一種hplc法測定青蒿素含量和有關物質方法
【專利摘要】本發明涉及一種新的HPLC法測定青蒿素含量及有關物質的方法，流動相選用乙腈-水進行梯度洗脫，檢測器為紫外檢測器，檢測波長為216nm。該方法準確可靠，分離效果好，專屬性強，靈敏度高，可用于青蒿素原料藥中青蒿素含量和有關物質的測定和質量控制。
【專利說明】一種HPLC法測定青蒿素含量和有關物質方法
【技術領域】
[0001]本發明涉及一種HPLC法測定青蒿素含量及有關物質的方法，屬于藥物分析領域。【背景技術】
[0002]青蒿素是由菊科植物黃花蒿(又名青蒿)所提煉出來的倍半萜內酯化合物，是治療惡性瘧原蟲所引發的瘧疾的特效藥。目前已有很多文獻報道青蒿中青蒿素的含量測定方法，對于青蒿素原料藥中青蒿素含量及有關物質的的測定還鮮有研究，《中國藥典》2010版青蒿素的含量和相關物質的測定是高效液相色譜法，流動相選用乙腈-水(6:4)等度洗脫，等度洗脫不能完全分離青蒿素原料中的有關物質，對于青蒿素有關物質的檢測具有一定的局限性，本發明采用梯度洗脫，建立一種新的青蒿素原料藥中青蒿素含量和有關物質的高效液相色譜法，能更準確、高效地測定青蒿素中有關物質的含量，對于青蒿素原料藥的檢測和質量控制具有重要的意義。
【發明內容】
[0003]本發明的目的是提供一種更準確、高效的測定青蒿素含量和有關物質的HPLC方法，用于青蒿素原料藥的質量控制。
[0004]本發明提供了一種HPLC法測定青蒿素有關物質的方法，其選用十八烷基鍵合硅膠色譜柱，以乙腈-水為流動相進行梯度洗脫，檢測波長為216nm。
[0005]在本發明的一些實施方案中，所述十八烷基鍵合硅膠色譜填料顆粒度為3-5 iim，優選4.6 u mo
[0006]在本發明的一些實施方案中，色譜柱的長度為150mm-250mm，選用150mm色譜柱，流速為0.8ml/min,選用250mm色譜柱,流速為1.0ml/min。
[0007]在本發明的一些實施方案中，所述乙腈-水梯度洗脫的體積比為60%:40%(Omin),60%:40% (20min)，100%:0% (35min)，60%:40% (45min)，60%:40% (55min)。
[0008]在本發明的一些實施方案中，檢測波長優選216nm。
[0009]本發明提供的一種HPLC法測定青蒿素有關物質的方法，其包括以下步驟:
取青蒿素原料藥適量，用乙腈溶解并定容，配制成青蒿素濃度為5mg/ml的供試品溶液。
[0010]取青蒿素標準品適量，用乙腈溶解并定容，配制成青蒿素濃度為5mg/ml標準品溶液。分別取供試品溶液和標準品溶液，注入液相色譜儀，按照本發明色譜條件進行測定，所得峰面積按外標法計算供試品中青蒿素的含量。色譜條件為:色譜柱填料選用十八烷基鍵合硅膠，以乙腈-水為流動相按梯度洗脫，其中乙腈和水的體積比為60%:40%(Omin)，60%:40%(20min)，100%:0%(35min)，60%:40%(45min)，60%:40%(55min)，流速為 0.8ml/mirTl.0ml/min,檢測波長為216nm,進樣體積為20ii I。
[0011 ] 取上述青蒿素標準品溶液Iml置于200ml容量瓶，用乙腈稀釋至定容，配制成青蒿素濃度為0.025mg/ml對照品溶液。分別取供試品溶液和對照品溶液，注入液相色譜儀，按照本發明色譜條件進行測定，供試品如有雜質峰，雜質含量按如下公式計算:
有關物質含量=(Al*l*10* W2)/( A2*10*200* ffl)
其中，Al為待測供試品溶液中雜質峰的峰面積；
A2為對照品溶液中青蒿素峰的峰面積；
Wl為配制青蒿素供試品溶液時稱量的重量；
W2為配制青蒿素標準品溶液時稱量的重量。
[0012]色譜條件為:色譜柱填料選用十八烷基鍵合硅膠，以乙腈-水為流動相按梯度洗脫，其中乙腈和水的體積比為 60%:40%(Omin)，60%:40%(20min)，100%:0%(35min)，60%:40%(45min), 60%:40%(55min),流速為 0.8ml/min?1.0ml/min,檢測波長為 216nm,進樣體積為20 u 10
[0013]分別取供試品溶液和標準品溶液，注入液相色譜儀，按照本發明色譜條件進行測定，所得供試品主峰和標準品主峰的峰面積按照外標法計算青蒿素原料藥中青蒿素的含量。
[0014]色譜條件為:色譜柱填料選用十八烷基鍵合硅膠，以乙腈-水為流動相按梯度洗脫，其中乙腈和水的體積比為 60%:40%(Omin)，60%:40%(20min)，100%:0%(35min)，60%:40%(45min), 60%:40%(55min),流速為 0.8ml/min?1.0ml/min,檢測波長為 216nm,進樣體積為20 u 10
【專利附圖】
【附圖說明】
[0015]圖1為諾華青蒿素色譜圖。
[0016]圖2為青蒿素標準品色譜圖。
[0017]圖3為青蒿素對照品色譜圖。
具體實施方案
[0018]實施例1
實驗材料、儀器與色譜條件
青蒿素供試品，購自諾華制藥，青蒿素含量為99.0%,單雜為0.43%,總雜為0.6%, 0.25%與0.5%質檢的雜質個數為I個。青蒿素標準品，購自北京藥品生物制品檢定所，含量為98.8%。
[0019]高效液相色譜儀選用美國Agilentl260型號儀器，檢測器為DAD檢測器，色譜柱為thermo C18,4.6mmX 250mm, 5 y m,檢測波長為216nm,進樣量:20 y I (自動進樣)，流速:lml/min,流動相:乙腈-水梯度洗脫,其梯度比如表I。
[0020]表1.乙腈-水梯度比
【權利要求】
1.一種HPLC法測定青蒿素含量及有關物質的方法，其特征在于選用十八烷基鍵合硅膠色譜柱，以乙腈-水為流動相進行梯度洗脫，檢測器為紫外檢測器，檢測波長為216nm。
2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述十八烷基鍵合硅膠色譜柱填料的顆粒粒徑為3-5 u m。
3.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，選用柱長為150mm色譜柱時，流速為0.8ml/min,選擇柱長為250mm色譜柱時,流速為1.0ml/min。
4.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，乙腈-水梯度洗脫的體積比為60%:40%(Omin)，60%:40%(20min), 100%:0%(35min), 60%:40%(45min), 60%:40%(55min)。
5.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，檢測器為紫外檢測器，DAD檢測器和VWD檢測器均適用，檢測波長為216nm。
【文檔編號】G01N30/02GK103808826SQ201410071144
【公開日】2014年5月21日 申請日期:2014年3月1日 優先權日:2014年3月1日
【發明者】彭學東, 張梅, 趙金召, 申造 申請人:江蘇斯威森生物醫藥工程研究中心有限公司