一種南極磷蝦蝦殼無機氟原位顯示的方法
【專利摘要】本發明公開了一種南極磷蝦蝦殼無機氟原位顯示的方法，包括以下步驟：（一）前期準備：A.制備鋁-鈣黃綠素熒光染液；B.取載玻片，用無水乙醇浸泡，晾干，備用；（二）制作玻片：（1）取材：取南極磷蝦胸、腹或/和尾部位的組織；（2）冷凍切片；（3）上述切片后，將切片在10～25℃下晾干；（4）染色，晾干；封片，即得可顯示南極磷蝦蝦殼中無機氟原位的玻片，在熒光倒置顯微鏡下觀察，可見：富氟的黃綠色熒光顆粒在甲殼內呈星點狀分布；富氟的黃綠色熒光顆粒在甲殼近外側下呈層狀分布；蝦殼外表突起部分富氟呈黃綠色。本發明所制玻片南極磷蝦蝦殼中無機氟原位顯示清楚，是特別好的科研教學材料，建議推廣應用。
【專利說明】一種南極磷蝦蝦殼無機氟原位顯示的方法
【技術領域】
[0001]本發明涉及一種南極磷蝦蝦殼無機氟原位顯示的玻片制作技術。
【背景技術】
[0002]南極磷蝦是南大洋食物鏈的關鍵物種，是世界上生物量最大的單種生物資源，其生物質能約5?50億噸(因估計方法不同有較大差異)，最低保守估計有6?10億噸，是巨大的漁業資源。每年可捕獲量達I?1.5億噸，這比目前全世界魚類和甲殼類漁獲量總和(0.99億噸/年)還多。我國有18億畝耕地，每年的糧食總產量接近6億噸。南極磷蝦每年的可捕獲量相當于3?4.5億畝耕地的年產量，是龐大的境外資源。
[0003]南極磷蝦是地球上最大的動物蛋白庫，具有人體所需的全部氨基酸。賴氨酸含量比金槍魚、虎紋蝦及牛肉高很多，是理想的蛋白資源。南極磷蝦蝦油含磷脂35%左右。其中80%為含不飽和脂肪酸的卵磷脂，是世界上目前發現的含磷脂最高的動物。南極磷蝦蝦油中富含EPA、DHA等不飽和脂肪酸、蝦青素及其酯。南極磷蝦富含28烷醇、皂甙、生物堿等健身、抗癌、抗病毒藥物成分，具有重大食用、藥用開發價值。
[0004]當今地球人口已達70億。預測至2050年全球人口將達90億，人口膨脹和糧食短缺問題日益嚴重。世界各國都將南極磷蝦作為重要的食物資源，對南極磷蝦資源的爭奪也日趨激烈。南極磷蝦的開發和應用對我國(人口多，資源相對貧乏)有重大戰略意義和迫切性。20世紀60年代，前蘇聯率先赴南極試捕磷蝦，隨后日本、波蘭、法國、智利也進行了試捕。開展南極磷蝦產業的主要有日本、韓國、英國、波蘭、挪威、加拿大。
[0005]我國自1984年對南極磷蝦進行了系統的研究。2009年開始由遼寧和上海兩家大型漁業集團試捕(最佳時每小時可捕獲50多噸)。
[0006]盡管世界各國對南極磷蝦捕撈和開發熱情不減，然而南極磷蝦的捕撈量自90年代捕撈高峰期(1982年可達50多萬噸)之后，年捕撈量一直處于較低水平，2010年全世界總捕撈量為21.1萬噸。南極磷蝦中氟含量過高是其中制約其資源開發利用的突出問題。潘健明等(2000)在《海洋學報》上發表了“南大洋磷蝦富氟機制1.氟的化學賦存形態研究”:南極磷蝦經10%K0H甲醇溶液加熱回流的消解液經氯仿提取的作為有機氟，把溶于水的作為無機氟。馬偉等“一種南極磷蝦中回收氟化物及制備低氟蝦粉的方法”將南極磷蝦勻漿，用強酸調酸，減壓蒸發精餾回收氟代羥酸，目的是制備含氟低于2mg/Kg的蝦粉，但精餾的是否為氟代羥酸未見檢測分析和鑒定。也未見后續其他雜志有關氟代羥酸的報道。南極磷蝦中是否真的存在有機氟(含C-F鍵的)未見任何鑒定報道。海水中氟平均濃度為1.3X10_6，潘健明認為構成南極磷蝦蝦殼質層的主要元素鈣、磷和氟以無機物形式存在。這一作用主要通過氟與磷灰石的反應而實現。即羥磷灰石在堿性條件下被氟取代生成氟磷灰石。氟也可以和CaCO3等作用形成含氟無機物。南極磷蝦是世界上含氟最高的甲殼生物，氟主要存在于蝦殼。不溶性的含氟無機物在蝦殼的原位存在如果被顯示，這對于未來研究中去除南極磷蝦中的氟提供了技術研究依據。如果將這種顯示做成玻片則可作為一種商品用于科研和教學。
【發明內容】
[0007]針對上述現有技術，本發明提供了一種南極磷蝦蝦殼無機氟原位顯示的玻片制作技術。
[0008]本發明是通過以下技術方案實現的:
[0009]一種南極磷蝦蝦殼無機氟原位顯示的方法，包括以下步驟:
[0010](一)前期準備:
[0011]A.制備鋁-鈣黃綠素熒光染液:
[0012](I)制備1.00X10_3mol/L鈣黃綠素儲備液:溶劑為無氟水，配制后儲存在棕色瓶中，備用；
[0013]優選的，具體方法為:稱取0.0623g鈣黃綠素，用IOml0.lmol/L的KOH溶液(用無氟水配制)溶解，250W，28KHz，10?20°C，5?12分鐘，超聲波輔助溶解，然后用無氟水定容于IOOmL棕色容量瓶中，搖勻，放入冰箱中4°C保存；備用；
[0014]所述無氟水是通過以下方法制備得到的:
[0015]①稱量1.0Og分析純氯化鉀,加入9ml三蒸水中溶解,配成10% (g/ml)的KCl溶液；
[0016]②量取300ml三蒸水于錐形瓶中，加入6滴(每滴0.2ml)上述10%的KCl溶液，充分混勻；
[0017]③用加熱套220°C加熱錐形瓶，冷凝回流，收集液體，即得無氟水；
[0018](2)制備1.00X10_2mol/L鋁儲備液:溶劑為無氟水，配制后備用；
[0019]優選的，具體方法為:稱取0.1876gAl (NO3)3.9H20，溶于少量無氟水中，再移入50mL容量瓶中以無氟水稀釋定容，搖勻，放入冰箱中4°C保存，備用；
[0020](3)制備鋁-鈣黃綠素熒光染液:用無氟水將鈣黃綠素儲備液稀釋至L 00 X lO—W/L，并與鋁儲備液以體積比5.5?6.5:4.5?5.5的比例混合均勻，用
0.lmol/L的KOH溶液(用無氟水配制)調節pH至8.9，室溫避光靜置48h后除去上清液，用pH為8.9的無氟水多次沖洗絮狀沉淀，直至在熒光倒置顯微鏡(0LYMPUSIX71)下觀察不到黃綠色熒光顆粒，然后將沉淀溶于pH為8.9的無氟水(沉淀與無氟水的用量關系是體積比為1:9 ;pH為8.9的無氟水是用上述KOH溶液調節無氟水的pH至8.9所得)，得鋁-鈣黃綠素熒光染液(沖洗絮狀沉淀的目的是除去玻璃容器、藥品等可能帶來的氟與鋁鈣黃綠素染液形成黃綠色熒光顆粒；鋁-鈣黃綠素熒光染液是不斷沖洗沉淀后，沉淀溶于pH為8.9的無氟水所得到的液體);
[0021]B.載玻片的處理:取載玻片，用無水乙醇浸泡5?10分鐘后取出，晾干，備用；
[0022](二)制作玻片:
[0023](I)取材:稱取適量的冷凍貯藏的鮮南極磷蝦整蝦，冷藏室自然解凍，浸入質量百分數為4%甲醛溶液24小時，再取出浸入質量百分數15%?25%蔗糖溶液至沉入底部，放入冰箱中4°C保存；取南極磷蝦胸、腹、尾不同部位的組織，截取0.5?Icm長進行下一步的冷凍切片；
[0024](2)冷凍切片:開啟冷凍切片機并將冷凍切片機(LEICACM1850)預降至所需溫度(_26°C )，取出組織支承器，放平擺好上述截取的組織，周邊滴上包埋劑(浙江寧海得力工業園N0.7302得力膠水)500?1000 μ L，速放于冷凍臺上冰凍，用吸熱器壓住組織，至包埋劑與組織凍結成白色冰體即可切片；
[0025]優選的，切片的具體方式為:將冷凍好的組織塊(白色冰體)夾緊于切片機支承器上，啟動粗進退鍵，轉動旋鈕，將組織修平；然后，調節欲切的厚度為30?60 μ m ;調好防卷板，進行切片；
[0026](3)上述切片后，切好的組織在干凈的玻片上黏附時順著一個方向稍微用力輕輕一帶，可避免組織攤片過程中皺折，保證組織結構的完整及切片的美觀；將切片在10?25°C下晾干；
[0027](4)用鋁-鈣黃綠素染液20?40 μ L進行染色2h，晾干；觀察所得玻片，可見富氟的黃綠色熒光顆粒在甲殼內呈星點狀分布(圖1);可見富氟的黃綠色熒光顆粒在甲殼近外側下呈層狀分布(圖2);可見蝦殼外表突起部分富氟呈黃綠色(圖3);選取在熒光倒置顯微鏡下(OLYMPUS 1X71)顯示原位富氟位置最清楚的玻片，滴加中性樹膠40?60 μ L (國藥集團化學試劑有限公司，10004160中性樹膠)，然后加上蓋玻片，封片后晾干24h，所得玻片可以用于科研和教學，在熒光倒置顯微鏡下，物鏡的放大倍數為10X，目鏡的放大倍數為4X的條件下觀察，所制玻片南極磷蝦蝦殼中無機氟原位顯示清楚。
[0028]所述黃綠色熒光顆粒是由蝦殼內的含氟顆粒與鋁-鈣黃綠素熒光染液反應生成的，其顯色反應原理為:在鈣黃綠素熒光試劑溶液中加入熒光猝滅劑Al3+，Al3+和鈣黃綠素分子發生配合反應，生成的鈣黃綠素-Al3+配合物不顯熒光，使鈣黃綠素溶液的熒光猝滅，之后加入NaF溶液，由于F_與Al3+形成的配合物比鈣黃綠素-Al3+更穩定，加入后使鈣黃綠素游離出來而重顯熒光，其具體原理:如下所示:
[0029]鈣黃綠素+Al3+=鈣黃綠素-Al3++H+ ；
[0030]鈣黃綠素_A13++F_=A1Fx+鈣黃綠素。
[0031]南極磷蝦是已知的世界上體內含氟最高的甲殼動物，是典型的在高氟壓力環境下利用氟得以生存，是抗氟毒性最強的動物，具有很大的科學研究價值。本發明以鮮南極磷蝦身體的不同部位為組織材料，經甲醛固定，冷凍切片，鋁-鈣黃綠素熒光染液染色，封片等過程制作玻片。該玻片在熒光倒置顯微鏡下可見南極磷蝦無機氟顆粒呈黃綠色熒光，在蝦殼內呈星點狀分布，在蝦殼近外層呈層狀分布，在蝦殼外突起部分有無機氟存在。本發明的南極磷蝦蝦殼無機氟原位顯示玻片是特別好的科研教學材料，建議推廣應用。
【專利附圖】
【附圖說明】
[0032]圖1:在熒光倒置顯微鏡下觀察載玻片，可見富氟的黃綠色熒光顆粒在甲殼內呈星點狀分布。
[0033]圖2:在熒光倒置顯微鏡下觀察載玻片，可見富氟的黃綠色熒光顆粒在甲殼近外側下呈層狀分布。
[0034]圖3:在熒光倒置顯微鏡下觀察載玻片，可見蝦殼外表突起部分富氟呈黃綠色。【具體實施方式】
[0035]下面結合實施例對本發明作進一步的說明。
[0036]實施例1制作南極磷蝦蝦殼無機氟原位顯示玻片[0037](一)實驗前準備:
[0038]A.制備無氟水:
[0039](I)稱量1.0Og分析純氯化鉀，加入9ml三蒸水中溶解，配成10%的KCl溶液；
[0040](2)量取300ml三蒸水于錐形瓶中，加入6滴(每滴0.2ml)上述10%的KCl溶液，充分混勻；
[0041](3)用加熱套220°C加熱錐形瓶，冷凝回流，收集液體。
[0042]B.制備鋁-鈣黃綠素熒光染液:
[0043](I)制備1.00Xl(T3mol/L鈣黃綠素儲備液:稱取0.0623g鈣黃綠素，用0.1mol/LKOH溶液(用無氟水配制)IOml溶解，250W, 28KHz, 10°C，12分鐘，超聲波輔助溶解，后用無氟水定容于IOOmL棕色容量瓶中，搖勻，放入冰箱中4°C保存。
[0044](2)制備 1.0OX 10_2mol/L 鋁儲備液:稱取 0.1876gAl (NO3)3.9H20，溶于少量無氟水后，再移入50mL容量瓶中以無氟水稀釋定容，搖勻，放入冰箱中4°C保存。
[0045](3)制備鋁-鈣黃綠素熒光染液:用無氟水將鈣黃綠素儲備液稀釋至1.0OX 10_4mol/L，并與鋁儲備液以體積比5.5:4.5的比例混合均勻，用濃度為0.lmol/L的KOH溶液調節pH至8.9，室溫避光靜置48h后除去上清液，用制備的無氟水調節pH至8.9后多次沖洗絮狀沉淀，直至在熒光倒置顯微鏡下觀察不到黃綠色熒光顆粒，然后將沉淀溶于PH為8.9的無氟水(沉淀與無氟水的用量關系是體積比為1:9)，得鋁-鈣黃綠素熒光染液。
[0046]C.載玻片的處理:用無水乙醇浸泡5分鐘后取出，晾干備用。
[0047](二)實驗過程:
[0048]1.取材:稱取適量的冷凍貯藏的鮮南極磷蝦整蝦，冷藏室自然解凍。取出后浸入質量分數4%甲醛溶液24小時后再取出浸入質量分數15%蔗糖溶液至沉入底部，放入冰箱中4°C保存。對南極磷蝦尾部截取0.5cm長進行冷凍切片。
[0049]2.冷凍切片:
[0050](I)開啟冷凍切片機并將冷凍切片機預降至_26°C。準備好處理好的載玻片、刀片、膠水以及組織樣品。
[0051](2)取出組織支承器，放平擺好組織，周邊滴上包埋劑500 μ L，速放于冷凍臺上冰凍，用吸熱器壓住組織，至包埋劑與組織凍結成白色冰體即可切片。
[0052](3)將冷凍好的組織塊，夾緊于切片機支承器上，啟動粗進退鍵，轉動旋鈕，將組織修平。
[0053](4)調節好欲切的厚度，30 μ m。
[0054](5)調好防卷板，進行切片。
[0055]3.將切片10°C晾干。
[0056]4.將切片置于載玻片上，用鋁-鈣黃綠素熒光染液30 μ L進行染色2h，晾干。觀察載玻片，可見富氟的黃綠色熒光顆粒在甲殼內成星點狀分布(圖1)。選取在熒光倒置顯微鏡下(0LYMPUSIX71)顯示原位富氟位置最清楚的玻片，滴加中性樹膠20μ L，然后加上蓋玻片，封片晾干24h，用于科研和教學，在熒光倒置顯微鏡下，物鏡的放大倍數為10X，目鏡的放大倍數為4X的條件下觀察，可見所制玻片在南極磷蝦蝦殼中存在星狀分布的黃綠色的熒光顆粒。[0057]實施例2制作南極磷蝦蝦殼無機氟原位顯示玻片
[0058](一)實驗前準備:
[0059]A.制備無氟水的方法同實施例1。
[0060]B.制備鋁-鈣黃綠素熒光染液:
[0061](I)制備1.00X10_3mol/L鈣黃綠素儲備液:稱取0.0623g鈣黃綠素，用0.1mol/LKOH溶液(用無氟水配制)IOml溶解，250W, 28KHz,20°C，5分鐘，超聲波輔助溶解，后用無氟水定容于IOOmL棕色容量瓶中，搖勻，放入冰箱中4°C保存。
[0062](2)制備 1.0OX l(T2mol/L 鋁儲備液:稱取 0.1876gAl (NO3)3.9H20，溶于少量無氟水后，再移入50mL容量瓶中以無氟水稀釋定容，搖勻，放入冰箱中4°C保存。
[0063](3)制備鋁-鈣黃綠素熒光染液:用無氟水將鈣黃綠素儲備液稀釋至1.0OX 10_4mol/L，并與鋁儲備液以體積比6.5:5.5的比例混合均勻，用濃度為0.lmol/L的KOH溶液調節pH至8.9，室溫避光靜置48h后除去上清液，用制備的無氟水調節pH至8.9后多次沖洗絮狀沉淀，直至在熒光倒置顯微鏡下觀察不到黃綠色熒光顆粒，然后將沉淀溶于PH為8.9的無氟水(沉淀與無氟水的用量關系是體積比為1:9)，得鋁-鈣黃綠素熒光染液。
[0064]C.載玻片的處理:用無水乙醇浸泡10分鐘后取出，晾干備用。
[0065](二)實驗過程:
[0066]1.取材:稱取適量的冷凍貯藏的鮮南極磷蝦整蝦，冷藏室自然解凍。取出后浸入質量分數4%甲醛溶液24小時后再取出浸入質量分數25%蔗糖溶液至沉入底部，放入冰箱中4°C保存。對南極磷蝦胸部截取Icm長進行冷凍切片。
[0067]2.冷凍切片:
[0068](I)開啟冷凍切片機并將冷凍切片機預降至_26°C。準備好處理好的載玻片、刀片、膠水以及組織樣品。
[0069](2)取出組織支承器，放平擺好組織，周邊滴上包埋劑1000 μ L，速放于冷凍臺上冰凍，用吸熱器壓住組織，至包埋劑與組織凍結成白色冰體即可切片。
[0070](3)將冷凍好的組織塊，夾緊于切片機支承器上，啟動粗進退鍵，轉動旋鈕，將組織修平。
[0071](4)調節好欲切的厚度，60 μ m。
[0072]( 5)調好防卷板，進行切片。
[0073]3.將切片25°C晾干。
[0074]4.將切片置于載玻片上，鋁-鈣黃綠素染液50 μ L進行染色2h，晾干。選取在熒光倒置顯微鏡下顯示原位富氟位置最清楚的玻片，滴加中性樹膠40 μ L，然后加上蓋玻片，封片晾干24h，用于科研和教學，在熒光倒置顯微鏡下，物鏡的放大倍數為10X，目鏡的放大倍數為4X的條件下觀察。所制玻片觀察可見富氟的黃綠色熒光顆粒在甲殼近外側下呈層狀分布(圖2)。
[0075]實施例3制作南極磷蝦蝦殼無機氟原位顯示玻片
[0076](一)實驗前準備:
[0077]A.制備無氟水的方法同實施例1。
[0078]B.制備鋁-鈣黃綠素熒光染液:[0079](I)制備1.00X10_3mol/L鈣黃綠素儲備液:稱取0.0623g鈣黃綠素，用0.1mol/LKOH溶液(用無氟水配制)IOml溶解，250W, 28KHz, 15°C，8分鐘，超聲波輔助溶解，后用無氟水定容于IOOmL棕色容量瓶中，搖勻，放入冰箱中4°C保存。
[0080](2)制備 1.0OX 10_2mol/L 鋁儲備液:稱取 0.1876gAl (NO3)3.9H20，溶于少量無氟水后，再移入50mL容量瓶中以無氟水稀釋定容，搖勻，放入冰箱中4°C保存。
[0081](3)制備鋁-鈣黃綠素熒光染液:用無氟水將鈣黃綠素儲備液稀釋至
1.0OX 10_4mol/L，并與鋁儲備液以體積比6:5的比例混合均勻，用濃度為0.lmol/L的KOH溶液調節PH至8.9，室溫避光靜置48h后除去上清液，用制備的無氟水調節pH至8.9后多次沖洗絮狀沉淀，直至在熒光倒置顯微鏡下觀察不到黃綠色熒光顆粒，然后將沉淀溶于PH為8.9的無氟水(沉淀與無氟水的用量關系是體積比為1:9)，得鋁-鈣黃綠素熒光染液。
[0082]C.載玻片的處理:用無水乙醇浸泡8分鐘后取出，晾干備用。
[0083](二)實驗過程:
[0084]1.取材:稱取適量的冷凍貯藏的鮮南極磷蝦整蝦，冷藏室自然解凍。取出后浸入4%甲醛溶液24小時后再取出浸入20%蔗糖溶液至沉入底部，放入冰箱中4°C保存。對南極磷蝦腹部截取0.7cm長進行冷凍切片。
[0085]2.冷凍切片。
[0086](I)開啟冷凍切片機并將冷凍切片機預降至_26°C。準備好處理好的載玻片、刀片、膠水以及組織樣品。
[0087](2)取出組織支承器，放平擺好組織，周邊滴上包埋劑800 μ L，速放于冷凍臺上冰凍，用吸熱器壓住組織，至包埋劑與組織凍結成白色冰體即可切片。
[0088](3)將冷凍好的組織塊，夾緊于切片機支承器上，啟動粗進退鍵，轉動旋鈕，將組織修平。
[0089](4)調節好欲切的厚度，40 μ m。
[0090](5)調好防卷板，進行切片。
[0091]3.將切片15°C晾干。
[0092]4.將切片置于載玻片上，鋁-鈣黃綠素染液40 μ L進行染色2h，晾干。選取在熒光倒置顯微鏡下顯示原位富氟位置最清楚的玻片，滴加中性樹膠30 μ L，然后加上蓋玻片，封片晾干24h，用于科研和教學，在熒光倒置顯微鏡下，物鏡的放大倍數為10X，目鏡的放大倍數為4X的條件下觀察，所制玻片觀察可見蝦殼外表突起部分富氟呈黃綠色(圖3)。
【權利要求】
1.一種南極磷蝦蝦殼無機氟原位顯示的方法，其特征在于:包括以下步驟: (一)前期準備: A.制備鋁-鈣黃綠素熒光染液: (1)制備1.00X10-3mol/L鈣黃綠素儲備液:溶劑為無氟水，配制后儲存在棕色瓶中，備用； (2)制備1.0OX 10 2mol/L招儲備液:溶劑為無氣水，配制后備用； (3)制備鋁-鈣黃綠素熒光染液:用無氟水將鈣黃綠素儲備液稀釋至1.00X10_4mol/L，并與鋁儲備液以體積比5.5?6.5:4.5?5.5的比例混合均勻，用0.lmol/L的KOH溶液調節pH至8.9，室溫避光靜置48h后除去上清液，用pH為8.9的無氟水多次沖洗絮狀沉淀，直至在熒光倒置顯微鏡下觀察不到黃綠色熒光顆粒，然后將沉淀溶于pH為8.9的無氟水，得鋁-鈣黃綠素熒光染液； B.載玻片的處理:取載玻片，用無水乙醇浸泡5?10分鐘后取出，晾干，備用； (二)制作玻片: (1)取材:稱取冷凍貯藏的鮮南極磷蝦整蝦，冷藏室自然解凍，浸入質量百分數為4%甲醛溶液24小時，再取出浸入質量百分數15%?25%蔗糖溶液至沉入底部，放入冰箱中4°C保存；取南極磷蝦胸、腹或/和尾部位的組織，截取0.5?Icm長進行下一步的冷凍切片； (2)冷凍切片； (3)上述切片后，將切片在10?25°C下晾干； (4)用鋁-鈣黃綠素染液20?40μ L進行染色2h，晾干；滴加中性樹膠40?60 μ L，然后加上蓋玻片，封片后晾干24h，即得可顯示南極磷蝦蝦殼中無機氟原位的玻片。
2.根據權利要求1所述的南極磷蝦蝦殼無機氟原位顯示的方法，其特征在于:所述無氟水是通過以下方法制備得到的: ①稱量1.0Og分析純氯化鉀，加入9ml三蒸水中溶解，配成10%的KCl溶液； ②量取300ml三蒸水于錐形瓶中，加入6滴上述10%的KCl溶液，充分混勻； ③用加熱套220°C加熱錐形瓶，冷凝回流，收集液體，即得無氟水。
3.根據權利要求1所述的南極磷蝦蝦殼無機氟原位顯示的方法，其特征在于:所述步驟(一)A.(I)的具體方法為:稱取0.0623g鈣黃綠素，用IOml0.lmol/L的KOH溶液溶解，250W，28KHz，10?20°C，5?12分鐘，超聲波輔助溶解，然后用無氟水定容于IOOmL棕色容量瓶中，搖勻，放入冰箱中4°C保存；備用。
4.根據權利要求1所述的南極磷蝦蝦殼無機氟原位顯示的方法，其特征在于:所述步驟(一)A.(2)的具體方法為:稱取0.1876gAl (NO3)3.9H20，溶于無氟水中，再移入50mL容量瓶中以無氟水稀釋定容，搖勻，放入冰箱中4°C保存，備用。
5.根據權利要求1所述的南極磷蝦蝦殼無機氟原位顯示的方法，其特征在于:所述步驟(二)(2)冷凍切片具體為:開啟冷凍切片機并將冷凍切片機預降至所需溫度，取出組織支承器，放平擺好上述截取的組織，周邊滴上包埋劑500?1000 μ L，速放于冷凍臺上冰凍，用吸熱器壓住組織，至包埋劑與組織凍結成白色冰體即可切片。
6.根據權利要求5所述的南極磷蝦蝦殼無機氟原位顯示的方法，其特征在于:所述切片的具體方式為:將冷凍好的組織塊夾緊于切片機支承器上，啟動粗進退鍵，轉動旋鈕，將組織修平；然后，調節欲切的厚度為30?60 μ m ;調好防卷板，進行切片。
【文檔編號】G01N1/28GK103837387SQ201410075609
【公開日】2014年6月4日 申請日期:2014年3月3日 優先權日:2014年3月3日
【發明者】阮瑋, 蘇樹朋, 劉代成 申請人:山東師范大學