以下步驟: (1)野黃芩苷含量測定 色譜條件與系統適用性試驗 色譜柱:C18柱；以甲醇一 0.1%三氟乙酸水溶液體積比=25:75為流動相；檢測波長為335nm，流速為1.0ml/min，柱溫為40°C，理論板數按野黃芩苷峰計應不低于4000 ； 對照品溶液的制備 取野黃芩苷對照品適量，精密稱定，加適量甲醇超聲溶解，冷卻定容，制成每1ml含野黃芩苷50 μ g的溶液，即得； 供試品溶液的制備 取裝量差異項下的本品粉末約0.5g，精密稱定，置50ml容量瓶中，加入70%甲醇定容，密塞，稱重，功率100W、頻率59HZ超聲30分鐘，放冷，稱重，用70%甲醇補足減失的重量，搖勻，用0.45 μ m微孔濾膜濾過，取續濾液，即得； 測定法 分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各IOy 1，注入液相色譜儀，測定，即得； 本品每粒含半枝蓮以野黃岑苷計，不得少于0.5Omg ； (2)木犀草素含量測定 色譜條件與系統適用性試驗 色譜柱:C18柱；以甲醇一0.1%磷酸水溶液體積比=40:60為流動相；檢測波長為360nm,流速為1.0ml/min,柱溫為35°C ;理論板數按木犀草素峰計應不低于5000 ； 對照品溶液的制備 取木犀草素對照品適量，精密稱定，加適量甲醇超聲溶解，冷卻定容，制成每1ml含木犀草素20 μ g的溶液，即得； 供試品溶液的制備 取裝量差異項下的本品粉末約1.0g，精密稱定，置50ml容量瓶中，加入50%甲醇定容，密塞，稱重，功率100W、頻率59HZ超聲30分鐘，放冷，稱重，用50%甲醇補足減失的重量，搖勻，用0.45 μ m微孔濾膜濾過，取續濾液，即得； 測定法 分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各1Oy 1，注入液相色譜儀，測定，即得； 本品每粒含雪蓮花以木犀草素計，不得少于0.05mg。
2.如權利要求1所述的一種用于癌癥放化療的輔助治療制劑的質量檢測方法，其中:C18 柱為 5m，4.6 X 250mm。
【文檔編號】G01N30/06GK103901138SQ201410144551
【公開日】2014年7月2日 申請日期:2014年4月11日 優先權日:2014年4月11日
【發明者】董大倫 申請人:貴陽新天藥業股份有限公司