一種用于檢測血清素的分子印記電化學傳感器的制備方法
【專利摘要】本發明公開了一種用于檢測血清素的分子印記電化學傳感器的制備方法，其包括將玻碳電極進行拋光和清洗預處理；配制含rGO的硫酸溶液，再加入苯胺并充分混合制備電聚合液，將玻碳電極浸入該電聚合液中進行電聚合反應，反應后干燥得到rGO/PANI復合膜修飾電極；配制含功能化金納米粒、氨基苯硫酚和血清素的PBS溶液，將該溶液靜置，得到分子印記自組裝溶液；向分子印記自組裝溶液中插入rGO/PANI復合膜修飾電極，用計時電流法進行電聚合反應；將電極浸入硫酸溶液中進行處理，得到檢測血清素的分子印記電化學傳感器。本傳感器增加了電極表面的導電性，提高了檢測靈敏度和對血清素的選擇性、增加了分子印記傳感器的靈敏度。
【專利說明】—種用于檢測血清素的分子印記電化學傳感器的制備方法
【技術領域】
[0001]本發明屬于分析檢測【技術領域】，具體涉及一種用于檢測血清素的分子印記電化學傳感器的制備方法。
【背景技術】
[0002]血清素(Serotonin，5-HT)是一種廣泛分布于中樞神經系統的單胺類神經遞質，對人類的情緒、睡眠和食欲等有重要的影響，因此，對血清素進行快速、準確的分析測定有助于臨床疾病的診斷。一些分析方法，如熒光測定法、酶聯免疫法、放射免疫法、化學發光法和質譜分析法等已經用于血清素的分析測定，但這些方法耗時，成本高且需要前處理過程。
[0003]電化學傳感器是一種重要的電子器件，因其設計簡單、靈敏度高、價格低廉等優點，被廣泛用于人體檢測、臨床診斷、環境分析、食品分析和產品檢測等，越來越受到人們的關注。分子印記屬于超分子化學中主客體化學范疇，來源于高分子化學與材料化學學科交叉的綜合學科。分子印記技術是一種制備具有特異選擇性或專一選擇性聚合物的技術，具有構效預定性、特異識別性和廣泛適用性等三大突出優點。目前電聚合分子印記傳感器傳感膜已有公開的報道，用分子印記方法富集檢測血清素已有文獻報道。Wilney de JesusRodrigues Santos 等人在文獻(Analytica Chimica Acta, 2009，631，170-176)中提出了一種利用氯高鐵血紅素結合分子印記技術來富集并催化檢測血清素含量的方法；ShabiAbbas Zaidi 等人在文獻(Electrophoresis, 2013, 34,1375-1382)中提出 了 一種利用雙模板分子印記結合毛細管電泳的方法檢測血清素含量的方法，但是這些方法的檢測靈敏度低，不能準確地檢測生物樣品中血清素的含量。
[0004]由于血清素存在于復雜基質中，含量低、分析檢測難度大，其痕量分析仍是目前亟待解決的問題。現有的測定方法都存在樣品處理方法復雜、成本高等問題，因此，建立簡便、低成本、高靈敏度和高選擇性的血清素檢測方法，對加快分析檢測技術發展具有重要意義。結合分子印記技術的優良選擇性進行樣品前處理可實現痕量目標物的快速富集。曾有報道以分子印記技術結合傳統分析方法檢測復雜樣品中的血清素，雖然可提高檢測的靈敏度和準確性，但仍然面臨樣品處理復雜、耗時多的缺點。電化學傳感器最大的優勢在于靈敏度高、方便快捷，可以實現實時檢測。傳統的電化學檢測多數局限于本身具有電化學活性的待測物，與分子印記相結合的電化學傳感器有望突破傳統的局限，可通過待測目標物與特異性孔穴結合阻塞探針分子的通路產生電化學響應。但電聚合到電極上的分子印記層多為不導電或弱導電物質，大大影響了傳感器的靈敏度。如何克服現有技術的不足已成為分析檢測【技術領域】中亟待解決的重點難題。
【發明內容】
[0005]本發明的目的在于克服現有技術的不足而提供一種用于檢測血清素的分子印記電化學傳感器的制備方法，該方法具有綜合電化學傳感器，還原氧化石墨烯/聚苯胺復合材料與金納米粒摻雜的印記聚合物的優點，構筑用于檢測血清素的分子印記電化學傳感器，以實現對生物樣品中血清素的高靈敏度、高選擇性及快速檢測。
[0006]本發明的目的可以通過以下措施達到:
[0007]—種用于檢測血清素的分子印記電化學傳感器的制備方法，其包括以下步驟:
[0008](I)電極預處理:將玻碳電極進行拋光和清洗預處理；
[0009](2)rG0/PANI復合膜修飾電極制備:配制含rGO的硫酸溶液，再加入苯胺并充分混合制備電聚合液，將步驟(1)得到的玻碳電極浸入該電聚合液中進行電聚合反應，反應后干燥得到rGO/PANI復合膜修飾電極；
[0010](3)分子印記電聚合溶液配制:配制含功能化金納米粒、氨基苯硫酚和血清素的PBS溶液，將該溶液除氧后密封，在避光環境下靜置，得到分子印記自組裝溶液；
[0011](4)電聚合反應:向分子印記自組裝溶液中插入所述rGO/PANI復合膜修飾電極，于0.2~1.2V電位下，用計時電流法進行電聚合反應；
[0012](5)模板分子洗脫:將步驟(4)得到的電極浸入硫酸溶液中，在-0.8~-0.2V電位下進行處理，得到檢測血清素的分子印記電化學傳感器。
[0013]在步驟(1)中，優選的，將玻碳電極拋光，先依次用乙醇和水超聲清洗，然后用雙蒸水淋洗并用氮氣吹干完成預處理步驟。
[0014]在步驟(2)中，優選的，配制含rGO的硫酸溶液后進行超聲處理；加入苯胺后先通氮除氧，再進行超聲處理制備電聚合液；該步驟中的電聚合反應采用循環伏安法或計時電流法。電聚合液中rGO的濃度為2~14 μ g/mL ;硫酸濃度為0.3~0.6mol/L ;苯胺的濃度為0.02~0.10mol/L，超聲時間為30~80min ;電聚合電位為-0.5~1.0V。
[0015]在步驟(3)中，優選的，含功能化金納米粒、氨基苯硫酚和血清素的PBS溶液配制后，用氮氣除氧后密封，在20~30°C和避光環境下放置2~8h，得到分子印記自組裝溶液。氨基苯硫酚為對氨基苯硫酚、鄰氨基苯硫酚或間氨基苯硫酚；所述PBS溶液中功能化金納米粒、氨基苯硫酚和血清素的濃度依次為12~28 μ g/mL、6~14mmol/L和0.5~1.4mmol/L0
[0016]在步驟(4)中，優選的，先將分子印記自組裝溶液避光通氮氣，然后再插入rGO/PANI復合膜修飾電極；該步驟中的電聚合反應時間為200~700s，反應后取出、淋洗和吹干。
[0017]在步驟(5)中，所述硫酸溶液的濃度為0.2~1.2mol/L ;該步驟中的處理時間為200 ~600so
[0018]本發明與現有技術相比其顯著優點是:一是本發明通過電聚合將rGO/PANI復合膜修飾到電極表面，還將分子印記與電化學傳感器相結合，進一步將金納米粒摻雜至分子印記聚合物膜中，多結構之間的相互配合協同下，大大增加了電極表面的導電性，提高了檢測靈敏度，不但提高了電化學傳感器的選擇性，可實現對生物樣品中血清素的選擇性檢測，而且響應快速、穩定性和耐受性好，可實現生物樣品中血清素的高效、靈敏和實時檢測。其還彌補了印記聚合物膜導電性及催化性能低的缺陷，大大增加了分子印記傳感器的靈敏度。本發明對臨床診斷、病理學研究、生物化學進步、神經化學發展等具有重要意義。
【專利附圖】
【附圖說明】
[0019]圖1是本發明傳感器制備方法的流程示意圖。[0020]圖2是本發明傳感器制備過程中各階段循環伏安對比圖。
[0021]圖3是本發明傳感器的選擇性試驗DPV圖。
[0022]圖4是本發明傳感器的安培計時電流響應曲線(i_t曲線)及標準曲線圖。
【具體實施方式】
[0023]以下結合附圖和實施例對本發明作進一步的詳細說明。
[0024]結合圖1，本發明提出的一種用于檢測血清素的分子印記電化學傳感器的制備方法，經步驟一電極預處理、步驟二 rGO/PANI復合膜修飾電極制備、步驟三分子印記電聚合溶液配制、步驟四電聚合反應以及步驟五模板分子洗脫，而制得檢測血清素的分子印記電化學傳感器。以下列舉的實施例公開了本發明的【具體實施方式】。
[0025]本發明采用的試劑均為分析純。本發明的實施例中選用的試劑的來源=Al2O3(0.05 μ m,上海辰華儀器有限公司)，石墨粉(Alfa Aesar公司)，血清素、多巴胺(常州亞邦制藥有限公司)，硼氫化鈉(NaBH4)、抗壞血酸、尿酸、腎上腺素、無水乙醇(分析純，國藥集團化學試劑有限公司)，氯化鉀(KCl )、鐵氰化鉀(K3Fe (CN)6)(分析純，上海新寶精細化工廠)，磷酸二氫鈉(NaH2PO4.2H20)、磷酸氫二鈉(Na2HPO4.12H20)(南京化學試劑有限公司)，氯金酸、對氨基苯硫酹(p-aminothiophenol, pATP)(阿拉丁試劑有限公司),硫酸(H2S04,上海化學試劑有限公司)，苯胺(上海凌峰化學試劑有限公司)，實驗用水為二次蒸餾水，0.2mol/L Na2HPO4 和 0.2moI/L NaH2PO4 水溶液配制 ρΗ7.0 的磷酸鹽緩沖溶液(phosphate bufferedsolution, PBS)。
[0026]本發明涉及的還原氧化石墨烯(rGO)可采用現有方法制備(參見Stankovich, S.; Dikin, D.A.; Piner, R.D.; Kohlhaas, K.A.; Kleinhammes, A.; Jia, Y.Y.;ffu, Y.; Nguyen, S.T.; Ruoff, R.S.Carbon2007, 45，1558.)。
[0027]本發明涉及的對電化學傳感器的檢測方法可選用以下任一方法:
[0028]循環伏安法(CV):檢測電位范圍為-0.1?0.4V，掃描速率為100mV/s。測試底液為 0.lmol/L KCl 和 lmmol/L K3Fe(CN)6 溶液。
[0029]差示脈沖法(DPV):檢測電位范圍為-0.2?0.5V，掃描速率為50mV/s，電位增量為
0.005V，振幅為0.05V，脈沖寬度為0.ls，采樣寬度為0.02s，靜止時間為2s。測試前電極在H2SO4溶液中清洗至背景電流恢復。測試底液為含有一定濃度血清素的PBS溶液。
[0030]樣品測定:取0.5mL人血樣，用稀釋過的氨水進行蛋白沉淀并離心處理得到血清樣品，再以1:10的比例用PBS進行稀釋，通氮氣lOmin，采用DPV法測定樣品中血清素的濃度，進行加樣回收率試驗。
[0031]本發明的實施例中涉及的rGO、功能化金納米粒的制備方法如下:
[0032]rGO:首先依照 Hummers (參見 Hummers, W.S.; Offeman, R.E.J.Am.Chem.Soc.1958，80, 1339.)法通過石墨粉合成出氧化石墨烯(GO)。將50mg GO和IOOmL超純水加入至250mL三口燒瓶中并超聲至均勻,然后加入16mmol水合肼并在85°C條件下加熱攪拌IOh,所得產物用超純水進行過濾洗漆，即得。(參見Stankovich, S.;Dikin, D.A.;Piner, R.D.; Kohlhaas, K.A.; Kleinhammes, A.; Jia, Y.Y.; ffu, Y.; Nguyen, S.T.; Ruof f, R.S.Carbon2007, 45，1558.)。
[0033]功能化金納米粒:將IOmL含32mg氯金酸的乙醇溶液與5mL含6mg pATP的甲醇溶液混合，在冰浴中攪拌lh，然后迅速加入2.5mL0.5mol/L硼氫化鈉溶液，然后在冰浴中攪拌lh，再于室溫下攪拌10h，最后所得溶液分別用甲醇和乙醇清洗2次，即得功能化金納米粒(參見 Frasconi, M., Tel-Vered, R., Riskin’ M., ffillner, 1., 2010.J.Am.Chem.Soc.82，2512-2519)。
[0034]實施例1
[0035]一種用于檢測血清素的分子印記電化學傳感器的制備方法，包括以下具體步驟:
[0036]步驟一，電極預處理:將玻碳電極經0.05 μ m的Al2O3懸池液拋光后,用雙蒸水淋洗，人然后依次用無水乙醇、去離子水超聲清洗lmin，最后再用雙蒸水淋洗并用氮氣吹干；
[0037]步驟二，rGO/PANI復合膜修飾電極制備:配制濃度為2 μ g/mL的rGO硫酸溶液(0.3mol/L)并超聲處理30min,然后加入苯胺配制成0.02mol/L的濃度并通氮氣除氧后再超聲30min。將步驟一預處理后的玻碳電極浸入到含rGO和苯胺的硫酸溶液中，用循環伏安法(-0.5~0.7V)進行電聚合后并吹干，得到rGO/PANI復合膜修飾電極；
[0038]步驟三，分子印記自組裝溶液配制:配制含0.5臟01/1血清素，12 4 8/!^功能化金納米粒和6mmol/L鄰氨基苯硫酚的PBS溶液，將該溶液用氮氣除氧IOmin后密封，在室溫和避光環境下放置2h，得到分子印記自組裝溶液；
[0039]步驟四，電聚合反應:將步驟三得到的分子印記自組裝溶液倒入反應容器中，避光、通氮氣5min后,插入步驟 二得到的rGO/PANI復合膜修飾電極,于+0.2V電位下,應用計時電流法電聚合200s，然后取出、用去離子水淋洗和氮氣吹干；
[0040]步驟五，模板分子洗脫:將步驟四得到的電極浸入硫酸溶液中，在-0.8V電恒電壓、0.2mol -L-1H2SO4溶液中處理200s去除模板分子，然后取出，用去離子水反復淋洗干凈、氮氣吹干，得到檢測血清素的分子印記電化學傳感器。
[0041]實施例2
[0042]一種用于檢測血清素的分子印記電化學傳感器的制備方法，包括以下具體步驟:
[0043]步驟一，電極預處理:將玻碳電極經0.05 μ m的Al2O3懸池液拋光后,用雙蒸水淋洗，人然后依次用無水乙醇、去離子水超聲清洗lmin，最后再用雙蒸水淋洗并用氮氣吹干；
[0044]步驟二，rGO/PANI復合膜修飾電極制備:配制濃度為6 μ g/mL的rGO硫酸溶液(0.4mol/L)并超聲處理50min,然后加入苯胺配制成0.04mol/L的濃度并通氮氣除氧后再超聲50min。將步驟一預處理后的玻碳電極浸入到含rGO和苯胺的硫酸溶液中，用循環伏安法(-0.3~0.9V)進行電聚合后并吹干，得到rGO/PANI復合膜修飾電極；
[0045]步驟三，分子印記自組裝溶液配制:配制含0.7mmol/L血清素，16 μ g/mL功能化金納米粒和8mmol/L對氨基苯硫酚的PBS溶液，將該溶液用氮氣除氧IOmin后密封，在室溫和避光環境下放置4h，得到分子印記自組裝溶液；
[0046]步驟四，電聚合反應:將步驟三得到的分子印記自組裝溶液倒入反應容器中，避光、通氮氣5min后,插入步驟二得到的rGO/PANI復合膜修飾電極,于+0.6V電位下,應用計時電流法電聚合400s，然后取出、用去離子水淋洗和氮氣吹干；
[0047]步驟五，模板分子洗脫:將步驟四得到的電極浸入硫酸溶液中，在-0.6V電恒電壓、0.5mol -L-1H2SO4溶液中處理400s去除模板分子，然后取出，用去離子水反復淋洗干凈、氮氣吹干，得到檢測血清素的分子印記電化學傳感器。
[0048]實施例3[0049]一種用于檢測血清素的分子印記電化學傳感器的制備方法，包括以下具體步驟:
[0050]步驟一，電極預處理:將玻碳電極經0.05 μ m的Al2O3懸池液拋光后,用雙蒸水淋洗，人然后依次用無水乙醇、去離子水超聲清洗lmin，最后再用雙蒸水淋洗并用氮氣吹干；
[0051]步驟二，rGO/PANI復合膜修飾電極制備:配制濃度為10 μ g/mL的rGO硫酸溶液(0.5mol/L)并超聲處理60min,然后加入苯胺配制成0.08mol/L的濃度并通氮氣除氧后再超聲60min。將步驟一預處理后的玻碳電極浸入到含rGO和苯胺的硫酸溶液中，用循環伏安法(-0.2~0.8V)進行電聚合后并吹干，得到rGO/PANI復合膜修飾電極；
[0052]步驟三，分子印記自組裝溶液配制:配制含1.0臟01/1血清素，2(^8/1^功能化金納米粒和lOmmol/L對氨基苯硫酚的PBS溶液，將該溶液用氮氣除氧IOmin后密封，在室溫和避光環境下放置6h，得到分子印記自組裝溶液；
[0053]步驟四，電聚合反應:將步驟三得到的分子印記自組裝溶液倒入反應容器中，避光、通氮氣5min后,插入步驟二得到的rGO/PANI復合膜修飾電極,于+0.9V電位下,應用計時電流法電聚合500s，然后取出、用去離子水淋洗和氮氣吹干；
[0054]步驟五，模板分子洗脫:將步驟四得到的電極浸入硫酸溶液中，在-0.4V電恒電壓、0.8mol -L-1H2SO4溶液中處理500s去除模板分子，然后取出，用去離子水反復淋洗干凈、氮氣吹干，得到檢測血清素的分子印記電化學傳感器。
[0055]實施例4
[0056]一種用于檢測血清 素的分子印記電化學傳感器的制備方法，包括以下具體步驟:
[0057]步驟一，電極預處理:將玻碳電極經0.05 μ m的Al2O3懸池液拋光后,用雙蒸水淋洗，人然后依次用無水乙醇、去離子水超聲清洗lmin，最后再用雙蒸水淋洗并用氮氣吹干；
[0058]步驟二，rGO/PANI復合膜修飾電極制備:配制濃度為14 μ g/mL的rGO硫酸溶液(0.6mol/L)并超聲處理80min,然后加入苯胺配制成0.10mol/L的濃度并通氮氣除氧后再超聲80min。將步驟一預處理后的玻碳電極浸入到含rGO和苯胺的硫酸溶液中，用循環伏安法(-0.1~1.0V)進行電聚合后并吹干，得到rGO/PANI復合膜修飾電極；
[0059]步驟三，分子印記自組裝溶液配制:配制含1.4mm0l/L血清素，24μg/mL功能化金納米粒和14mmol/L間氨基苯硫酚的PBS溶液，將該溶液用氮氣除氧IOmin后密封，在室溫和避光環境下放置8h，得到分子印記自組裝溶液；
[0060]步驟四，電聚合反應:將步驟三得到的分子印記自組裝溶液倒入反應容器中，避光、通氮氣5min后,插入步驟二得到的rGO/PANI復合膜修飾電極,于+1.2V電位下,應用計時電流法電聚合700s，然后取出、用去離子水淋洗和氮氣吹干；
[0061]步驟五，模板分子洗脫:將步驟四得到的電極浸入硫酸溶液中，在-0.2V電恒電壓、1.2mol -L-1H2SO4溶液中處理600s去除模板分子，然后取出，用去離子水反復淋洗干凈、氮氣吹干，得到檢測血清素的分子印記電化學傳感器。
[0062]結合圖2至圖4，對本發明中傳感器制備過程中的電化學表征作進一步的詳細說明。
[0063]一是傳感器制備過程中各階段循環伏安對比:按上述CV法在測試背景溶液中對裸玻碳電極、rGO/PANI修飾電極、摻雜金納米的印記傳感器和未摻雜金納米的印記傳感器進行了循環伏安表征。圖2是本發明中傳感器制備過程中各階段循環伏安對比圖。按照實施例三的方法，在圖2中，a為裸玻碳電極的CV曲線、b為rGO/PANI修飾電極的CV曲線、c為摻雜金納米的印記傳感器洗脫模板分子后的CV曲線、d為未摻雜金納米的印記傳感器并洗脫模板分子后的CV曲線。圖2結果顯示，在b中循環伏安電流響應值和CV曲線面積相對于a明顯增大，表明經rGO/PANI復合膜修飾后，電極的表面傳遞電荷的能力增強，導電性能變大。對比c和d曲線，結果表明摻雜金納米粒的印記聚合物膜的導電及電催化性能要優于未摻雜的印記聚合物膜。
[0064]二是選擇性試驗:選擇性是考察分子印記聚合物印記效果和性能好壞的重要指標，也是傳感器能否應用于實際樣品檢測的前提。設計干擾性實驗用于考察分子印記效果，即研究膜內識別位點對模板分子是否具有特異選擇性，是否不受其他競爭性底物的干擾。
[0065]圖3所示為按照實施例三制備的印記傳感器分別在空白PBS (pH7.5)溶液(a)，含5.0ymol/L5-HT 的 PBS (ρΗ7.5)溶液(b)和含 5.0 μ mol/L5_HT、150 μ mol/L AA、150ymol/L DA、150 μ mol/L UA、150 μ mol/L EP的PBS混合溶液(c)中的DPV響應曲線。通過對比，在0.32V電位處為5-HT的電流響應峰，且在加入濃度30倍于5-HT的干擾物后其響應電流未見改變，說明在印記傳感器對5-HT測定過程中可有效的避免一些常見干擾物對測定的影響。
[0066]二是樣品測定方法:
[0067]a.標準曲線與檢測限
[0068]圖4是本發明實施例三傳感器的DPV曲線及標準曲線圖。圖4顯示，血清素的響應電流與其濃度在0.2~10.0 μ mol/L的范圍內呈良好的線性關系，線性回歸方程分別為Ipa ( μ A) =1.365C5_ht ( μ mo l-1) +1.035 (R=0.998)。
[0069]由于rGO/PANI復合膜增加了電極的導電性能，以及印記聚合物具有特異性識別性能，且摻雜的金納米粒有效的提高了印記膜的導電性能，因此可使檢測限(LOD)達到
11.7nmol/L (S/N=3)。
[0070]b.傳感器的穩定性和重現性
[0071]以本方法制備5根傳感器，在血清素的PBS溶液中測定其電流響應，RSD為3.9% ；同一根傳感器重復測定15次，RSD為3.2%。表明傳感器制備方法穩定，重現性好，且測定重復性優良。
[0072]另將傳感器在干燥的條件下室溫保存30天，其電流響應降為初始時的91%，表明制備的傳感器具有良好的穩定性。
[0073]c.實際樣品分析
[0074]以本方法制備的傳感器用加樣回收法測定人血樣中的血清素，取0.5mL人血樣，用稀釋過的氨水進行蛋白沉淀并離心處理得到血清樣品，再以1:10的比例用PBS進行稀釋，通氮氣lOmin，采用上述中的DPV法測定樣品中血清素的濃度，進行加樣回收率試驗，具
體結果見下表:
[0075]
【權利要求】
1.一種用于檢測血清素的分子印記電化學傳感器的制備方法，其特征在于包括以下步驟: (1)將玻碳電極進行拋光和清洗預處理；(2)配制含rGO的硫酸溶液，再加入苯胺并充分混合制備電聚合液，將步驟(1)得到的玻碳電極浸入該電聚合液中進行電聚合反應，反應后干燥得到rGO/PANI復合膜修飾電極； (3)配制含功能化金納米粒、氨基苯硫酚和血清素的PBS溶液，將該溶液除氧后密封，在避光環境下靜置，得到分子印記自組裝溶液； (4)向分子印記自組裝溶液中插入所述rGO/PANI復合膜修飾電極，于0.2?1.2V電位下，用計時電流法進行電聚合反應； (5)將步驟(4)得到的電極浸入硫酸溶液中，在-0.8?-0.2V電位下進行處理，得到檢測血清素的分子印記電化學傳感器。
2.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于在步驟(I)中，將玻碳電極拋光，先依次用乙醇和水超聲清洗，然后用雙蒸水淋洗并用氮氣吹干完成預處理步驟。
3.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于在步驟(2)中，配制含rGO的硫酸溶液后進行超聲處理；加入苯胺后先通氮除氧，再進行超聲處理制備電聚合液；該步驟中的電聚合反應采用循環伏安法或計時電流法。
4.根據權利要求3所述的制備方法，其特征在于在步驟(2)中，電聚合液中rGO的濃度為2?14 μ g/mL ;苯胺的濃度為0.02?0.10mol/L，超聲時間為30?80min。
5.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于在步驟(3)中，含功能化金納米粒、氨基苯硫酚和血清素的PBS溶液配制后，用氮氣除氧后密封，在20?30°C和避光環境下放置2?8h，得到分子印記自組裝溶液。
6.根據權利要求1或5所述的制備方法，其特征在于在步驟(3)中，所述氨基苯硫酚為對氨基苯硫酹、鄰氨基苯硫酹或間氨基苯硫酹；所述PBS溶液中功能化金納米粒、氨基苯硫酌.和血清素的濃度依次為12?28 μ g/mL、6?14mmol/L和0.5?1.4mmol/L。
7.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于在步驟(4)中，先將分子印記自組裝溶液避光通氮氣，然后再插入rGO/PANI復合膜修飾電極；該步驟中的電聚合反應時間為.200?700s，反應后取出、淋洗和吹干。
8.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于在步驟(5)中，所述硫酸溶液的濃度為.0.2?1.2mol/L ;該步驟中的處理時間為200?600s。
【文檔編號】G01N27/30GK103884748SQ201410081237
【公開日】2014年6月25日 申請日期:2014年3月6日 優先權日:2014年3月6日
【發明者】周學敏, 姜慧君, 薛誠, 王溪, 韓青, 朱婉瑩 申請人:南京醫科大學