一種定量檢測c肽的膠乳增強免疫比濁試劑盒的制作方法
【專利摘要】本發明公開了一種定量檢測C肽的膠乳增強免疫比濁試劑盒，由C肽R1試劑、C肽R2試劑和C肽校準品組成；其中C肽R1試劑包含緩沖液、保護劑Ⅰ、反應增強劑和防腐劑，C肽R2試劑包含緩沖液、保護劑Ⅰ、防腐劑和包被抗人C肽抗體的致敏聚苯乙烯膠乳顆粒，C肽校準品包含緩沖液、保護劑Ⅱ、防腐劑和C肽重組蛋白。本發明制備的試劑盒適用于半自動、全自動生化分析儀及散射比濁分析儀，具有操作簡單、快速、測試精確度高、自動化程度高的優點，適用于在臨床上廣泛使用，特別是對急診能實現快速定量測定。
【專利說明】一種定量檢測C肽的膠乳增強免疫比濁試劑盒
【技術領域】
[0001]本發明屬于體外診斷試劑領域，具體涉及一種采用膠乳增強免疫比濁法定量測定檢測標本中C肽含量的試劑盒。
【背景技術】
[0002]C肽(C-P印tide)又稱連接肽，由31個氨基酸組成，分子量為3020道爾頓，是胰島素原中連接胰島素A鏈和B鏈的一段短肽，其作用在于促進胰島素分子在β細胞內質網中合成，并使胰島素進行有效折疊和裝配。臨床上對于C肽的測定主要用來正確評價胰島β細胞功能變化及發展規律，以及對糖尿病類型的準確判斷和病情監控。
[0003]人體胰島β細胞合成胰島素原，隨后胰島素原被等摩爾地切割成胰島素和C肽。因此，胰島β細胞分泌的胰島素和C肽呈等分子關系，血中C肽濃度可間接反應胰島素濃度。而與胰島素相比，C肽在體內不被肝臟分解，只能通過腎臟清除，且半衰期較長(C肽的半衰期大于30min,胰島素的半衰期為3?4min),在血清中的濃度幾乎是胰島素的10倍，因此C肽水平更能準確反映胰腺中β細胞的分泌功能。
[0004]此外，人源和動物源以及各種改進的胰島素在氨基酸序列和結構上類似，導致了它們的免疫原性相近，在檢測中不易區分。如果通過檢測血中的胰島素水平來評價胰島功能，容易受到外源性胰島素的影響，而外源性胰島素中不含有C肽，且C肽不受胰島素治療中產生的胰島素自身抗體的干擾，因此，測定C肽對內源性胰島素的分泌能力評價更具有臨床意義。盡管測量C肽的抗體容易與胰島素原發生交叉反應，但是胰島素原一般不會出現在血中，游離C肽的含量大概占總C肽含量的90%以上，所以臨床上一般通過直接測定血清總C肽的含量來對β細胞進行評價。
[0005]目前，臨床上對C肽的測定方法主要包括放射免疫法(Radioimmunoassay, RIA)、酶聯免疫吸附測定法(Enzyme-Linked, Immunosorbent Assay, ELISA)及化學發光法等,其中RIA法雖然靈敏度高，但對設備要求較高、檢測結果不穩定且存在放射性污染；ELISA定量準確性差，操作時間長，自動化程度低，無法滿足臨床上大量、快速檢測的需求；化學發光法則存在儀器維護昂貴，易受干擾，重復性差的缺點。
【發明內容】
[0006]針對現有技術存在的上述不足，本發明要解決的技術問題是:提供一種穩定性好，測試效率高，測試結果準確，靈敏度高的定量檢測C肽的膠乳增強免疫比濁試劑盒。
[0007]為了解決上述技術問題，本發明采用如下技術方案:
一種定量檢測C肽的膠乳增強免疫比濁試劑盒，其特征在于，包括C肽Rl試劑、C肽R2試劑和C肽校準品；
所述C肽Rl試劑由緩沖液、保護劑1、反應增強劑和防腐劑得到；
所述C肽R2試劑由緩沖液、保護劑1、防腐劑和包被抗人C肽抗體的致敏聚苯乙烯膠乳顆粒得到；其中包被抗人C肽抗體的致敏聚苯乙烯膠乳顆粒由抗人C肽抗體和聚苯乙烯膠乳顆粒偶聯得到；所述抗人C肽抗體為鼠源抗人C肽抗體、兔源抗人C肽抗體或者羊源抗人C肽抗體；
所述C肽校準品由緩沖液、保護劑I1、防腐劑和C肽重組蛋白得到。
[0008]上述技術方案中，將抗人C肽抗體以定向化學偶聯的方式連接在聚苯乙烯膠乳顆粒表面，當檢測標本中的C肽抗原與試劑盒中的抗人C肽抗體發生免疫反應后形成聚集顆粒而產生濁度，通過在400~700nm波長下測定其濁度即可計算出檢測標本中的C肽含量。
[0009]上述技術方案中，C肽R2試劑中包被抗人C肽抗體的致敏聚苯乙烯膠乳顆粒由抗人C肽抗體和聚苯乙烯膠乳顆粒偶聯得到，其中抗體與聚苯乙烯膠乳顆粒的重量比可以為
0.5~20:100，抗人C肽抗體為鼠源抗人C肽抗體、兔源抗人C肽抗體或者羊源抗人C肽抗體，其可以和檢測樣本中的抗原發生免疫反應；優選鼠源抗人C肽抗體，這是因為其免疫原性、抗原結合親和力、血清半衰期更為理想，與血清中的C肽特異性結合能力高，可以大大提聞檢測的準確性。
[0010]作為優化，所述緩沖液為PBS緩沖液、TriS-HCl緩沖液、甘氨酸緩沖液、硼酸鹽緩沖液和檸檬酸-磷酸鹽緩沖液中的一種或者幾種；
其中C肽Rl試劑中緩沖液的濃度為20~200mM ;(:肽R2試劑中緩沖液的濃度為20~200mM ;C肽校準品中緩沖液的濃度為20~200mM。
[0011]上述技術方案中緩沖液的主要作用是保證配制膠乳增強免疫比濁試劑盒的過程中，各組分的PH值保持在一定的范圍內，使個組分的性能保持穩定。所述C肽Rl試劑中緩沖液的濃度為20~200mM，pH優選為4~10 ;所述C肽R2試劑中緩沖液為20~200mM，pH優選為4~10 ;所述C肽校準品中緩沖液的濃度為20~200mM，pH優選為6~8 ;這樣C肽Rl試劑、C肽R2試劑和C肽校準品中緩沖液的加入量、pH值保持在一個適中的范圍，使各組份的酸堿度保持穩定，不會對其他物質的性能產生影響，從而保證試劑盒整體性能的穩定，使測試結果更準確。
[0012]作為優化，所述保護劑I為牛血清白蛋白BSA、卵清蛋白OVA和明膠中的一種；其中C肽Rl試劑中保護劑I的 濃度為I~10g/L <肽1?2試劑中保護劑I的濃度為I~IOg/L ；
所述保護劑II為牛血清白蛋白BSA，其中C肽校準品中保護劑II濃度為I~8 g/L。
[0013]上述技術方案中的保護劑I可以使C肽Rl試劑和C肽R2試劑在保存期內性能保持穩定；保護劑II可以保持C肽重組蛋白的性能穩定，在保存期內使C肽校準品不會因為環境溫度的變化而產生變異。
[0014]作為優化，所述反應增強劑為PEG4000、PEG6000、PEG8000和PEG20000中的一種，
其中C肽Rl試劑中反應增強劑的濃度為10~50g/L。
[0015]上述技術方案中，反應增強劑均為非離子型水溶性聚合物，具很強的親水性，在水中的溶解度比較大，可以調節C肽Rl試劑的濃度，促進抗原和抗體分子結合為復合物；同時反應增強劑可以破壞溶液中蛋白質周圍的電子云和水化層，促進特異性的抗原和抗體分子聚集形成大分子復合物。
[0016]作為優化，所述防腐劑為疊氮鈉、硫柳汞和Proclin300中的一種；
其中C肽Rl試劑中防腐劑的濃度為0.3~3g/L ;C肽R2試劑中防腐劑的濃度為0.3~3g/L ；C肽校準品中防腐劑的濃度為0.3~3g/L。[0017]作為優化，所述聚苯乙烯膠乳顆粒為羧基化聚苯乙烯膠乳顆粒或者醛基化聚苯乙烯膠乳顆粒，其粒徑為200?500nm。
[0018]上述技術方案中，羧基化聚苯乙烯膠乳顆粒采用碳化二亞胺EDAC活化后再與抗人C肽抗體偶聯，醛基化聚苯乙烯膠乳顆粒無需活化即可直接與抗人C肽抗體偶聯，其中聚苯乙烯膠乳顆粒與EDAC的質量比為0.5?5:100，這樣可以使聚苯乙烯膠乳顆粒表面快速活化，使聚苯乙烯膠乳顆粒上的基團與抗人C肽抗體上的氨基縮合形成交聯結構，提高了二者之間的作用力以及膠乳顆粒的穩定性，進而可以準確、快速的測試檢測標本中的C肽含量。
[0019]作為進一步優化，聚苯乙烯膠乳顆粒為羧基化聚苯乙烯膠乳顆粒，這是因為其更容易被活化，與抗人C肽抗體之間的偶聯作用更強。
[0020]作為優化，所述抗人C肽抗體為多克隆抗體或者單克隆抗體。這樣的抗體與檢測樣本中的C肽特異性結合能力高；其中優選單克隆抗體，因為單克隆抗體不會與檢測樣本中的胰島素原以及其他抗原發生交叉反應，從而保證了測試結果的準確度和可靠性。
[0021]與現有技術相比，本發明具如下有益效果:
1、本發明中的試劑盒采用膠乳增強免疫比濁法的原理來測試待測標本(人血液或者尿液)中的C肽含量，可以適用于半自動、全自動生化分析儀及散射比濁分析儀，具有操作簡單、快速、精確度高、自動化程度高的優點，適用于在臨床上廣泛使用，特別是對急診能實現快速定量測定。
[0022]2、包被抗人C肽抗體的致敏聚苯乙烯膠乳顆粒采用定向偶聯法將抗人C肽抗體包被到膠乳顆粒上得到，抗人C肽抗體的偶聯部位為Fe片段，使抗原結合位點指向流動相，因此不會發生抗體結合力損失的情況，保持了抗體的活力，大大減少了抗體的用量，降低了生產成本。此外，所使用的致敏性膠乳顆粒穩定性好，抗體不會與膠乳顆粒脫離，而且由于化學偶聯過程中，Fe片段發生了結構上的改變，因此減少了類風濕因子RF和嗜異性抗體的干擾，大大提升了檢測結果的準確性和可信性。
【專利附圖】
【附圖說明】
[0023]圖1是實施例1制備的C肽檢測試劑盒的校準曲線圖。
[0024]圖2是實施例1制備的C肽檢測試劑盒的線性范圍相關性曲線。
[0025]圖3是實施例1制備的C肽檢測試劑盒與Roche試劑盒檢測結果相關性比較的曲線。
【具體實施方式】
[0026]下面結合優選的具體實施例和附圖對本發明進行詳細的說明。
[0027]值得說明的是，本發明所用的原料基本均可以為市售產品，其中三羥甲基氨基甲燒Tris購自Sigma公司；其中羧基化聚苯乙烯膠乳顆粒以羧基化聚苯乙烯膠乳顆粒溶液的形式加入,購自Life technologies公司；C肽重組蛋白購自芬蘭Hytest公司。
[0028]一、定量檢測C肽的膠乳增強免疫比濁試劑盒的制備 實施例1:
一種定量檢測C肽的膠乳增強免疫比濁試劑盒，包括C肽Rl試劑、C肽R2試劑和C肽校準品。
[0029]以制備IL C肽Rl試劑為例，由濃度為50mM的Tris-HCl緩沖液、3g牛血清白蛋白BSA、Ig疊氮鈉和50g PEG6000制備得到，最終C肽Rl試劑中Tris-HCl緩沖液的濃度為50mM，牛血清白蛋白BSA的濃度為3g/L，疊氮鈉的濃度為lg/L，PEG6000的濃度為50g/L ；
以制備IL C肽R2試劑為例，由濃度為50mM的Tris-HCl緩沖液、5g的牛血清白蛋白BSA、Ig的疊氮鈉和包被抗人C肽抗體的致敏聚苯乙烯膠乳顆粒制備得到，最終C肽R2試劑中Tris-HCl緩沖液的濃度為50mM，牛血清白蛋白BSA的濃度為5g/L，疊氮鈉的濃度為Ig/L ；
以制備IL C肽校準品為例，由濃度為IOOmM的PBS緩沖液、3g牛血清白蛋白BSA、Ig疊氮鈉和C肽重組蛋白以制備得到，最終C肽校準品中PBS緩沖液的濃度為IOOmM,牛血清白蛋白BSA的濃度為3g/L，疊氮鈉的濃度為lg/L ；
上述C肽Rl試劑、C肽R2試劑和C肽校準品具體可以采用如下方法得到:
I) C肽Rl試劑:
稱取6.06g三羥甲基氨基甲烷(Tris)、3g BSA、50g PEG6000、Ig疊氮鈉溶于0.8L去離子水中，用HCl調節pH至7.0，定容至IL即得試劑Rl。這樣可以使C肽Rl試劑中的各個組分分散混合均勻，同時在保存期內其性能不會發生變化。
[0030]2) C 肽 R2 試劑:
①乳顆粒的活化、洗滌:
取質量體積比為10%的羧基化聚苯乙烯膠乳顆粒溶液100 μ L，向其中加入質量濃度為1% EDAC溶液10 μ L，置于37°C搖床中反應0.5?Ih后，再在12000rmp的轉速下離心分離30min,然后倒掉上層清液，再用濃度為50mM、pH為7.2的甘氨酸緩沖液洗滌三次，最后將沉淀分散于IL濃度為50mM、pH為7.2的甘氨酸緩沖液中，使最終溶液中聚苯乙烯膠乳顆粒的濃度(以質量體積比計)為0.5?1%。
[0031]上述技術方案中，羧基化聚苯乙烯膠乳顆粒以羧基化聚苯乙烯膠乳顆粒溶液的形式加入，其作用等同于羧基化聚苯乙烯膠乳顆粒；而且羧基化聚苯乙烯膠乳顆粒在溶液中分布均勻，用EDAC溶液可以將官能團充分活化，可以與抗體形成偶聯結構。
[0032]②抗體的純化:
將鼠源抗人C肽抗體加入到透析袋中，在lOOmM、pH為7.2的PBS緩沖液中透析48小時，在透析的過程中換緩沖液3次，得到純化的鼠源抗人C肽抗體；這樣可以去除鼠源抗人C肽抗體中的穩定劑等雜質，以避免測試結果不準確。
[0033]③抗體膠乳顆粒的偶聯:
將經過步驟①活化后的羧基化聚苯乙烯膠乳顆粒溶液與步驟②純化后的抗體混合，混勻后置于37°C搖床孵育2h，得到抗體-膠乳顆粒復合物；然后將抗體-膠乳顆粒復合物在12000rpm離心30min，倒掉上清液，再用濃度為100mM、pH為7.2的PBS緩沖液洗滌2次，最后再加入濃度為50mM、pH為7.0的Tris-HCl緩沖液10ml，攪拌混合均勻即可。其中IOml的Tris-HCl緩沖液中含有0.5mg的牛血清白蛋白BSA和Img的疊氮鈉；所述包被抗人C肽抗體的致敏聚苯乙烯膠乳顆粒的質量體積比終濃度為0.05?0.20% ;這樣能夠保持羧基化聚苯乙烯膠乳顆粒與鼠源抗人C肽抗偶聯結構的長期穩定性。
[0034]3) C肽校準品: 稱取35.6INa2HPO4.2H20、3g牛血清白蛋白BSA、Ig疊氮鈉溶于0.8L去離子水中，調節PH至7.2，用蒸餾水定容至1L，將C肽重組蛋白溶于上述配制好的溶液中，配制成C肽重組蛋白的濃度分別為 0、200pmol/L、500pmol/L、1000pmol/L、2000pmol/L 和 4000pmol/L 的溶液，即得到C肽校準品。
[0035]實施例2:
一種定量檢測C肽的膠乳增強免疫比濁試劑盒，包括C肽Rl試劑、C肽R2試劑和C肽校準品。
[0036]以制備IL C肽Rl試劑為例，由濃度為200mM甘氨酸緩沖液、5g牛血清白蛋白BSA、2g疊氮鈉和40g PEG8000制備得到，最終C肽Rl試劑中甘氨酸緩沖液的濃度為200mM，牛血清白蛋白BSA的濃度為5g/L，疊氮鈉的濃度為2g/L，PEG8000的濃度為40g/L ；
以制備IL C肽R2試劑為例，由濃度為50mM的硼砂緩沖液、5g的牛血清白蛋白BSA、
0.3g的疊氮鈉和包被抗人C肽抗體的致敏聚苯乙烯膠乳顆粒制備得到，最終C肽R2試劑中硼砂緩沖液的濃度為50mM，牛血清白蛋白BSA的濃度為5g/L，疊氮鈉的濃度為0.3g/L ；以制備IL C肽校準品為例，其由濃度為IOOmM的PBS緩沖液、2g牛血清白蛋白BSA、2g疊氮鈉和C肽重組蛋白制備得到，最終C肽校準品中PBS緩沖液的濃度為IOOmM,牛血清白蛋白BSA的濃度為2g/L，疊氮鈉的濃度為2g/L ；
上述C肽Rl試劑、C肽R2試劑和C肽校準品的制備方法可以采用實施例1中的制備方法。
[0037]實施例3:
一種定量檢測C肽的膠乳增強免疫比濁試劑盒，包括C肽Rl試劑、C肽R2試劑和C肽校準品。
[0038]以制備IL C肽Rl試劑為例，由濃度為200mM的PBS緩沖液、5g牛血清白蛋白BSA、3g疊氮鈉和50g PEG8000制備得到，最終C肽Rl試劑中PBS緩沖液的濃度為200mM，牛血清白蛋白BSA的濃度為5g/L，疊氮鈉的濃度為3g/L，PEG8000的濃度為50g/L ；
以制備IL C肽R2試劑為例，由濃度為50mM的硼砂緩沖液、5g的牛血清白蛋白BSA、lg的疊氮鈉和包被抗人C肽抗體的致敏聚苯乙烯膠乳顆粒制備得到，最終C肽R2試劑中硼砂緩沖液的濃度為50mM，牛血清白蛋白BSA的濃度為5g/L，疊氮鈉的濃度為lg/L ；
以制備IL C肽校準品為例，由濃度為50mM的Tris-HCl緩沖液、3g牛血清白蛋白BSA、Ig疊氮鈉和C肽重組蛋白制備得到，最終C肽校準品中Tris-HCl緩沖液的濃度為50mM，牛血清白蛋白BSA的濃度為3g/L，疊氮鈉的濃度為lg/L ；
上述C肽Rl試劑、C肽R2試劑和C肽校準品的制備方法可以采用實施例1中的制備方法。
[0039]實施例4:
一種定量檢測C肽的膠乳增強免疫比濁試劑盒，包括C肽Rl試劑、C肽R2試劑和C肽校準品。
[0040]以制備IL C肽Rl試劑為例，由濃度為200mM檸檬酸-磷酸鹽緩沖液、3.5g牛血清白蛋白BSA、2g疊氮鈉和30g PEG8000制備得到，最終C肽Rl試劑中檸檬酸-磷酸鹽緩沖液的濃度為200mM，牛血清白蛋白BSA的濃度為3.5g/L，疊氮鈉的濃度為2g/L，PEG8000的濃度為30g/L ；以制備IL C肽R2試劑為例，由濃度為50mM的甘氨酸緩沖液、5g的牛血清白蛋白BSA、Ig的疊氮鈉和包被抗人C肽抗體的致敏聚苯乙烯膠乳顆粒制備得到，最終C肽R2試劑中甘氨酸緩沖液的濃度為50mM，牛血清白蛋白BSA的濃度為5g/L，疊氮鈉的濃度為lg/L ；
以制備IL C肽校準品為例，由濃度為IOOmM的PBS緩沖液、3g牛血清白蛋白BSA、Ig疊氮鈉和C肽重組蛋白制備得到，最終C肽校準品中PBS緩沖液的濃度為IOOmM,牛血清白蛋白BSA的濃度為3g/L，疊氮鈉的濃度為lg/L ；
上述C肽Rl試劑、C肽R2試劑和C肽校準品的制備方法可以采用實施例1中的制備方法。
[0041]二、定量檢測C肽的膠乳增強免疫比濁試劑盒的使用方法 檢測儀器:0LYMPUS AU640全自動生化分析儀
分析方法:采用兩點終點法，具體參數為:測定波長:600nm ;(:肽校準品:25μ L ;(:肽町試劑:240 μ L ;C肽R2試劑:80 μ L ;校準方式:多點校準；反應方向:+。
[0042]將C肽校準品與C肽Rl試劑混合均勻，37°C孵育Imin后，讀取吸光度值Al，反應4min后讀取吸光度值A2，計算吸光度變化值Λ A= Α2-Α1 ;然后以Λ A值為縱坐標，對應的校準品濃度為橫坐標，繪制校準曲線，校準曲線如圖1所示。
[0043]取待測樣本25 μ L，按相同的方法測定其Λ Α，代入校準曲線，即可計算出待測樣本中C肽的含量。如果血清或尿液樣本中C肽的濃度超出校準曲線范圍，需對樣本進行稀釋后再檢測以保證檢測結果的準確性。
[0044]三、定量檢測C肽的膠乳增強免疫比濁試劑盒的性能測試
將實施例1制備的檢測C肽的膠乳增強免疫比濁試劑盒進行性能測試，主要測試其線性范圍、最低檢出限、重復性和準確度以及穩定性，同時將其與Roche公司生產的試劑盒進行比較。
[0045]I)線性范圍
將濃度為3710pmol/L的C肽樣本與生理鹽水按照體積比1:1、1:2、1:4、1:8、1:16和
1:32稀釋成六個濃度(Xi)的溶液，用所述測定方法測定各稀釋樣本濃度。每個濃度重復測定3次，取均值(YiX以Xi為自變量，以71為因變量求出線性回歸方程。按公式(I)計算相關系數r，結果顯示線性回歸方程為y=l.0131x+5.3413，相關系數r=0.9991，線性范圍相關性如圖2所示，結果表明試劑盒在18~3600pmol/L線性范圍內相關性較好。
【權利要求】
1.一種定量檢測C肽的膠乳增強免疫比濁試劑盒，其特征在于，包括C肽Rl試劑、C肽R2試劑和C肽校準品； 所述C肽Rl試劑由緩沖液、保護劑1、反應增強劑和防腐劑得到； 所述C肽R2試劑由緩沖液、保護劑1、防腐劑和包被抗人C肽抗體的致敏聚苯乙烯膠乳顆粒得到，其中包被抗人C肽抗體的致敏聚苯乙烯膠乳顆粒由抗人C肽抗體和聚苯乙烯膠乳顆粒偶聯得到；所述抗人C肽抗體為鼠源抗人C肽抗體、兔源抗人C肽抗體或者羊源抗人C肽抗體； 所述C肽校準品由緩沖液、保護劑I1、防腐劑和C肽重組蛋白得到。
2.根據權利要求1所述的定量檢測C肽的膠乳增強免疫比濁試劑盒，其特征在于，所述緩沖液為PBS緩沖液、Tris-HCl緩沖液、甘氨酸緩沖液、硼酸鹽緩沖液和檸檬酸-磷酸鹽緩沖液中的一種或者幾種； 其中C肽Rl試劑中緩沖液的濃度為20~200mM ；C肽R2試劑中緩沖液的濃度為20~200mM ；C肽校準品中緩沖液的濃度為20~200mM。
3.根據權利要求1所述的定量檢測C肽的膠乳增強免疫比濁試劑盒，其特征在于，所述保護劑I為牛血清白蛋白BSA、卵清蛋白OVA和明膠中的一種；其中C肽Rl試劑中保護劑I的濃度為I~10g/L ;(:肽R2試劑中保護劑I的濃度為I~10g/L ； 所述保護劑II為牛血清白蛋白BSA，其中C肽校準品中保護劑II濃度為I~8 g/L。
4.根據權利要求1所述的定量檢測C-肽的膠乳增強免疫比濁試劑盒，其特征在于，所述反應增強劑為PEG4000、PEG6000、PEG8000和PEG20000中的一種，其中C肽Rl試劑中反應增強劑的濃度為10~50g/L。
5.根據權利要求1所述的定量檢測C肽的膠乳增強免疫比濁試劑盒，其特征在于，所述防腐劑為疊氮鈉、硫柳汞和Proclin300中的一種； 其中C肽Rl試劑中防腐劑的濃度為0.3~3g/L <肽1?2試劑中防腐劑的濃度為0.3~3g/L ；C肽校準品中防腐劑的濃度為0.3~3g/L。
6.根據權利要求1 所述的定量檢測C肽的膠乳增強免疫比濁試劑盒，其特征在于，所述聚苯乙烯膠乳顆粒為羧基化聚苯乙烯膠乳顆粒或者醛基化聚苯乙烯膠乳顆粒，其粒徑為200 ~500nm。
7.根據權利要求1所述的定量檢測C肽的膠乳增強免疫比濁試劑盒，其特征在于，所述抗人C肽抗體為多克隆抗體或者單克隆抗體。
【文檔編號】G01N33/68GK103852584SQ201410122739
【公開日】2014年6月11日 申請日期:2014年3月28日 優先權日:2014年3月28日
【發明者】李民友, 吉權 申請人:重慶中元生物技術有限公司