利用檸檬酸根保護的AuNPs比色檢測萊克多巴胺的方法
【專利摘要】利用檸檬酸根保護的AuNPs比色檢測萊克多巴胺的方法，屬于分析化學【技術領域】；其特征在于利用萊克多巴胺可以引起檸檬酸根保護的AuNPs的聚集，從而使AuNPs溶液的顏色由酒紅色變為藍色，吸收峰發生紅移，可以通過肉眼和紫外分光光度計檢測食品中的萊克多巴胺的殘留量，檢測步驟包括：檸檬酸根保護的AuNPs的制備；利用比色法檢測萊克多巴胺(Ractopamine)；該方法可簡單、快速、靈敏的檢測萊克多巴胺(Ractopamine)，為以后的研究、生產、監管等提供了方便。
【專利說明】利用檸檬酸根保護的AuNPs比色檢測萊克多巴胺的方法
【技術領域】
[0001]利用檸檬酸根保護的AuNPs比色檢測萊克多巴胺的方法，屬于分析化學【技術領域】。
【背景技術】
[0002]瘦肉精是一類藥物的統稱，主要是腎上腺類、β激動劑、β -興奮劑(β-agonist)，任何能夠促進瘦肉生長、抑制肥肉生長的物質都可以叫做“瘦肉精”。
[0003]在中國，通常所說的瘦肉精主要包括鹽酸克倫特羅和萊克多巴胺等等，當它們以超過治療劑量5-10倍的用量用于家畜飼養時，即有顯著的營養“再分配效應”——促進動物體蛋白質沉積、促進脂肪分解抑制脂肪沉積，能顯著提高胴體的瘦肉率、增重和提高飼料轉化率，因此曾被用作牛、羊、禽、豬等畜禽的促生長劑、飼料添加劑。
[0004]萊克多巴胺(Ractopamine)屬于非蛋白質激素，耐熱，使用后會在豬體組織中形成殘留，尤其是在豬的肝臟等內臟器官殘留較高，食用后直接危害人體健康。其主要危害是:出現肌肉振顫、心慌、戰栗、頭疼、惡心、嘔吐等癥狀，特別是對高血壓、心臟病、甲亢和前列腺肥大等疾病患者危害更大，嚴重的可導致死亡。
[0005]瘦肉精可以提高豬的瘦肉率，帶來更多經濟價值，但大量食用對人體有很危險的副作用，給人類健康帶來重大隱患。
[0006]2001年廣東曾經出現過批量中毒事件。瘦肉精在上海曾經引發了幾百人的中毒事件。而在臺灣，由于從美國進口的豬肉里含有瘦肉精，幾乎挑起一場政治爭端。2008年10月，廣州至少五人因食用含瘦肉精豬肉引致中毒，患者均出現心悸、手震等癥狀，經嘔吐物送檢化驗顯示，均為瘦肉精所致。隨后，2010年9月，中國廣東省深圳市在蛇肉中檢測出瘦肉精，13名食客中毒。2010年，雨潤集團生產的食品中發現瘦肉精。2011年3月，雙匯集團被央視315晚會曝光使用瘦肉精豬肉。
[0007]目前，瘦肉精的檢測手段主要包括液相色譜法(HPLC)、氣相色譜-質譜法(GC-MS )、液相色譜-質譜法(LC-MS )、酶聯免疫法(ELISA篩選法)等。盡管這些方法靈敏度高，這些方法需要昂貴的設備，測定時間較長，成本高，需要專業技術人員操作，不適合現場快速檢測。因此需要建立一種快速、簡單、靈敏的方法檢測食品中的瘦肉精。
【發明內容】
[0008]本發明的目的是提供利用檸檬酸根保護的AuNPs比色檢測萊克多巴胺(Ractopamine)的方法，以快速、簡單、靈敏的檢測食品中瘦肉精萊克多巴胺的殘留量。
[0009]技術問題:利用利用朽1檬酸根保護的AuNPs比色檢測萊克多巴胺(Ractopamine)的方法基于以下原理:
[0010]新制備的檸檬酸根保護的AuNPs分散均勻，由于AuNPs表面羧基的作用而帶負電荷，溶液呈現酒紅色。
[0011]當加入萊克多巴胺(Ractopamine)后，由于其含有帶有正電的-NH2和-NH-基團，由于靜電吸附作用而使AuNPs聚集，顏色由酒紅色變成藍色，吸收峰發生紅移。
[0012]本發明的技術方案:檸檬酸根保護的AuNPs的制備；利用比色法觀察和檢測含有不同濃度的萊克多巴胺(Ractopamine)的體系。
[0013](I)檸檬酸根保護的AuNPs的制備
[0014]首先，將IOOmLlmM HAuCl4的HAuCl4溶液加入到三口燒瓶中，加熱至沸騰后迅速加入10mL38.8mM檸檬酸鈉溶液，繼續加熱至溶液由淡黃色變為深紅色，再加熱10分鐘后撤掉加熱裝置繼續攪拌15分鐘，將所得到的溶液冷卻至室溫后用0.4 μ m的微孔膜去掉沉淀物，濾液放置在4°C冰箱中以備檢測使用。
[0015](2)利用比色法觀察和檢測含有不同濃度的萊克多巴胺(Ractopamine)的體系
[0016]配制以下混合溶液:向含有250 μ L AuNPs和650 μ L水的離心管中，分別加入100 μ L不同濃度的萊克多巴胺溶液標準品，搖勻后反應20分鐘，AuNPs的顏色和吸收峰會隨著萊克多巴胺(Ractopamine)溶液濃度的變化而變化；根據A665A522與萊克多巴胺的濃度建立標準曲線。
[0017]所用萊克多巴胺(Ractopamine)標準品濃度依次為:3.19X IO^6M, 9.56Χ10-6Μ，
1.59 X IO^5M, 2.23 X IO^5M, 2.87 X IO^5M0 線性范圍為 3.19Χ10-6Μ_2.87 X KT5M
[0018]本發明的有益效果:本發明制備了檸檬酸根保護的AuNPs，并建立了一個簡單、快速、靈敏的信號法，能夠快速檢測萊克多巴胺(Ractopamine)，為今后的監管提供了方便。
【專利附圖】
【附圖說明】
[0019]圖1 不同體系的紫外吸收圖:(a) AuNPs, (b) AuNPs - Ractopamine, AuNPs, 1.00X1CT8M, Ractopamine, 3.32 X 1CT5M。
[0020]圖2不同濃度的萊克多巴胺標準品與AuNPs作用的紫外吸收圖:a_j:0M，3.32X1(T6M, 6.64X IO^6M, 9.95 X IO^6M, 1.33 X IO^5M, 1.66 X IO^5M, 1.99 X IO^5M, 2.32 X IO^5M, 2.65 X10-5Μ, 2.98 X IO^5M, 3.32Χ 10-5Μ。
[0021]圖3萊克多巴胺的標準曲線圖:以A665A522與萊克多巴胺的濃度建立標準曲線。
[0022]圖4不同反應時間(2min-38min,每兩分鐘檢測一次)對AuNPs - Ractopamine體系的影響圖:Ractopamine, 1.33X ICT6Mt5
【具體實施方式】
[0023]檸檬酸根保護的AuNPs的制備
[0024]材料/試劑:HAuC14,檸檬酸鈉購置于北京化學試劑公司
[0025]方法:首先，將IOOmLlmM HAuCl4的HAuCl4溶液加入到三口燒瓶中，加熱至沸騰后迅速加入10mL38.8mM檸檬酸鈉溶液，繼續加熱至溶液由淡黃色變為深紅色，再加熱10分鐘后撤掉加熱裝置繼續攪拌15分鐘，將所得到的溶液冷卻至室溫后用0.4μ m的微孔膜去掉沉淀物，濾液放置在4°C冰箱中以備檢測使用。
[0026]結果:AuNPs的紫外吸收光譜在522nm處有最大吸收峰，這與文獻報道相一致。
[0027]由于實驗的體系受到反應時間的影響，所以需要研究體系時間變化的影響。
[0028]材料/試劑:檸檬酸根保護的AuNPs ;萊克多巴胺標準品購自Sigma-Aldrich。
[0029]方法:向含有250 μ L AuNPs和650 μ L水的離心管中，加入100 μ L1.33 X 10-6Μ的萊克多巴胺溶液標準品，每隔2分鐘測定一次紫外吸收光譜，
[0030]結果:說明時間對整個體系是有影響的，當反應時間為20分鐘時，反應最完全，因此，最終選取20分鐘作為該反應的反應時間。
[0031]該方法用于萊克多巴胺的檢測
[0032]材料/試劑:檸檬酸根保護的AuNPs ;萊克多巴胺標準品購自Sigma-Aldrich。
[0033]方法:(1)向含有250 μ L AuNPs和650 μ L水的離心管中，分別加入100 μ L不同濃度的萊克多巴胺溶液標準品，搖勻后反應20分鐘，AuNPs的顏色和吸收峰會隨著萊克多巴胺(Ractopamine)溶液濃度的變化而變化。
[0034](2)所用萊克多巴胺(Ractopamine)標準品濃度依次為:3.19X IO^6M,
9.56 X 10-6Μ, 1 .59 X 10-5Μ, 2.23 X 10-5Μ, 2.87 X 10-5Μ。
[0035]結果:根據A665ZA522與萊克多巴胺的濃度建立標準曲線。線性范圍為
3.19Χ10_6Μ-2.87Χ10_5Μ。
【權利要求】
1.一種利用檸檬酸根保護的AuNPs比色檢測萊克多巴胺的方法，屬于分析化學【技術領域】，其特征在于利用萊克多巴胺可以引起檸檬酸根保護的AuNPs的聚集，從而使AuNPs溶液的顏色由酒紅色變為藍色，吸收峰發生紅移，可以通過肉眼和紫外分光光度計檢測食品中的萊克多巴胺的殘留量，檢測步驟包括:檸檬酸根保護的AuNPs的制備；利用比色法檢測萊克多巴胺(Ractopamine)；
2.如權利要求1所述的方法，其中所述檸檬酸根保護的AuNPs的制備步驟如下:首先，將IOOmLlmM HAuC14的HAuC14溶液加入到三口燒瓶中，加熱至沸騰后迅速加入10mL38.8mM檸檬酸鈉溶液，繼續加熱至溶液由淡黃色變為深紅色，再加熱10分鐘后撤掉加熱裝置繼續攪拌15分鐘，將所得到的溶液冷卻至室溫后用0.4μπι的微孔膜去掉沉淀物，濾液放置在4°C冰箱中以備檢測使用；
3.如權利要求1所述的方法，其中所述利用比色法觀察和檢測含有不同濃度的萊克多巴胺(Ractopamine)的體系步驟如下: 配制以下混合溶液:向含有250 μ L AuNPs和650yL水的離心管中，分別加入100 μ L不同濃度的萊克多巴胺溶液標準品(3.19 X 10-6Μ, 9.56 X 10-6Μ，1.59 X 10-5Μ，2.23Χ10-5Μ，2.87 X 10-5Μ)，搖勻后反應20分鐘，AuNPs的顏色和吸收峰會隨著萊克多巴胺(Ractopamine)溶液濃度的變化而變化； 根據Α665/Α522與萊克多巴胺的濃度建立標準曲線，線性范圍為3.19Χ10-6Μ-2.87Χ10-5Μ。
【文檔編號】G01N21/78GK103808719SQ201410088726
【公開日】2014年5月21日 申請日期:2014年3月11日 優先權日:2014年3月11日
【發明者】孫春燕, 羅葉麗, 郭佳佳, 李瑩, 曹先一, 許景月, 沈斐 申請人:吉林大學